课题2　土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (3)

1、主题2微生物的培养和应用，2.2分离和修订土壤中分解尿素的细菌，两个主要目的： (1)从土壤中分离可分解尿素的细菌，(2)每克土壤样品中含有多少这样的细菌。尿素分子的立体结构、CO(NH2)2 H2O、尿素酶催化剂、分解尿素的细菌：CO2 2NH3、培养基配方、微生物学中，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基。 选择培养基，1直接修正数法：最常用的显微镜直接修正数法。 将测量对象的样品作为混悬剂，然后在测微器下对一定量的混悬剂进行计数。 由显微镜下观察到的微生物数量计算出每单位体积的微生物总数。 测定微生物数量的方法：背景知识、优点：设备简单，能观察微生物的形态

2、特征。 缺点：很难数出微量的细菌。 用于单纯培养混悬剂中各种单细胞球菌体的订正数。 2间接订正数法：最常用的稀释平板订正数法。 (2)计数菌落数、计数菌落数的理论依据：样品稀释度高时，培养基表面生长的菌落源于样品稀释液中的活菌。 因此，合适的稀释度是成功收集蚁群数的关键。 为了保证结果准确，通常在平板上涂抹几种稀释度的菌液，培养后选择菌落数为30300的平板进行计数。 每克样品菌株数=(CV)M，c :以一定稀释度在平板上生长的平均菌落数v :涂抹平板时使用的稀释液体积(ml) M :稀释倍数，修订的菌落多低于活菌的实际数量。 这是因为两个以上的细胞球相连时，在平板上观察到的只有一个菌落。 因

3、此，结果一般不用活菌数而用菌落数来表示。 注意，两个同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌计数。 对应于稀释倍数106的培养基得到以下两个整合结果。 1 .最初的同学以这个浓度涂抹平板，修订的菌落数为230。 2 .第二个同学在这个深度上涂了3个平板，修正的集群数分别是21、212和256，该同学把这些个3个平板的集群数的平均值163作为修正结果。 例1，你认为哪个同学的结果更接近真值，这两个同学的实验需要改进吗？ 如果需要的话，会怎样改善呢？ 因为最初的同学只涂了一块平板，没有设置重复组，结果没有说服力。 第二个学生考虑到设置重复组而涂了3块平板，但其中1块平板的修正数结果与另外2块有

4、很大不同，在操作中可能会产生错误，所以不能单纯地求出3块平板的修正数值的平均值。 因此，这两个学生的实验需要改进，在修订实验时，必须至少涂抹3块平板，作为重复组，提高实验的说服力和精准性。 分析实验结果时，必须考虑设定的重复组的结果是否一致，结果不一致意味着操作错误，需要再实验。 喀呖声，说明重复组设置的重要性。 在进行本课题的实验时，a先生从相应于106倍稀释的培养基中筛选了约150个菌落。 但是，其他同学在相同稀释度下只选择了约50个菌落。 其他同学认为a同学的结果有问题。 他们分析，可能是因为a先生的培养基被杂菌污染，或者培养基中混入了其他含氮物质，不能分解尿素的细菌也有可能在该培养基上

5、生长。 例2，但是，a先生确信自各儿的实验操作没错，和其他的学生的结果不同，是因为自各儿选出的土壤样本不同。 但是，a先生在修订实验的时候没有设置对照，所以这个时候也不能拿出让学生们接受的证据。 通过设置对照，能帮助a先生排除可能影响上述2个实验结果的要素吗？1个是土样的不同，2个是培养基污染和操作错误。 究竟是什么原因，实验可以证明。一个方案：其他同学可以和a同学在相同的土样下进行实验，如果结果与a同学一致，证明a没有错，则证明a先生的操作错误和培养基的调配有问题。 另一个方案是不加土样培养a先生制备的培养基，作为空白对照证明培养基是否被污染。 从这个事例可以看出，实验结果很有说服力，对照的

6、设定是不可缺少的。实验设施修订、分解土壤尿素的细菌分离和计数、土壤中某些样品细菌的分离和计数，取自肥沃湿润的土壤。 将表层土捞出3cm左右后进行采样，将样品放入事先准备好的信封中。 制备了实验步骤、1个土壤取样、5个牛肉糊膏培养基和15个选择培养基，准备了无菌试管和移液器。 实验顺序、2 .制备培养基，在装有90mL无菌生理盐溶液的玉米瓶中装入10g土，充分摇动吸取1mL上清液，转移到装有9mL水的无菌试管中，依次以等比稀释107稀释度，从107到103稀释度的顺序分别吸取0.1mL 实验顺序，3 .微生物的培养和观察，将涂布的培养皿放置在30下培养。 比较并记录牛肉糊培养基和选择培养基中菌落

7、的数量、形态等。 选择培养基中不同形态的菌落放入含酚红培养基的坡面，观察其是否变红。菌落数稳定时，选择菌落数为30300的平板进行计数。 以相同的稀释度，对至少3片平板反复进行修正数，求出平均值，根据与平板对应的稀释度计算试样中的细菌计数。 实验步骤，4 .细菌计数，土壤样品菌数=某稀释倍数的菌落平均稀释倍数细菌培养时使用的稀释液体积，无菌操作1 .取土用小铲填土样品的信封在使用前需要灭菌。 2 .在火焰旁取土。 将火焰附近的土样放入锥形瓶，塞上棉塞。 3 .在稀释土壤溶液的过程中，每个步骤必须在火焰旁操作。操作提示、标记2个培养基种类、培养日、平板培养样品稀释度等。 3 .某学生在稀释倍数106的培养基上测得的平板上菌落数平均为234，每克样品的菌落数(涂布平板时使用的稀释液体积为0.1ml ) () a.2.34108b.2.34109c.234d.23 1 .某学生在稀释倍数106的培养基上测得的平均菌落数为234，每克样品的菌落数(涂布平板时使用的稀释液体积为0.1 ml ) () a.2.3