需氧革兰阳性杆菌及检验

1、需氧革兰氏阳性杆菌及其检验，华中科技大学同济医学院附属联合医院熊燕，革兰氏阳性杆菌鉴定，第一部分，棒状杆菌和棒状杆菌的共同特征，栅栏排列不规则的革兰氏阳性多形杆菌，需氧或兼性厌氧酶接触试验阳性细胞壁结构，血清学分析证实它们与分枝杆菌和诺卡氏菌有共同成分。白喉棒状杆菌，(1)生物学特性，形态学和染色培养特性菌落特性生化反应抗原结构抗性，2020年7月27日，形态学和染色，细长而弯曲，一端或两端扩张的革兰氏阳性杆菌。没有胶囊，没有孢子，没有鞭毛，无菌的头发。细菌分散在l，v，y和不规则的栅栏中。当用亚甲蓝、奈塞尔法、艾伯特法等染色时。在细菌的一端或两端有密集的染色颗粒。这种颗粒不同于菌体染色，被称

2、为异染颗粒，这是这种细菌的一个重要的形态学特征，对细菌的鉴定有重要意义。2020/7/27，培养特性，需氧或兼性厌氧，生长温度1540，最适生长温度3537，pH7.27.8，营养要求高，虽然能在普通培养基上生长，但生长差，形态不典型，大多数需要特殊氨基酸。它在添加了血液、血清或卵的培养基上生长迅速，具有典型的形态和明显的异染颗粒。菌落特征，血片：灰白色，狭窄的溶血环。卵斜率和血清斜率：快速生长，灰白色和闪亮的菌落。亚碲酸钾血片：为选择培养基，菌落为黑色。菌落分为重、轻或中等。2020/7/27生化反应，与酶接触()，氧化酶(-)能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等。但产生酸但不产生气。不分解乳糖，大

3、多数不分解蔗糖。靛蓝基质试验、明胶液化、尿素分解、抗原构建、细菌O抗原：分枝杆菌和诺卡氏菌的共同抗原。k抗原：类型特异性抗原，不耐热。对湿热和一般消毒剂敏感。耐寒干燥。致病性和致病物质：白喉外毒素是由携带棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生的。作用机制：抑制细胞内蛋白质合成。通过呼吸道飞沫传播，导致白喉。白喉早期死亡的主要原因是伪膜脱落阻塞呼吸道。中毒性心肌炎是白喉晚期的主要死因。免疫力、抗白喉免疫力主要取决于白喉抗毒素的中和作用。绝大多数成年人都有免疫力，主要是由于隐性感染获得的免疫力。锡克试验是用来检测白喉抗毒素抗体的存在。(4)微生物检验、标本采集检验程序检验方法生化反应毒性试验、标本采集，使用

4、无菌长棉签，从疑似假膜边缘采集分泌物。疑似患者或无伪膜携带者可从鼻咽或扁桃体粘膜收集分泌物。检查程序、咽拭子标本、亚碲酸钾血平板、菌落特征观察、直接涂片革兰氏染色和异染颗粒染色、血平板、鲁氏血清斜面、直接涂片革兰氏染色和异染颗粒染色、涂片染色和显微镜生化反应毒性试验、检查方法、直接涂片革兰氏染色标本：形态学观察、异染颗粒染色：异染颗粒观察。初步报告：白喉棒状杆菌分离培养中卢氏斜面的检测：快速生长，在异染颗粒中有明显的涂片镜检。亚碲酸钾血片：黑色菌落，生化反应，不同种类的棒状杆菌可根据糖发酵是否产酸进行鉴定。白喉棒状杆菌发酵葡萄糖和麦芽糖产生酸而不分解蔗糖；脲酶()，硝酸盐还原试验()，等。可用

5、于区别于其他棒状细菌。毒力试验，意义：它是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据。方法埃里克平板毒力试验，对流电泳，协同凝集试验，动物实验，另外两种棒状杆菌，第二节需氧杆菌和芽孢杆菌有共同的特点，大多数菌株在需氧条件下形成的孢子直径不大于细菌的横径，但炭疽杆菌除外，它具有较强的溶血能力，对非耐酸营养的要求不高。在普通培养基上生长良好的炭疽杆菌，(1)生物学特性、形态和染色培养特性、菌落特性、生化反应抗原结构抗性、2020/7/27、形态和染色，是病原菌中最大的革兰氏阳性杆菌，两端齐平或凹陷，呈竹节状，单链或短链排列。没有鞭毛，形成孢子，有毒的菌株可以形成胶囊。人工培养或在外部环境中容易产生孢子，在活

6、体或完整的尸体解剖中不形成孢子，因此严禁解剖炭疽尸体。2020/7/27，培养特性，需氧或兼性厌氧。营养要求不高，在普通培养基上生长良好。2020/7/27，菌落特征，普通琼脂平板：菌落扁平，粗糙，不透明，灰白色，无光泽，边缘不规则，低倍镜下可见菌落边缘卷曲。血琼脂平板：培养1215小时后，菌落周围无溶血环，1824小时后，有轻微溶血，而大多数其它需氧杆菌溶血明显且迅速。有毒的冷杉植物在液体培养基中以絮状生长，在明胶培养基中倒置，在碳酸氢钠培养基中形成胶囊，菌落粘稠，有拉丝现象。将毒株在5%CO2中于碳酸氢钠血琼脂平板上培养1824小时，即可制成胶囊。菌落由粗糙型变为粘液型，呈半圆形，突起，有

7、光泽。当用接种针挑取时，是拉丝，这是鉴别菌落的关键点，而无毒菌株形成粗糙的菌落。生化反应，分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产生酸但不产生气体。不分解乳糖。触酶()、VP()、吲哚()、尿素()。抗原结构，炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子和水肿因子组成的蛋白质复合物。后两者单独不能发挥生物活性，必须与保护性抗原结合才能引起实验动物水肿和死亡。它具有抗吞噬作用和免疫原性，因此在遭受炭疽后具有免疫力。荚膜抗原：与细菌的毒力有关，失去荚膜后，毒力会消失。该抗原具有高度特异性，在临床诊断中具有鉴别诊断价值。2020/7/27，细菌抗原：耐热、抗腐、无毒和特异。孢子抗原：孢子的外膜含有抗原决定簇，与皮层一起构成

8、炭疽芽孢杆菌孢子的特异性抗原。该抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。子囊热沉淀反应：感染动物尸体组织的浸出液煮沸半小时后，耐热细菌抗原不被破坏，并能与特异性抗体发生循环沉淀反应，称为子囊热沉淀反应，对炭疽病有一定的诊断价值。这种细菌的繁殖体具有与其他细菌相同的抗性，其孢子具有很强的抗性。它能在干燥的土壤或毛皮中存活20多年。孢子对碘和氧化剂敏感。耐药性：该菌对磺胺类药物、青霉素、四环素和环丙沙星敏感。(2)致病性和免疫、致病物质：炭疽毒素和胶囊引起的疾病是通过多种途径感染的，引起炭疽。临床类型：肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症。这是一种高死亡率的人畜共患传染病。免疫力：病后可以获得永久免疫力，很

9、少有人会再次感染。(三)微生物学检查、标本采集和检验的程序和方法、标本采集以及患者血液、痰液、粪便、渗出物和脑脊液等的标本采集。病死动物标本：死于败血症的动物严禁屠宰和解剖，皮肤消毒后可割去耳朵和舌尖，采集少量血液。被污染的物品：皮革、动物毛发、土壤等。标本处理：标本未被mi污染、处理标本、直接涂片、富集培养、分离培养、Ascoli试验、革兰氏染色胶囊染色、初报、血平板戊烷脒琼脂平板、可疑菌落、菌落涂片镜检、鉴定试验、肉汤培养、动物实验、动物死亡、分离培养、噬菌体裂解珠化试验、青霉素抑制试验、分离培养：一般接种血平板，培养37小时后观察菌落特征。受污染的标本在接种前要加热。动物试验：凝胶状水肿

10、、肝脾肿大、出血等。在芽孢杆菌中，除蜡样芽孢杆菌毒素外，炭疽芽孢杆菌是唯一具有致病性的芽孢杆菌。鉴定试验、青霉素抑制试验炭疽杆菌能在含5国际单位/毫升的青霉素培养基上生长，但在含10和100国际单位/毫升的青霉素培养基上生长受到抑制。炭疽芽孢杆菌的鉴定试验、串珠试验和鉴定经低浓度青霉素处理后，形态学发生明显变化。如果将该菌株的未成熟培养物接种在含有0.050.5U/ml青霉素的培养基上376小时，该菌株膨胀成一个圆形珠，这被称为珠化反应。这种反应可能与青霉素抑制细菌细胞壁的合成有关，这是炭疽杆菌所特有的，可以用来将其与其他炭疽杆菌区分开来。鉴定试验、青霉素和串珠联合试验、噬菌体裂解试验和炭疽杆

11、菌样毒性试验。剧毒炭疽杆菌形成胶囊，菌落呈粘液样，无毒炭疽杆菌不形成胶囊，但菌落粗糙。2020/7/27，鉴定试验，植物凝集素试验根据炭疽杆菌多糖是植物凝集素受体的原理。阿斯科利热沉淀试验使用已知的抗炭疽抗体来确定样品中未知的抗原。炭疽杆菌沉淀物具有高耐热性的特点，在尸体组织和毛皮中仍可检测数年，因此可用于回顾性诊断。炭疽芽孢杆菌与其他需氧芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌的鉴别(1)生物学特性、形态学和染色培养特性菌落特性生化反应抗性、形态学和染色，革兰氏阳性芽孢杆菌，具有钝端、链杆、不同长度、鞭毛和无荚膜，能形成孢子。2020/7/27，培养特性，需氧或兼性厌氧，低营养要求。普通琼脂平板：圆形、凸起、

12、灰白色、不透明，可形成R型蜡滴状菌落。血琼脂平板：菌落呈浅灰色，像磨砂玻璃，菌落周围有溶血现象。乳白色反应或蛋黄反应：它在蛋黄琼脂平板上快速生长。培养3小时后，虽然看不到菌落，但细菌可以分解卵磷脂形成白色混浊环，这是乳白色反应或蛋黄反应。生化反应，分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产生酸而不产生气体和乳糖。液化明胶。电阻、耐热性、强电阻，可承受10030分钟。(2)致病性和条件致病菌，主要引起食物中毒。临床上可分为两种类型：腹泻型，由耐热肠毒素引起。呕吐型：由耐热肠毒素引起。(3)微生物检验：1除了细菌的分离培养外，还必须对活菌进行计数。由于暴露在空气中的食物受到这种细菌的一定程度的污染，不能认为是引

13、起食物中毒的病原菌，因为蜡状芽孢杆菌是分离出来的。2检验程序，3检验方法，直接镜检：活菌数：一般认为蜡样芽胞杆菌活菌数大于105个/毫升时可能发生食物中毒。分离培养：鉴定，第3节单核细胞增生李斯特菌，生物学特性，形态学和染色培养特性，生化反应抗原的结构抗性，2020年7月27日，(1)形态学和染色，革兰氏阳性杆菌，直的或稍弯曲的，通常成对排列成V形，有时呈丝状，偶尔可见双球形。大多数细菌在一端较大，呈棒状，容易被误认为是污染的白喉棒状杆菌；由于细菌很短，30%到50%是链状的，而且是溶血性的，它们很容易与链球菌相混淆，所以通过接触酶试验来区分它们。在2225，形成了四个鞭毛，所以它在25肉汤培

14、养基中活跃地移动；然而，在37: 00，只形成了一个鞭毛，而且力量缓慢。2020/7/27，(2)培养特性，需氧或兼性厌氧，以及低营养需求。445，最佳温度为3037。因为它可以在4岁时生长，所以它可以冷藏。起初，菌落很小，像露水一样，光滑透明，在侧光下呈蓝绿色。培养37天后，菌落生长并变成灰色，血平板上的菌落有狭窄的溶血环。(3)生化反应，葡萄糖、果糖和麦芽糖在12天内发酵，乳糖、蔗糖和阿拉伯糖在310天内发酵。触酶阳性，副总裁()，磁共振()。2020/7/27，(4)抗原结构，分为4个血清型，1型主要感染啮齿类动物，每一型都能引起人类疾病，但1a型和1b型最常见。这种细菌与葡萄球菌、链球

15、菌、肺炎链球菌和大肠杆菌有共同的抗原。(5)在土壤、粪便和饲料中的抗性和长期存活。耐盐、耐碱、耐酸。对热和消毒剂敏感，70%的乙醇能在5分钟内杀死这种细菌。第二，致病性，这种细菌经常伴随着爱泼斯坦-巴尔病毒引起传染性单核细胞增多症。3微生物检验，(1)标本采集，(2)检验程序，2020年7月27日，(3)检验方法，1分离培养，2鉴定点，形态学染色：革兰阳性杆菌。溶血：这种细菌的溶血环很窄，所以只有刮掉菌落才能看到菌落下的溶血环。动态测试：25阳性。4能生长，第4节丹毒，生物学特性，形态学和染色培养特性，生化反应，2020年7月27日，(1)形态学和染色，革兰氏阳性杆菌，单链或短链，粗菌落形成长

16、丝状。没有鞭毛，没有胶囊，没有孢子。(2)培养特性，厌氧或微需氧细菌。初始分离需要在厌氧环境中培养，传代后可在有氧条件下生长。2020/7/27，(3)生化反应，氧化酶()，接触酶()，葡萄糖和乳糖的发酵，产酸但不产气。二、致病性，牡蛎丹毒是丹毒的病原体。它主要发生在鱼类，家畜，家禽和兔子，人类也受到感染。人们接触动物或其产品，通过皮肤损伤导致丹毒。主要是局部感染，然后发展成淋巴管炎，这可以转化为关节炎。它也能引起急性败血症或心内膜炎。2020年7月27日，三项微生物检验，(1)标本采集，(2)检验程序，(3)检验方法：1直接镜检，2分离培养，3生化反应，4动物实验，5阴道高德纳切片，1生物学

17、特性，形态学和染色培养特性，生化反应抗性，(1)形态学和染色，该菌的革兰氏染色随不同菌株和菌龄而异。这种细菌具有多形性，圆形的末端，没有鞭毛，没有荚膜和孢子。2020/7/27，(2)培养特性，兼性厌氧菌，高营养要求，不在普通营养琼脂平板上生长。将5% CO2置于含5%人血的琼脂平板上，在3537培养24小时，形成针尖大小的菌落；48小时后，形成溶血、圆形、光滑和不透明的菌落。2020/7/27，(3)生化反应，氧化酶()，触酶()，脲酶()。葡萄糖、麦芽糖、蔗糖等的发酵。会产生酸，但不会产生气体。(4)耐药性：所有菌株对氨苄西林、羧苄青霉素、苯唑西林、青霉素、万古霉素和甲硝唑敏感；对萘啶酸、新霉素、粘菌素和磺胺嘧啶的耐药性。其次是致病性，阴道毛滴虫和厌氧菌在阴道内的过度生长导致正常阴道菌群的微生态平衡失调，从而导致非特异性细菌性阴道病。它会导致妇产科的各种严重并发症。如全子宫切除术后感染和绒毛膜炎。这种细菌还会导致新生儿败血症和软组织感染。2020/7/27，并非所有GV阳性患者都是BV，因为20.40%的正常女性也能在阴道中检测到这种细菌。细菌性阴道病的诊断标准：阴道分泌物增多，稀薄，均匀，灰白色，有臭味。分泌物pH4.54.7。分泌物胺试验阳性。显微镜下，有线索细胞。微生物学检查，(1)标本采集，(2)检查程序，2020年7月27日，(3)检查方法，(1)阴道分泌物直接检查