蛋白质检测方法

1、蛋白质的检测(参照GB/T6432-94 )一、原理笼氮法是试样中的氮含量，即催化剂用浓硫酸破坏有机物，使含氮物变成硫酸铵。 加入强碱进行蒸馏使氮溢出，用酸滴定测定氮含量，结果乘以换算系数6.25计算出粗蛋白含量。二、试剂(1)硫酸化学纯、含量98%、无氮(2)混合有催化剂，含有硫酸铜0.4g、结晶水5个、硫酸钾元素6g或硫酸纳米金属钍6g，均为化学纯，进行磨碎混炼(3)氢氧化纳金属钍化学纯、40%水溶液(m/V )；(4)硼酸化学纯、2%水溶液(m/V )；(5)指示剂甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液混合，两溶液体积相等，阴暗处储存期间3个月(6)盐酸标准溶液标准无水碳酸钠法

2、标定a) 0.1mol/l盐酸标准溶液：将8.3mL盐酸注入1000mL蒸馏水。b) 0.02mol/l盐酸标准溶液：将1.67mL盐酸注入1000mL蒸馏水。(7)蔗糖分析纯(8)硫酸铵的分析纯、干燥(9)加入硼酸吸收液1%硼酸水溶液1000mL、0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10mL、0.1%甲基红乙醇溶液7mL、4%氢氧化纳金属钍水溶液并混合，阴暗处储存期间为1个月(全部自动程序用)。三、仪器设备(一)实验室用样品粉碎机械或乳钵；(2)样品筛孔径0.45mm(40目)(3)分析天平感重0.0001g(4)煮菜炉或电炉(5)滴定管酸式，10，25ml；(6)凯氏烧瓶250毫升；(7)邢氏蒸馏设备

3、常数直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式(8)锥形瓶150、250mL(9)容量瓶100mL(10 )消煮管250mL(11 )氮量测仪器是根据凯氏的原理制造的各种类型的半自动全自动蛋白质量测仪器。四、分析程序(一)仲裁法1 .试样的消煮量取试样0.5-1g (氮含量5-80mg ) (精确地说是0.0002g )，放入凯式烧瓶，加入混合催化剂6.4g，与试样均匀混合，加入硫酸12mL和玻璃珠2粒，将凯式烧瓶放入电炉加热2 .阿摩尼亚的蒸馏(1)用常数蒸馏法蒸发制冷试样的消煮液，加入60-100mL蒸馏水，摇匀蒸发制冷。 将蒸馏设备的冷凝管的末端浸泡在装有25mL硼酸吸收液和两滴混合指示剂的锥形瓶中

4、。 之后，小心地将50mL氢氧化纳金属钍溶液加入到Kay式烧瓶中，轻轻摇动Kay式烧瓶，混合溶液后，加热蒸馏直至流出的液体体积达到100mL。 放下锥形瓶，将冷凝管的末端离开液面，继续蒸馏12分钟，将冷凝管的末端用蒸馏水洗净，洗液全部注入锥形瓶后停止蒸馏。(2)用半微量蒸馏法蒸发制冷试料的消煮液，加入蒸馏水20mL，转移至100mL容量瓶，蒸发制冷后用水稀释至刻度，振混制成试料分解液。 将半微量蒸馏设备的冷凝管的末端浸渍到装有20mL硼酸吸收液和两滴混合指示剂的锥形瓶中。 在蒸汽发生器的水中加入数滴甲基红指示剂，蒸馏过程中要将该液体保持在橘红色，否则要补充硫酸。 将试料分解液10-20mL正确

5、地注入蒸馏设备的反应室，用少量的蒸馏水洗净试料注入口，堵塞入口玻璃栓，再加入10mL的氢氧化纳金属钍溶液，慎重地提起玻璃栓使其流入反应室，堵塞玻璃栓，在入口加水密封，防止瓦斯气体泄漏。 蒸馏4分钟降低玉米瓶，使冷却管的末端离开吸收液面，再蒸馏1分钟，用蒸馏水清洗冷却管的末端，洗液全部注入玉米瓶中，之后停止蒸馏。注：两种蒸馏法测定结果相近，可选择其中一种。(3)蒸馏工序的检验要准确地取硫酸铵0.2g，代替样品而选择仲裁法或者推荐法“阿摩尼亚蒸馏”中的工序进行操作，硫酸铵的含量为21.19%0.2%。 否则，应检查加碱、蒸馏以及滴定的各工序是否正确。(2)推荐法1 .取样品的消煮量为0.5-1g的

6、样品(氮含量5-80mg ) (精确为0.0002g )，放入消化管，加入2枚消化片(仪器准备)或6.4g混合催化剂，在420下用消煮炉消化1h。 蒸发制冷后加入蒸馏水30mL。2 .阿摩尼亚蒸馏采用全自动氮量测仪器时，按照仪器本身的常数方案进行测定。在使用半自动氮量测仪器的情况下，将带有消化液的软管插入蒸馏设备中，以25mL硼酸作为吸收液，加入2滴混合指示剂，将蒸馏设备的冷却管的末端浸泡在装有吸收液的玉米瓶中，并在消煮管中加入50mL氢氧化纳金属钍溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以吸收液体积达到100mL为宜。 放下锥形瓶，用蒸馏水冲洗冷却管的末端，清扫液全部流入锥形瓶内。3 .滴定以0.1mol/

7、L的盐酸标准溶液滴定吸收液，溶液从蓝色变成红色为终点。五、空白测量采集蔗糖0.5g，代替样品进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸溶液的体积不得超过0.2mL。 消费0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。六、分析结果的订正和表述修正算法请参照下面的公式粗鸡蛋清质量=V2-V1c0.01406.25mVV100%式中，V2滴定试样时所需标准酸溶液体积、mL；V1滴定空白对照时所需的标准酸溶液体积，mL；c盐酸标准溶液浓度、摩尔/升；m试样质量，gV试样分解液的总体积，mLv3354试样分解液蒸馏用体积、mL；相当于0.0140盐酸参比溶液【c(hcl)=1.000mol/l】1.00ml，用克表示的氮的质量。6.25氮换算成蛋白质的平均系数。七、再现性当粗蛋白含量在25%以上时，容许相对偏差为1%。当粗蛋白含量在10%-25%以上时，容许相对偏差为2%。当粗蛋白含量在10%以下时，容许相对偏差为3%。浙江紫香糖业使用的氮量测仪器是上海新嘉型号： KDN-AZ知识分子二烯烃型氮量测仪器蒸馏器KDN-AZ知识分子二烯烃型氮量测仪器是本公司根据用户仪器自动化的需要而改进的半自动凯氏测量装置，在a型上安装自动蒸馏控制元件，使原来复杂的蒸馏控制更加简便，提高了操作效率，保证了样品测量的准确性，并且安装了自动排水系统，使用户测定范围