临床微生物检验标本的采集运送及接种要点.ppt

1、临床微生物检验标本的采集、运送及接种要点,泰兴市人民医院检验科微生物室 刘鸿丽,第一节 标本的采集和处理原则,1.早期采集 2.无菌采集 3.根据目的菌的特性用不同的方法采集 4.采集适量标本 5.安全采集,一、标本采集的一般原则,一些对环境敏感的细菌如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌和流感嗜血杆菌等应保温并立即送检 厌氧性标本应放在专门的运送瓶或试管内运送，有时可直接用抽取标本的注射器运送。,二、标本的处理,其他所有的标本采集后最好在2h之内送到实验室。若不能及时送检，标本应置于一定环境中保存，如支气管洗液、心包液、痰、尿等标本应保存在4环境中，血标本需室温保存或置35-37孵箱中,脑脊液等则要在2

2、5保存。 患者标本中可能含有大量致病菌，不管标本运送距离远近，都必须注意安全防护。标本切勿污染容器的瓶口和外壁，容器必须包装好，防止送检过程中倒翻或碰破流出。,临床常见微生物学检验标本通常有血液、脑脊液、尿液、伤口的脓液、胸水、腹水、粪便、痰液及泌尿生殖系统的分泌物等，下面分别介绍各种标本的采集方法及运送。,第二节 血液,1.皮肤消毒程序 严格执行以下三步法: (1) 70%酒精擦拭静脉穿刺部位待30秒以上。 (2) 1%2%碘酊作用60秒或10 %碘伏6090秒， 从穿刺点向外画圈消毒,至消毒区域直径达3cm以上。 (3) 70%酒精脱碘：对碘过敏的患者，用70%酒精消 毒60秒，待酒精挥发

3、干燥后采血。,一、 标本采集,2.采血部位 通常采血部位为肘静脉。 疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。 对疑为细菌性骨髓炎或伤寒患者，在病灶或者髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作增菌培养。,3. 静脉穿刺和培养瓶接种程序 在穿刺前或穿刺期间，为防止静脉滑动，可戴乳胶手 套固定静脉，不可接触穿刺点。 (2) 用注射器无菌穿刺取血后，勿换针头直接注入血培养 瓶，或严格按厂商推荐的方法采血。 (3) 血标本接种到培养瓶后，轻轻颠倒混匀以防血液凝固。 立即送检，切勿冷藏。 4.采血量 自动化仪器要求成人采血量是810 ml/瓶，儿童15 ml/瓶。,5.血培养次数和采血时间 只要

4、怀疑血液细菌感染，应即刻采集。 采血培养应该尽量在使用抗菌药物之前进行，在1h内采集23次做血培养。 对间歇性寒战或发热应在寒战或体温高峰到来之前0.51h 采集血液，或于寒战或发烧后1h进行。 入院前两周内接受抗菌药物治疗的患者，连续3d，每天采2 份。 6.标本运送 采血后应该立即送检,如不能立即送检，可室温保存，切勿冷藏。,第三节 脑脊液,以70%的酒精或2%碘酊消毒背部下方，并麻醉之，然后以一特制通管针，轻轻的由第三与第四腰椎间的中线部位穿刺入脊髓蜘蛛膜，采集约3-5ml脑脊液于3支无菌试管中，每支试管至少1-2ml,第一支做细菌培养，整个过程以最严格的无菌操作技术进行。做脑脊液培养时

5、，建议同时做血培养。,一、标本采集,二、标本运送,采集后标本应置于无菌密封容器立即送检或在15min内送至实验室并且保温（禁止放冰箱，因脑膜炎双球菌遇冷死亡）。某些细菌具有自溶酶，放置时间过长易自溶死亡，实验室收到标本后应立即接种。,第四节 脓液、穿刺液和引流液,脓液：用无菌盐水或70%酒精拭去表面渗出物，尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口前沿取样（接近肉芽组织的脓液）。 穿刺液及引流液：由临床医生无菌采集胸腔、腹腔积液、关节液及心包积液等，置无菌试管中送检。 厌氧菌感染的脓液常有腐臭应予注意。特别要注意避免正常菌群所污染以及由采集至接种前尽量避免接触空气。,一、标本采集,第五节 痰液,自然

6、咳痰法 以晨痰为佳，尽可能在用抗菌药物之前采集标本。用力咳出呼吸道深部的痰，将痰液直接吐入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口带盖的容器中，标本量应1ml。,一、标本采集,支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和支气管肺泡灌洗法均由临床医生按相应操作规程采集，但必须注意采集标本时尽可能避免咽喉部正常菌群的污染。,小儿取痰法 用弯压舌板向后压舌，将拭子伸入咽部，小儿经压舌刺激咳痰时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上送检。幼儿还可用手指轻叩胸骨柄上方，以诱发咳痰。 注意：对可疑烈性呼吸道传染病（如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等）患者采集检验标本时必须注意生物安全

7、防护。,三、标本运送,常温2h内送检实验室。因时间延长可能引起革兰氏阴性菌的过度繁殖，嗜血杆菌和肺炎链球菌的死亡。 注： 鳞状上皮细胞细胞25/低倍视野为合格的痰标本特别是有细菌被白细胞吞噬的现象时更有临床意义；,第六节 粪便,用药前自然排便，采集脓血、黏液部分23g。 外观无异常的粪便应从粪便的表面不同部位取材。 液体便取絮状物12ml,置无菌容器内送检。 如排便困难或婴幼儿患者，可用直肠拭子法采集标本。,一、标本采集,粪便标本送检 对住院的腹泻成人患者，应采集住院3日内粪便标本送检，标本采集后应尽快送检，有条件的提倡使用运送培养基。,消化道溃疡、幽门螺杆菌标本可取胃窦和胃体等部位各一块胃黏

8、膜活检标本，置入无菌生理盐水中立即送检，或将标本放于运送培养基，于4保存，24h内送检。,第七节 尿液,力争在使用抗生素之前，注意避免消毒剂污染标本。 清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本；嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后按尿标本采集消毒程序消毒后，开始排尿，将前段尿排去，留取中段尿。 耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液。 直接导尿：按尿标本采集消毒程序消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取尿液。 留置导尿管收集尿液：利用留置管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液。注意不能从尿液收集袋中采集尿液。,一、标本采集,采集容器的

9、要求：洁净、无菌、加盖、封闭、防渗漏、广口、容积应 50 ml、盒盖易于开启，不含防腐剂和抑菌剂。 标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2小时（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），4冷藏保存时间不得超过8小时。但应注意淋病奈瑟菌培养时标本不能冷藏保存。,第八节 生殖道标本,一、标本采集,采集前清洁、消毒尿道口及外阴，尿道分泌物可将无菌棉拭子伸入尿道34cm捻转拭子采集。 阴道分泌物采集时可用无菌棉拭子自阴道深部或阴道穹隆后部，宫颈23cm处，转动并停留1030s取分泌物。,淋球菌培养需保温及时送检，衣原体、支原体等培养无法及时送检时应4保存。,第九节 厌氧培养标本的采集,最好

10、以针筒直接由病灶处抽取标本，一般情况下应从无正常菌群寄居的部位采取标本,一、 标本采集与运送,不宜做厌氧菌培养 鼻咽拭子；齿龈拭子；痰和气管抽取物；胃和肠道内容物、肛拭；接近皮肤和黏膜的分泌物；褥疮溃疡及黏膜层表面；排出的尿或导尿；阴道或子宫拭子；前列腺分泌物。,经皮肤黏膜组织采集标本时，皮肤表面需要2%碘酒消毒，以防正常菌群的污染。 采取标本时应尽量避免接触空气，多使用针筒抽取，减少标本与空气接触的机会。,平板接种（分区划线法） 斜面接种法 穿刺培养法 液体培养基接种法,细菌接种技术,用于标本的分离培养，通常采用四区划线法(尿液、留置管除外) 1、操作者坐在微型加热器前，右手持接种环将圈环至

11、少烧红两次，再接触标本或菌种。 2、左手正持平板（盖上底下），轻轻将平板盖打开少许，将接种环涂于平板的1/4区域，将接种环烧红，待冷却后接触第一区边缘4-5次，再涂划平板的另外1/4区域（第二划线区），以同样的方式进行第三区及第四区的涂划。也可反持平板（底上盖下）的底部迅速涂划各区。 3、尿液标本定量加入后，垂直划线即可。 4、导管标本直接放到血平板上用接种环滚动4次即可。 5、涂划完毕后，平板合盖，标明标本的编号、标本种类、病人姓名和送检时间，再倒置(盖下底上)于CO2培养箱(粪便除外)培养。 6、接种完毕后，接种环必须再通过火焰烧红一次，作为灭菌。,分区划线法,用于鉴定或保存菌种，或观察细

12、菌的某些生化特征和动力。 1、用左手握住斜面培养管底部，右手持接种针（环）。 2、用右手小指与手掌拔出管的塞子，将管口通过火焰灭菌。 3、用烧红过的接种针挑取菌落。 4、将接种针垂直插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基中下部（不要到底部），然后沿原穿刺线退出接种针。 5、伸入到斜面培养管内，先从斜面底部到顶端拖一条接种线，再自下而上地呈“Z”划线。 6、接种完，火焰灭菌管口，塞上塞子。,斜面接种法,此法用于观察动力及某些生化反应。 1、以接种针挑取细菌培养物，插入半固体培养基的中央，穿刺至培养基底部，然后沿穿刺线退出接种针。 2、其他灭菌操作与斜面接种类似。,穿刺培养法,1、用灭菌接种环挑取菌落或标本。 2、在试管内壁与液面交界处轻轻研磨，使细菌混匀在液体培养基中。 3