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1、题目:蛋白质沉淀反应,1,学习交流PPT,一、实验目的,掌握几种使蛋白质沉淀的方法; 掌握蛋白质可逆沉淀与不可逆沉淀的区别; 理解蛋白质变性和沉淀的关系。,2,学习交流PPT,二、原理,蛋白质是亲水胶体,正常状态下,蛋白质分子表面具有水化膜和电荷层,能保持其胶体溶液的稳定性,在一定因素 的影响下,蛋白质会失去电荷和脱水沉淀。 蛋白质的变性与沉淀之间没有必然联系,3,学习交流PPT,蛋白质沉淀反应 (一)蛋白质的盐析作用 (二)乙醇沉淀蛋白质 (三)重金属盐类沉淀蛋白质 (四)生物碱试剂沉淀蛋白质,4,学习交流PPT,(一)蛋白质的盐析作用,加盐类如硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等可以破坏蛋白 质胶体周
2、围的水膜,同时又中和了蛋白质分子的电 荷,因此使蛋白质产生沉淀,这种加盐使蛋白质沉 淀析出的现象称盐析。 盐溶现象为低盐浓度可使蛋白质的溶解度增加,实 验时要加足够量的盐。 蛋白质的盐析作用是可逆过程,用盐析方法沉淀蛋 白质时,较少引起蛋白质变性,经透析或用水稀释 时又可溶解。,5,学习交流PPT,(二)乙醇沉淀蛋白质,有机溶剂如酒精、丙酮等可使蛋白质产生沉淀,这 是由于这些有机溶剂和水有较强的作用,破坏了蛋 白质分子周围的水膜,因此发生沉淀作用。若及时 将蛋白质沉淀与丙酮或乙醇分离,蛋白质沉淀则可 重新溶解于水中。,6,学习交流PPT,(三)重金属盐类沉淀蛋白质,溶液pH在蛋白质等电点以上时
3、,重金属盐类(如 Pb2+、Cu2+、Hg2+及Ag+等)易与蛋白质结合成不 溶性盐而沉淀。 重金属盐类沉淀蛋白质通常比较完全,故常用重金 属盐除去液体中的蛋白质。但应注意,在使用某些 重金属盐(如硫酸铜或醋酸铅)沉淀蛋白质时,不可 过量,否则将引起沉淀再溶解。此时的溶解为生成 憎水胶体的缘故。,7,学习交流PPT,(四)生物碱试剂沉淀蛋白质,生物碱是植物中具有显著生理作用的类含氮的碱 性物质。凡能使生物碱沉淀,或能与生物碱作用产 生颜色反应的物质,称为生物碱试剂。如鞣酸、苦 味酸和磷钨酸等。 当蛋白质溶液pH值低于其等电点时,蛋白质为阳离 子,能与生物碱试剂的阴离子结合成性盐而沉淀。 溶液中的蛋白亦能被有机酸沉淀,其中以三氯醋酸 的作用最为灵敏而且特异。因此被用于蛋白质的首 选沉淀剂,只能沉淀蛋白质,不能沉淀其水解产物, 加热可除去。,8,学习交流PPT,三、实验材料,实验材料: 鸡卵清蛋白液,吸管(1mlx4,2mlx4,0.5mlx1, 5mlx2),试管(1.5x15cmx14),水浴锅,滴管,电炉 实验试剂: 苯酚(0.5%),硫酸铜(1%),硫酸铵固体,95%乙 醇,NaCl,醋酸铅,鞣酸,苦味酸,冰醋酸,9,学习交流PPT,四、操作步骤,10,学习
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