组织分离制食用菌母种.ppt

1、实训三 组织分离制食用菌母种,好树结好果, 好种出好菇! 美味的食用菌及珍贵的药用菌需要好菌种!,组织分离制食用菌母种,你了解吗?,噢 菌种很重要！,母种 原种 栽培种,食用菌的栽培,子实体(菇体),实训内容 母种培养基的配制 及组织分离接种,（一）实训目的 （二）实训原理 （三）实训设计思路 （四）实训器材 （五）实训步骤 （六）注意事项 （七）实验作业,（一）实训目的,1.掌握母种培养基的配制操作及高压灭菌方法; 2.理解组织分离法制母种的原理; 3.掌握组织分离接种技术; 4.会使用超净工作台和培养箱.,（二）实训原理,组织分离法是利用子实体组织来分离获得纯菌丝的方法。 组织分离系一种无

2、性繁殖法，双亲的染色体没有经过重组，因此组织分离基本上可保持亲本的生物学特性，优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来。 该法操作简便，取材广泛，菌丝生长发育快，比较常用。,实训设计思路,1. 母种培养基的成分不同对菌丝生长有什么影响； 2. 组织分离选用的材料及分离的部位不同有什么影响； 3.培养温度不同有什么影响； 4.杂菌污染的原因,（三）实训器材,新鲜菇(耳)体、刀片、镊子或接种针 试管斜面培养基 接种箱或超净工作台、无菌室、酒精灯、75%酒精及酒精棉球等 培养箱等。,复习上一节母种培养基的配制步骤,1.按配方称量：见下面的配方 2.煮制 3.分装 4.灭菌 5.排斜面,母种培养基配方

3、：,1.土豆200g、糖20g、琼脂20g、水1000ml 2.去皮马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂20g、水1000ml、PH值自然，另外添加：麸皮20g、玉米面5g或黄豆粉5g、磷酸二氢钾2g，硫酸镁2g，VB11片（10mg）。 此配方适用于大多数菌种，金针菇、黑木耳、灵芝生长尤其茁壮。 可作黑木耳、香菇的复壮培养基，效果显著。,培养基的高压灭菌,使用高压蒸汽灭菌锅应注意的事项？ （提问同学） (1)锅内装物品不应过紧； (2)注意排出冷气，否则不能保证灭菌效果； (3)加热排冷气后，使温度达到121.3，压力在0.10.15 MPa之间维持30 min； (4)不耐高热高压之物品，不

4、能用此法灭菌。,（四）组织分离操作的主要步骤：,挑选种菇：挑选生长健壮，菌龄适中，无病虫害，具有本品种优良性状的菇体或组织作为种菇。 环境、用具严格消毒：即超净工作台或无菌室的使用，形成无菌的环境。,超净工作台的使用,超净台可将空气通过由特制的微孔的“超级滤清器”后吹送出来，形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流，即所谓“高效的特殊空气”，它除去了大于0.3m的尘埃、真菌和细菌孢子等等。 工作人员就在这样的无菌条件下操作，保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。,超净工作台, 使用注意事项（提问同学） 提前接通电源，开启紫外线杀菌灯，30 分钟后关闭杀菌灯； 然后开启日光灯、风机，20分钟后方可进

5、行操作。,组 织 分 离 操 作,菇体消毒：将子实体菌柄基部切除，置接种箱内，在无菌箱内以0.1的升汞水浸几分钟，再用无菌水冲洗并揩干，或用75酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。,组织分离部位的选择,菌肉组织如图 菌核组织如图,示 范 操 作, 组织分离：解剖刀经火焰灭菌，在菇柄中部纵切一刀，用手掰开菌再用刀片在菇盖与菇柄交界处切取黄豆大小的小方块。 接种：在无菌条件下，随后挑取一组织小块，迅速移接到PDA斜面培养基上，并塞好棉塞。,示 范 操 作, 贴标签培养：试管从接种箱取出之前，应逐支试管正面的上方贴上标签，写明菌种编号、接种日期，随后把试管放入培养箱（室）中，置适宜温度（平菇2

6、2，香菇25）下培养，待组织块长出菌丝无污染即为纯种。,培 养,置于适宜温度下培养3-5天，就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到菌种。如香菇、平菇、双孢菇、草菇、猴头菌等多采用此方法。,附：数显式恒温 培养箱的使用,数显式恒温培养箱的使用,培养箱是通过对周围环境条件的控制制造出一个能使细胞、组织更好地生长的环境，条件控制的结果就会形成一个稳定的条件 调节适宜温度，并使温度稳定，再放培养物; 培养过程中要观察温度稳定性和生长状态，并注意培养时间；,注 意,培养终止，关掉电源，取出培养物； 培养箱的环境应清洁整齐，干燥通风；保持培养箱内空气干净，并定期消毒；,实训第二大部分,学 生

7、分 组 操 作,分 组 操 作,每班同学可分为二大组6小组； 第一大组3台双人超净工作台，每次可6人操作； 第二大组可在无菌室内操作； 第一大组采用菌盖与菌柄交界处组织进行分离，第二大组采用菌盖带菌褶部分进行组织分离，作对比观察。,分 组 辅 导,注意同学们的操作； 及时纠正不规范动作。 接种操作完毕，收集试管进行培养。,数显式恒温培养箱的使用,注意事项（提问同学）,实训第三大部分,结果观察,母种培养生长状态观察,母种培养生长状态可分4种情况. 1.菌丝已萌发，生长旺，无污染 (如图所示)； 2.菌丝已萌发，但有杂菌污染； 3.菌丝未萌发，无污染； 4.菌丝未萌发，且杂菌污染严重；,原因分析,1.菌丝未萌发：组织块太小烫伤严重培养条件如温度不适宜。 2.有杂菌污染： 培养基灭菌不彻底； 培养基成分适宜杂菌生长； 环境、用具消毒不严格； 菇体耳体消毒不严格； 接种操作控制不当，要无菌操作。,常见的杂菌观察,常见的杂菌主要有细菌、放线菌；,常见的杂菌观察,细菌、霉菌等。,常见的杂菌观察,青霉、黑曲霉,（五）组织分离制母种应注意的事项 （提问同学）,环境用具严格消毒