细菌培养基的制备、灭菌及接种、培养技术.ppt

1、1、实验2、细菌培养基的制备、灭菌和接种、培养技术、2、第一部分细菌培养基的制备、灭菌、目的实验材料试验方案、3、目的要求、玻璃容器的清洗和灭菌前的准备。 掌握培养基和无菌水的制造方法。 掌握高压蒸汽灭菌技术。 4、实验材料、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化纳金属钍、琼脂、蒸馏水等。 高压蒸汽灭菌锅，电烤箱，细菌过滤烟嘴，酒精灯。 其他：培养皿、试管、移液器、锥形瓶、烧酒、玻璃珠等。5、试验方案、玻璃容器的清洗和包装制备培养基的无菌稀释水调制培养基和玻璃器材等灭菌、6、试验方案1 (玻璃容器的清洗和包装)、玻璃容器(例如培养皿、移液器、试管等)清洗并干燥。 棉塞的制造包装培养皿和移液器等。7、试验方

2、案2 (培养基的种类)根据组成成分分为： 1 .合成培养基：各种纯化学物质以一定比例配制。 2 .半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 3 .天然培养基：利用天然来源的有机物制备的。 从培养基的物理状态来看，可分为1、液体培养基：不加凝固剂的液态培养基。 2 .固体培养基：在液体培养基中加入琼脂至1530g/L左右。 3 .半固体培养基：在液体培养基中加入琼脂35g/L左右。8、试验方案2 (培养基种类)、常用凝固剂为琼脂(其次为动物胶)，又称洋菜、冻干粉。 取、9、试验方案2 (培养基的制备方法和步骤)、300mL烧杯，加入蒸馏水150mL。 2 .按处方准确称量各成

3、分，依次加入水中溶解。 注意： a .前者的成分溶解后，可加入以下成分b。 促进各成分溶解的c .加热过程需要搅拌，使胶底不烧焦，适当补充因蒸发而失去的水量。10、试验方案2 (培养基的制备方法和步骤)、3 .以调pH值： 10 NaOH将pH调节至7.6，用精密pH试验纸进行对照。 4 .分注：将培养基分注5根试管，将其全部装入250mL锥形瓶，分别装棉塞。 注意不要弄脏绵塞和瓶口。 5 .用捆包好，加上标签条，标明哪种培养基。 6 .灭菌预备：培养基灭菌后，应在37中恒温培养24h，确定无菌生长后使用。 11、试验方案2 (培养基的分注和斜面培养基的制作)、每根试管的容纳量为试管长的1/4

4、1/3 .斜面长度为试管长的1/31/2 .12、试验方案2 (培养基的调制方法和步骤)、另外取5根18mm180mm的试管，分别加入蒸馏水9mL，装入棉无菌稀释水是微生物分离实验所必需的材料。14、试验方案4 (培养基和玻璃器材等的灭菌)、加热灭菌有干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌法：电气电烤箱是干热灭菌器的干热灭菌的操作方法a .把应该灭菌的放入恒温箱，把温度调节到160，维持2h的b .把恒温箱的调节旋钮调为零，温度降低到50左右，然后取出物品。15、试验方案4 (培养基和玻璃器材等的灭菌)、湿热灭菌：按照高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法的操作顺序，1 .在灭菌锅内加入一定量的水。 2 .将要

5、灭菌的东西放入锅中，盖好锅盖。 注意：器物不能装满。 3 .接通电源，加热。 4 .可以排除高压锅内的冷气，打开排气阀，关闭排气阀直到温度修正指示温度100，或者排出的蒸汽相当激烈，微脱衣舞为蓝色时关闭排气阀。、16、试验方案4 (培养基和玻璃器材等的灭菌)、5 .当压力达到1.05kg/cm2 (灭菌器内的温度为121 )时开始灭菌，维持1530min。 含有热不稳定的培养基，例如葡萄糖、氨基酸等时，适度降低压力(0.56kg/cm2)，延长时间。 6 .灭菌时间到了，切断电源，等到压力为零后，打开排气阀，打开灭菌器盖，取出物品，排出锅内残留的水。 7 .培养基冷却后在37恒温箱内培养24h

6、，无菌成长后放入冰箱和阴凉处保存。17、18、试验方案4 (培养基和玻璃器材灭菌方法)、间歇灭菌法：即常压灭菌，用于高温破坏的培养基灭菌。 操作方法： a .灭菌后放入灭菌器或蒸笼中，每天蒸煮一次，每次100煮沸3060min，连续3d重复进行。 b .在2次蒸煮期间，将物品(指培养基)在37恒温条件下培养24h，可使蒸煮后未杀死的剩馀芽胞每次在营养体上发芽，在下一次蒸煮时杀死。 c .第3次蒸煮后基本无菌，但为了确保无菌，在37恒温条件下培养24h，确定无菌后使用。19、试验方案4 (培养基和玻璃器材灭菌方法)、过滤灭菌法：不能加热灭菌的液体物质(例如，维生素、血清)，一般可以用细菌过滤烟嘴

7、灭菌。20、第二部分细菌纯种分离、培养和接种技术，目的是通过掌握实验材料试验方案、21、目的要求、从环境中分离培养细菌的方法，获得一些细菌纯培养技能。 掌握一些接种技术。22、实验材料、无菌培养皿(直径90mm)10定径套、无菌移液管1mL2根、10mL1根。 营养琼脂培养基1条，活性污泥或土壤或湖水1条，无菌稀释水90mL1条，9mL5条。 其他：接种环、酒精灯、恒温箱。23、试验方案、细菌的纯种分离细菌的接种方法、24、试验方案1 (细菌的纯种分离)、稀释平板法、25、试验方案1 (细菌的纯种分离稀释平板法)、1、采样2.1根90mL和5根9mL无菌水，用标记依次排列101、102、103

8、 在无菌操作条件下，以10mL的无菌移液器吸引10mL的水样(或其他样品)，放入编号101的无菌水(包括玻璃珠)中，喷射清洗3次移液器，以10min手将球团矿状样品分解。 即101浓度的菌液。 用无菌移液器1mL将101浓度的菌液1mL吸到编号102的无菌水中，喷射3次移液器进行清洗，振荡后变成102浓度的菌液。 以类似方式，依次稀释106。26、试验方案1 (细菌的纯种分离稀释平板法)、稀释液的制备、27、试验方案1 (细菌的纯种分离稀释平板法)、3 .平板的制作是取无菌培养皿编号10定径套、取104、105、106各3个的无菌移液器1根，从浓度小的菌液开始，取0.5mL菌液106、105，

9、 按104的顺序分别吸引到相应编号的培养皿内(每次吸引时，用移液器向菌液中喷射泡沫，将菌液混入一盏茶)。28、试验方案1 (细菌单纯分离稀释平板法)、3 .平板制作加热培养基冷却至45左右时，右手拿着装有培养基的玉米瓶，左手拿着培养皿，中指、无名指和小拇指支撑皿底，用大拇哥和食指夹住皿盖，接近火焰，29、试验方案1 (细菌纯种分离稀释) 3 .平板的制作与无菌培养皿对照，将平板倒下凝固后，皿盖10分钟后打开盖子，反转为30培养2448h，观察结果。30、试验方案1 (细菌的纯粹分离平板划线法)、1 .平板制作：将熔化至约50的冷却肉浆琼脂培养基放入无菌培养皿，使其凝固在平板上。2 .划线：用接

10、种环取出一环样品，用左手取出培养皿，用中指无名指和小拇指支承皿底，用大拇哥和食指夹住皿盖，稍微倾斜培养皿，用左手大拇哥和食指半开皿盖，用右手将接种环放入培养皿内，在平板上轻轻划线(不要切培养基) 划线结束后盖上碟盖，30培养2448h后观察结果。 31、试验方案1 (细菌单纯分离平板划线法)、32、试验方案2 (细菌接种技术)、接种方法：常用斜面接种法、平板接种法、液体接种法、试管深层固体培养基的穿刺接种法。 接种工具：常用的有接种针、接种环、接种钩状体、接种环、接种片和接种锹、玻璃棒等。图6、33、试验方案2 (细菌的接种技术斜面接种法)，左手扁平地支撑2根试管，大拇哥按压2根试管。 外侧为

11、菌种试管，内侧为接种空白斜面(两试管的斜面向上云同步)。 用右手拧松棉塞，接种时容易拔出。 右手拿着接种环，在火焰上将环端烤红灭菌后，可能进入试管的那个侑部也通火灭菌。 将两根试管上端对齐靠近火焰，用右手小拇指、无名指和手掌夹住两根试管棉塞进行挖墙脚，棉塞还夹在手里，将试管口慢慢地穿过火焰。1、2、3、34、试验方案2 (细菌的接种技术斜面接种法)，将焚烧后的接种环放入菌种试管内。 首先蒸发制冷后，用环取出少许菌种，在抽出接种环接种的试管底部迅速放入，在斜面上从底部向上划线。 抽出接种环，装入棉塞，在试管支架中插入试管，最后再次烧制红接种环，完成接种。 4、5、6、7、8、35、试验方案2 (细菌的接种技术液体接种和穿刺接种)、液体接种法(从斜面菌种):在接种环中采集斜面菌种，送入培养液中，在液体表面使环与管壁接触，轻轻研磨，手掌轻碰洗净环上所有菌种的试管，菌体均匀地分布在培养液中最后把接种环煎红灭菌。 穿刺接种法(从斜面菌种中装入(半)固体培养基):用接种针火焰灭菌后，取出少量菌种，从试管固体培养基的中心垂直通过底部，然后穿刺线缓慢拔出针，堵塞棉塞。 只需将红色的接种针进行烘烤灭菌，即可完成接种。 36、试验方案2 (细菌的接种技术稀释平板涂布法)、稀释样品：方法该稀释平板分离法逆平板：溶解冷却至50左右的培养基放入无菌培