诊断临床病原体检查.ppt

1、感染性疾病的实验诊断计程仪程序采用正确、规范的标本，采用直接显微镜检测病原体，病原体抗原成分，分子生物学方法检测病原体核酸，结合患者的病史、症状、体征，初步诊断后对云同步进行病原体分离和鉴定， 确定感染病原体类型对细菌和真菌感染进行抗生素易感性试验的血液：一般在发热初期和峰值时间采集，如果使用抗生素，在下一次用药前采集。 成人采血量为每次10-20毫升，儿童和婴儿为1.5-5毫升。 专用血培养瓶。 根据血液标本采集次数研究，仅采血1次的分离率约为80%，培养2次的分离率约为90%，培养3次的分离率约为99%。 接种多株厌氧菌的菌血症占菌血症的5-15%，10%菌血症不是由单一微生物引起的，长期

2、使用抗生素的患者可以呈现l型菌。 免疫低下患者根据容易发生真菌感染的情况，进行两种血培养瓶的培养，好氧和厌氧或好氧和l型培养。 标本采集操作应注意严格无菌操作，避免污染杂菌。 标本送检接种标本培养瓶必须立即送检，因任何原因不能立即送检时，请勿放入冰箱保管。 尿常漂亮地中段尿。 厌氧菌通过膀胱穿刺法收集，用无菌厌氧小瓶运送。 粪便滤取脓、血、黏液检查，排便困难和乳婴儿子可通过直肠拭子提取，可根据检查目的选择不同的转运培养基和分离培养基提高检出率。 呼吸道标本鼻咽雨刮器、痰、支气管镜采集物可通过从气管采集分泌物避免正常菌群污染，是确定下呼吸道感染的理想标本。 脑脊液及其体液对脑脊液常见致病菌如脑膜

3、炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌抵抗力弱，采集后必须马上接种。 对于胸、腹水、心包积液，因菌含量较少，故接种量较多或最好用血培养处理。 眼、耳标本可以无菌雨刮器采样，眼角膜刮屑。 泌尿生殖道标本可使用尿道口分泌物、外阴糜爿面分泌物、宫颈分泌物和前列腺液等。 创伤、组织和脓肿标本先清创，无菌雨刮器取材。 二、检查方法、显微镜检查混悬剂法用于病原体的动力观察，暗视野或相差显微镜用于病原体的生长、形态、运动方式。 染色检查：革兰氏染色用于细菌和真菌的检测抗酸染色用于结核菌及放线菌的检测墨染色用于新型隐球菌的检测。 2 .病原体专一性抗原的检测主要用于难以培养的微生物的快速诊断，利用已知的抗体，利用

4、免疫荧光、酶催化剂免疫技术等检测标本中的抗原。 3 .病原体核酸检测主要是PCR和DNA探针单孢杂交样品中的病原体。 4、鉴定病原体分离培养和细菌培养，将标本接种相应的培养基，通过菌落形态、生化反应对难以鉴定细菌培养的微生物进行细胞球培养。 5 .血清学检测病原体刺激机体产生的抗体，检测出IgM型抗体作为新的感染指标。 细菌的耐药性检测、抗微生物剂的作用机制阻碍细菌细胞贴壁的合成，使细菌不能繁殖。 影响细菌细胞球蛋白的合成，丧失细菌生长繁殖的物质基础。 破坏核酸的代谢，阻碍遗传信息的复制。 抗生素的广泛使用使抗生素的选择性应激面临着医院感染控制的严峻挑战，因此对细菌的耐药性发生机制和耐药性监测

5、已成为临床微生物检查中的重要工作。 抗微生物剂选择性胁迫、细菌的药剂耐受力及其发生机制，1、通过遗传学机制染色体的药剂耐受力是细菌自身固有的药剂耐受力，一般有属专一性，如肠球菌头孢菌素、部分革兰氏阴性杆菌的万古霉素抗性等。 质粒介导的耐药性基因易于传播，目前这种耐药性在临床上占有重要地位。例如，通过质粒产生超广谱内酰胺酶(ESBL )的大肠菌群、肺炎克雷伯菌等。 2 .生化机构产生灭活酶催化剂和钝化酶催化剂这些个的酶催化剂可使抗生素失活。 例如产生-核酸内切酶、氨基糖苷类钝化酶催化剂、氯霉素乙酰转换酶等。 作用靶位的变化作用靶位变化的话，抗生素的作用部位就会丢失。 如甲氧苄啶耐受力葡萄球菌产生

6、新的青霉素结合蛋白，降低细菌和内酰胺类抗生素的亲和性，引起耐受力。 铜绿假单细胞菌等主动外排反应历程对多种常用抗生素有耐药性，主要原因在于其外膜存在独特的药物泵系统。 药物敏感性试验，1 .纸片扩散法(K-B法)菌液浓度：0.5麦氏浊度(1.5108CFU/mL )琼脂平板厚度：4mm(9cm，25ml； 15cm、60ml )抗生素纸片：9cm、67张(4张左右)； 15cm，12枚培养温度，时间： 35，18-20小时的判断标准： NCCLS当年版，“敏感”表示检验菌在测定药物的通常接触剂量给药后到达体内的血药浓度抑制的“耐药性”表示检验菌可能到达体内感染部位的抗微生物剂浓度不抑制，临床治

7、疗无效“中介”者表明，该细菌对常规用量体液和组织中药物浓度的反应性低，比常规接触剂量使用更有效。 2 .液体稀释法、药物耐受力监测试验、1 .甲氧苄啶耐受力葡萄球菌(MRS )检测包括甲氧苄啶耐受力金黄色葡萄球菌(MRSA )和甲氧苄啶耐受力凝固酶催化剂阴性葡萄球菌(MRSCoN )。 不能用青霉素和头孢菌素类抗生素治疗。 2 .青霉素耐受力肺炎链球菌(PRSP )青霉素是治疗肺炎链球菌的首选药物，耐药菌株对青霉素治疗无效。 用苯并三氮唑锡林纸进行了检查。 3 .超广谱内酰胺酶(ESBL )检测主要由革兰氏阴性杆菌产生，通过质粒对青霉素和三代头孢菌素以下抗生素的广泛耐药性。 产酶催化剂株不能单

8、独治疗青霉素类和三代头孢菌素。 临床感染常见病原体检查，1 .流行病学特征新出现和传染病多药耐药性细菌出现医院感染和条件致病菌增加2 .临床类型细菌感染临床常见感染类型细小病毒感染发病率最高真菌感染发病率明显上升， 细菌感染细菌培养是最重要的确诊方法细小病毒感染细胞球培养最常用的细小病毒分离方法抗原和血清学检测临床应用最广泛的真菌感染真菌培养和形态学检测最常用的寄生虫感染是从患者血液、体液、排泄物检测寄生虫的一种发育期，也是目前最可靠的诊断方法， 细菌感染免疫检测，1 .血清链球菌溶血素“o”试验溶血素“o”为a组链球菌毒素，属于菌体蛋白的溶血素“o”具有抗原性，可使人产生相应的抗体，抗链球菌

9、溶血素“o”(anti-streptolysin“o”test，ASO a组链球菌感染23周后，血清中出现抗溶血素“o”的抗体。 滴度升高最近有a组链球菌感染，多见于活动性类风湿热、类风湿关节炎、急性肾小球肾炎等。 2肥达反应(widal reaction WR )伤寒沙门菌的菌体o抗原和鞭毛h抗原均可对机体产生相应的抗体，o抗原可刺激机体产生IgM，出现快，h抗原产生IgG，出现慢，持续时间长。 WR是以伤寒和副伤寒沙门氏菌属液为抗原，检测患者血清有无相应抗体的凝集试验。 o抗体1:80、h抗体13360160 a、b、c抗体13360160 a的上升h不高是感染早期还是其他沙门氏菌属h的上

10、升o不高是既往感染还是免疫策略、性传播性疾病的实验室检查、性传播性疾病(sexual transmitted disease STD )病原学和临床类型细菌淋病奈瑟菌、杜克雷嗜血杆菌螺旋体梅毒螺旋体细小病毒hiv、HSV、HPV支原体、衣原体真菌、原虫、1.AIDS检测可分为hiv-1和HIV-2两种，主要通过血液中的相应抗体诊断可以在HIV感染后数日或数周内检测出抗体2 .梅毒检测暗视野显微镜检查：皮损处，用玻璃板清除组织渗出液或淋巴结穿刺液，可见活动梅毒螺旋体。 主要依靠血清学试验，所用抗原可将梅毒血清试验分为以下两种：以非梅毒螺旋体抗原血清试验心磷脂复合物为抗原，测定血清中的抗心磷脂复合

11、物抗体，又称反应素。 本试验易感性高、专一性低，目前普遍作为梅毒的筛选试验。 性病研究实验室试验(venerealdiseaseresearchlaboratorytest，VDRL )需要以磷脂复合物、卵磷脂和胆固醇为抗原，在显微镜下读取结果。 不加热血清反应素的试验也是VDRL抗原的改良，易感性和专一性与VDRL相似。 快速血浆反应素试验(Rapid Plasma reagin test，rpr):vdrl抗原的改进，具有肉眼可读取结果的优点。 梅毒螺旋体抗原血清试验以梅毒螺旋体或其成分为抗原，测定抗梅毒螺旋体IgG抗体。 梅毒螺旋体凝血试验(TPHA )的易感性和专一性较高，常作为梅毒感

12、染的实证试验。 3、淋病检查取涂片检查患者尿道分泌物或子宫颈分泌物，革兰氏染色，在多形核白细胞内发现革兰氏阴性奈瑟氏菌。 涂膜对男性急性淋病的阳性率为95%左右，可以进行初步诊断。 女性子宫颈分泌物多为杂菌，敏感和专一性差，阳性率为50-60%，有假阳性，以培养为主。 培养检测培养法是对症状轻或无症状的男性，女性患者或慢性患者敏感的方法，培养后需要进行菌落形态、革兰氏染色、氧化酶催化剂试验和糖发酵试验。 淋病的确诊试验。 医院感染常见的病原体检查、医院感染(nosocomial infection )是指患者住院时不存在，也不存在于潜伏期，在医院内发生的感染，包括在医院内获得、出院后发病的感染。 侵袭性诊疗技术的广泛应用，人口老龄化和慢性病患者的增加，细菌耐受力状况的严重化，使医院感染日益受到重视。 一、流行病学、传染源病原体来源于住院患者、医疗从业者、探视者、医院环境及未经完全消毒的医疗器械、血液制品等。 传染途径内镜插管干预疗法增加感染机会。 易感性组免疫力下降的住院患者是主要高风险组。 二、临床类型、下呼吸道感染是我国最常见