细胞因子与粘附因子检测PPT课件

1、.,1,第十六章 细胞因子与黏附分子检测,医学技术学院免疫教研室,.,2,复 习,1.T细胞增殖试验的原理、刺激物？ 2.T细胞增殖试验的主要方法？ 3.T细胞介导的细胞毒试验主要方法？,.,3,掌握：细胞因子、粘附分子概念； 临床常用的测定方法 熟悉：细胞因子的特性与功能； 了解：其他,.,4,第一节 概述 第二节 临床常用的测定方法 第三节 细胞因子与黏附分子测定的临床应用,.,5,第一节 概 述,细胞因子(cytokine) 是由免疫细胞及组织细胞表达并分泌，通过结合细胞表面的相应受体，在细胞间发挥相互调控作用的一类小分子蛋白质或多肽。,掌握,.,6,1.细胞因子的种类 白细胞介素（IL

2、） 干扰素（IFN） 集落刺激因子（CSF） 肿瘤坏死因子（TNF） 生长因子（GF） 趋化因子,一、细胞因子及其受体的特性与功能,熟悉,.,7,自分泌,内分泌,远距离作用,旁分泌,作用于比邻细胞,细胞因子发挥作用的三种方式,作用于分泌细胞自身,2.细胞因子的共同特性与生物学功能,熟悉,.,8,高效性、多效性、重叠性、网络性、协同性、拮抗性 迅速 高效性 非特异性,2.细胞因子的共同特性,熟悉,.,9,肥大细胞,胸腺细胞,B,IL-4,活化、增殖、分化,增殖,增殖,多效性,.,10,IL-2、 IL-4、 IL-5,IL-4 + IL-5,IL-4,IFN-,拮抗性,重叠性,协同性,均有刺激B

3、细胞增殖的功能,更有效地诱导IgE类别转换,IL-4 阻断IFN-诱导类别转化的作用,B,B,B,.,11,2.细胞因子的生物学功能,参与调控免疫细胞的发育、分化和功能 参与调控免疫应答 抗感染 抗肿瘤 诱导细胞凋亡,了解,.,12,3、细胞因子受体的共同特性,细胞因子发挥作用： 细胞因子与靶细胞表面特异性受体结合 细胞因子受体结构： 胞膜外区、跨膜区和胞质区组成 细胞因子家族： 型细胞因子受体家族、 型细胞因子受体家族、肿瘤坏死因子受体超家族、免疫球蛋白受体超家族、趋化因子受体家族。,了解,.,13,.,14,二、 黏附分子的特性与功能,黏附分子（AM） 是介导细胞间或细胞与细胞外基质间相互

4、结合的分子。,掌握,.,15,1.黏附分子的特性,黏附分子均为跨膜糖蛋白，由胞膜外区、跨膜区和胞质区三部分组成，根据其结构特点可分为免疫球蛋白超家族、整合素家族、选择素家族和钙黏蛋白家族。,了解,.,16,2.黏附分子的主要生物学功能,参与细胞的信号转导与活化、细胞分化及发育 参与免疫应答和炎症反应、淋巴细胞归巢、伤口愈合与血栓形成、调节细胞凋亡等功能,了解,.,17,B细胞与Th细胞间信号转导的细胞粘附分子,.,18,第二节 临床常用的测定方法,一、酶联免疫吸附试验方法 二、化学发光酶免疫试验 三、流式细胞分析法 四、酶联免疫斑点试验 五、免疫学测定方法学评价,.,19,基因水平：PCR技术

5、。 检测水平 生物活性测定 蛋白水平 免疫学测定,第二节 临床常用的测定方法,掌握,.,20,生物活性测定：测活性。灵敏 性高,特异性低 蛋白水平 ELISA 免疫学测定 化学发光酶免疫试验 （ 含量） 流式细胞术 酶联免疫斑点试验,第二节 临床常用的测定方法,掌握,.,21,一、酶联免疫吸附试验 （一）基本方法,1.直接法-双抗体夹心法 （测CK最常用方法） 2.间接法 3.抗原竞争法,熟悉,.,22,敏感性偏低 不能区分细胞因子的生物学活性,（二）方法学评价,特异、简便 成本低、易于推广和标准化等优点 可同时检测大量标本且试验废弃物便于处理 细胞因子测定的首选方法,缺点,优点,了解,.,2

6、3,二、化学发光酶免疫试验,是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发光反应增强测定的灵敏度。 （一）基本方法 双抗体夹心法 （二）方法学评价 特异性好、灵敏度高、线性范围宽、试剂稳定、可自动化检测,了解,.,24,三、流式细胞术 （flow cytometry, FCM),分离和培养待检细胞 细胞破膜与固定 封闭非特异性结合位点 染色与分析,基本方法,了解,.,25,方法学评价,优点：特异、高效、灵敏. 应用: 对单个细胞水平CK或AM检测； 检测细胞内CK；膜上AM、CK受体 同一细胞内两种以上细胞因子表达,熟悉,.,26,四、酶联免疫斑点试验(ELISPOT),包被有待测细胞因子抗体的微孔板

7、 分泌相应细胞因子的待测细胞 有或无刺激物培养 细胞因子被板上的特异性抗体捕获 后续的反应如同ELISA,一个斑点代表一个细胞因子分泌细胞，斑点的颜色深浅程度与细胞分泌的细胞因子量相关,基 本 原 理,+,了解,.,27,.,28,方法学评价,比常规ELISA法的灵敏度提高200倍 应用：检测分泌特定细胞因子的细胞,熟悉,.,29,五、免疫学测定方法学评价,优点： 特异性高 操作简便、快速，无需依赖细胞株 影响因素较少且易控制，重复性好，方法容易标准化。 缺点： 所测定含量，与其生物活性不一定呈正比 结果与所用的抗体来源及亲和力有很大的关系 敏感性相对较低 标本中可溶性受体，会影响特异性抗体对

8、细胞因子结合,熟悉,.,30,第三节 细胞因子与黏附分子 测定的临床应用,1.特定疾病的辅助诊断 2.机体免疫状态的评估 3.临床疾病治疗效果的监测和指导用药 4.疾病预防的应用,熟悉,.,31,一、临床应用原则,方法选择和结果判断作出综合考虑: 异质性 功能交叉性和多样性 来源的复杂性 组织细胞的非特异性,细胞因子和粘附分子,.,32,全身免疫或炎症状态血浆、血清 炎症局部细胞因子的水平局部分泌液 细胞分泌细胞因子的特性外周单个核细胞 细胞表面细胞因子受体或黏附分子定位检测 疾病疗效观察和预后判断,1.标本的适当选取,.,33,敏感性高-特异性低，废弃物难处理 活性测定-不能精确蛋白定量 基

9、因分析-操作繁琐，有助于疾病分析 多种方法综合分析正确评价,2.方法的联合应用,.,34,意义： 细胞因子具有网络状调节的特点 级联效应或相互抑制作用的网络系统 有助于提供有效的疾病诊断和机体免疫状态信息 举例： 免疫细胞分泌：IL-1、 IL-2、IFN-和GM-CSF Th1/Th2细胞平衡状态：IL-2、IL-4、IL-10和IFN-,3.细胞因子的联合检测,.,35,二、特定疾病的辅助诊断,（一）细胞因子与疾病 1.细胞因子风暴IL-1、IL-2、IL-6、IFN-等 引发全身炎症反应综合征 2.变态反应性疾病哮喘IL-4促进IgE合成 3.自身免疫病类风湿性关节炎（TNF-、 IL-

10、1、IL-6、IL-8、MCP-1）,.,36,（一）细胞因子与疾病,4.免疫缺陷病IL-2R基因缺陷（重症联合免疫缺陷病）；IL-6（浆细胞瘤、膀胱癌） 5.器官移植排斥反应TNF-、IL-1、 IL-2、IL-6、IFN-水平升高 6.恶性肿瘤检测IL-2、IL-6、IFN-水平用于疗效的评估,.,37,（二）黏附分子与疾病 1.动脉粥样硬化ICAM、P-选择素 2.肾脏疾病ICAM 3.肝脏疾病- VCAM-1、ICAM-1、IL-1 4.自身免疫病-SLE（E-选择素、ICAM-1） 类风湿关节炎（E-选择素）,.,38,三、评估机体的免疫状态,机体免疫应答的强弱 作为观察治疗效果和判

11、断预后的重要指标 对保证治疗效果具有指导意义,.,39,四、疾病疗效检测及指导用药,根据患者相关细胞因子水平或免疫状态的检测结果选择细胞因子的种类和剂量。 细胞因子水平过表达/可溶性黏附分子增高使用相应的细胞因子拮抗剂或抗体,.,40,1细胞因子和细胞粘附分子的概念？细胞因子可分为几类？ 2临床检测中常用细胞因子与细胞黏附分子的免疫学检测方法有哪些？ 3细胞因子及黏附分子检测的临床意义是什么？,思考题,.,41,1.细胞外可溶性黏附分子主要测定法是( ) A.ELISA B.酶免疫组化法C.荧光免疫法 D.流式细胞仪测定法E.时间分辨荧光免疫法 2.下列对FCM检测细胞因子的描述中错误的是(

12、) A.灵敏度高 B.可测细胞内细胞因子 C.特异性高 D.单细胞水平分析 E.mRNA表达水平 3用ELISA方法测定细胞因子，错误的是( )A.特异性高 B.可测活性 C.操作简便 D.可定量分析 E.时间短 4.在检测可溶性黏附分子中，ELISA常用( )A.直接法 B.间接法 C.夹心法 D.竞争法 E.组化法,A,E,B,C,.,42,5.不属于细胞因子特点的是( )A.分泌型蛋白质 B.自分泌 C.低分子量 D.不受MHC限制 E.半衰期长 6.黏附分子作用是( )A.细胞信号传导与活化 B.细胞的伸展与转移C.细胞的生长与分化 D.创伤的愈合E.以上都是 7.慢性肝炎的急性期和活动期水平显著升高,而稳定期和恢复期有明显下降的细胞因子( ) A.TNF和IL-6 B.TNF和IL-10 C.TNF和EPO D.GM-CSF和EPO E. GM-CSF和IL-6,E,E,A,.,43,8.细胞因子生物学测定法最重要的优点是( ) A.