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文档简介

1、教育要求、酶联免疫吸附试验基本方法和原理学习双抗三明治方法检测抗原物质的基本操作，实验8酶联免疫吸附试验(ELISA)，ENzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)是免疫酶技术(immunoenzymatic technology)利用分光光度计的光吸收计算抗体量。要测试的抗体量与有色产品成正比。同样，也可以抗体测定抗原含量。ELISA中最常用的四种茄子方法：直接测定抗原；间接法测定抗体；双抗体三明治测定抗原；竞争法测定抗原。(1)直接法测定抗原a .将抗原吸附到载体表面。b .添加形成抗原抗体复合物的酶标记抗体；c .额外的气质。气质的分解量抗原量。(2)

2、间接将抗体a .抗原吸附在固相载体表面。b .添加抗体，形成抗原-抗体复合体；c .添加酶标记抗体；d .额外的气质。测定气质的分解量抗体量。(3)双抗体三明治法测定抗原A。在固相表面添加抗体吸附b .抗原，形成抗原-抗体复合物。c .添加酶标记抗体；e .额外的气质。气质的分解量抗原量。(4)竞争法测定抗原A。固相载体表面吸附抗体b .酶标记抗原和测试对象抗原的添加，竞争结合抗体；对照组仅添加酶标记抗原。c .额外的气质。对比孔和样品孔底物分解量的差异是未知抗原量。3茄子材料和设备(略)，(1)抗体包：两港人IgG酶链板孔100 L，4夜；撒得干干净净。(2)闭合：犊牛血清2%，每孔100

3、L，每37个30min关闭后洗三次(前两次用自来水洗，甩茶；使用第三种洗涤剂，3 min，次)(3)检查的抗原：正常人血清稀释，1:5，1336010，1:20，1:40，1:80，生理盐水对比3次(4)1: 800稀释)，每个孔100 L，37，30min；三、四个操作阶段；(5)酶催化反应：基质显色剂(0.2 mol/L Na2HPO4 1:1的0.1M柠檬酸，3% H2O2 1.5L/mL，TMB(DMSO溶解；(6)添加2mol/L H2SO4 50 L终止反应，观察颜色反应，用酶标测定OD。5茄子注意事项，(1)正确清洗酶板，添加清洗液时，要小心将清洗液流入溢出、周边孔，以免引起交叉污染。洗涤后，应尽量扔掉干球内的余额。把洗涤液放入孔后，要保持3分钟不变，扔掉。(2)添加样品时，必须将最高稀释度一个一个地加到最低稀释度，才能改变吸头。(3)气质在任用前要调配，同时也要注意避光。6公司考试问题，(

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