微生物学检验其他革兰阴性杆菌及检验.ppt

1、其他革兰阴性杆菌的常规检验,嗜血杆菌属 嗜肺军团菌属 布鲁菌 百日咳鲍特菌 弯曲菌 幽门螺杆菌,流感嗜血杆菌,G-小杆菌，多形性 有毒菌株形成荚膜 培养基中需加入血液，以提供X因子和V因子（巧克力色培养基） X因子血红素 V因子辅酶或辅酶 菌落光滑、无色透明、露滴状 CO2培养 “卫星现象”,卫星现象,流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同孵育时，由于后者能合成较多的V因子，在金黄色葡萄球菌菌落周围生长的流感嗜血杆菌的菌落较大，离金黄色葡萄球菌菌落越远的越小。,根据荚膜抗原分ABCDEF六型，B型毒力最强 可产生自溶酶 致病物质：荚膜、菌毛、内毒素、 IgA蛋白酶 所致疾病 原发感染：脑膜

2、炎、鼻咽炎等，多见于儿童 继发感染：鼻窦炎等，多见于成人,微生物学检查,标本 （脑脊液、痰、血液、脓液）,涂片染色镜检,分离培养,鉴定试验,结果报告,G-性杆菌 多形性,“卫星现象”,检出流感嗜血杆菌,鉴定依据,革兰阴性小杆菌、多形性 培养采用巧克力色培养基，CO2培养 血平板上有“卫星现象” X、V因子需求试验,军团菌,是引起军团菌病的病原体 首发于1976年的美国一次军人聚会，故称作军团病 1982年,在我国南京首次证实了军团菌病。,形态染色,革兰阴性，但不易被着色 杆菌，形态有多形性 Gimenen染色，菌体呈红色，背景为绿色 不形成芽孢，无荚膜 ， 有端生或侧生鞭毛,培养特性,营养要求

3、高 专性需氧 需2.55CO2 生长缓慢 常用培养基及菌落特征 BCYE培养基：灰白色、圆形光滑湿润菌落 F-G培养基：针尖大小、黄色荧光,军团菌菌落形态(CYE琼脂培养基),抗原结构,抗原：具有型特异性 军团菌病约90%的是由嗜肺军团菌所致,已发现15个血清型 ，其中以Lp1血清型最常见, Lp6次之。,抵抗力,分布广泛、抵抗力强 水中存活时间长 军团菌病的主要污染源是供水系统及冷却塔和空调系统,定期清洗空调 预防军团菌病,临床意义,致病物质：内毒素、外毒素、侵袭性酶 传染途径：呼吸道（吸入含有军团菌的气溶胶） 所致疾病：军团菌病 肺炎型 非肺炎型（类似感冒） 免疫性：感染者血清中出现特异性

4、IgG、 IgM抗体,微生物学检查,标本 （痰、支气管分泌物、血液、）,涂片染色镜检 （Giemsa染色）,分离培养（BEYE琼脂）,鉴定试验,结果报告,形态染色 菌落特征 氧化酶、触酶 荧光抗体染色等,血清学试验,检测指标：检测患者血清中特异性抗体 方法：ELISA 意义： 检测特异性IgM：诊断军团菌病 检测特异性IgG：军团菌病流行病学调查,布鲁菌属,引起布鲁菌病（波状热） 可引起人畜共患病 我国流行菌种主要是羊、牛、猪布鲁菌，以羊布鲁菌最常见 属细胞被寄生菌,形态染色,革兰阴性球杆菌 光滑型有微荚膜，无芽孢，无鞭毛 常用染色法： 改良Ziehl-Neelsen染色法：菌体红色，背景为蓝

5、色 柯兹洛夫斯基染色法：菌体红色，背景绿色,培养特性,专性需氧、510CO2 营养要求高，常用肝浸液培养基 生长缓慢 菌落细小、无色透明、光滑,生化反应,氧化酶、触酶： 氧化分解葡萄糖 产生硫化氢,抗原构造,革兰阳性需氧或兼性厌氧杆菌,白喉棒状杆菌,属棒状杆菌属 是引起白喉的病原体 主要以外毒素致病,白喉棒状杆菌形态染色,革兰阳性细长、棒状杆菌，无芽孢，无荚膜、无芽孢 排列不规则 胞浆中有易染颗粒（重要形态学特征） 异染颗粒染色法： 阿伯脱然色 奈瑟染色,白喉棒状杆菌培养特性,需氧或兼性厌氧 营养要求高 菌落特征 血平板：灰白、狭窄溶血环 鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光泽菌落 亚碲酸

6、钾血平板：为选择培养基，菌落 呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型,白喉棒状杆菌生化反应和抗原结构,生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等 不分解乳糖、多数不分解蔗糖 靛基质试验、明胶液化、尿素分解 抗原构造 K抗原：型特异性抗原，不耐热 O抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原,白喉棒状杆菌临床意义,致病物质：白喉外毒素 由携带-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。 抑制蛋白质的合成。 经呼吸道飞沫感染，引起白喉。 假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因 中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因 抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用 锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素免疫,白喉棒状杆菌检验程序,咽拭标本

7、,亚碲酸钾 血平板,观察菌落特征,直接涂片 革兰染色 异染颗粒染色,血平板,吕氏血清斜面,直接涂片 革兰染色 异染颗粒染色,涂片染色镜检 生化反应 毒力试验,白喉棒状杆菌标本采集和检查方法,咽拭标本 标本直接涂片 革兰染色：观察形态、染色性 异染颗粒染色：观察异染颗粒 初步报告：检出形似白喉棒状杆菌 分离培养 吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板：黑色菌落,白喉棒状杆菌毒力试验,意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据 方法 艾立克平板毒力试验 对流电泳法 协同凝集试验 动物实验,需氧芽孢杆菌属,是一大群下枯杨，能产生芽孢的革兰阳性大杆菌。 种类： 炭疽芽孢杆菌 枯草芽孢杆

8、菌 蜡样芽孢杆菌 多粘杆菌等,炭疽芽孢杆菌形态染色,革兰阳性粗大杆菌，两端平截，呈竹节状，链状排列 可形成荚膜、芽孢，无鞭毛,炭疽芽孢杆菌培养特性,需氧或兼性厌氧 营养要求不高，普通培养基上生长良好 干燥、边缘不整的粗糙型菌落，低倍镜下边缘呈“卷发状” 液体培养基中呈絮状生长 明胶培养基中呈倒置的杉树 有毒株在NaHCO3培养基中形成荚膜，菌落呈粘液状，有拉丝,炭疽芽孢杆菌抗原结构与抵抗力,抗原结构： 炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因子组成，具有毒性作用。三种成分单独存在无致病作用。 菌体抗原：耐热、耐腐败，能与相应抗体结合发生沉淀反应，用于Ascoli试验 抵抗力：本菌芽孢抵抗力强，

9、芽孢对碘和氧化剂敏感 耐药性：本菌对青霉素、氨基糖甙类、四环素类、环丙沙星敏感,炭疽芽孢杆菌临床意义,致病物质 炭疽毒素、荚膜 所致疾病 经多途径感染，引起炭疽病 临床类型：肺炭疽、肠炭疽、皮肤炭疽、败血症 属人畜共患传染病，死亡率高,炭疽芽孢杆菌标本采集和处理,标本采集 病人血液、痰、粪便、渗出液、脑脊液等 死亡病畜标本：死亡牲畜严禁宰杀 污染物品：皮革、兽毛、土壤等 标本处理：无杂菌污染标本直接接种，有杂菌污染标本先加热杀死繁殖体和杂菌再接种,已处理标本,直接涂片,增菌培养,分离培养,Ascoli试验,革兰染色 荚膜染色,初步报告,血平板 戊烷脒琼脂平板,可疑菌落,菌落涂片 染色镜检,鉴定试验,肉汤培养,动物实验,动物死亡,分离培养,噬菌体裂解 串珠试验 青霉素抑制试验,炭疽芽孢杆菌检查方法,涂片染色镜检 革兰染色：涂片后升汞固定；发现革兰阳性粗大杆菌、有荚膜，竹节样排列可初步报告 分离培养：污染的标本先加热处理再接种 动物试验：注射部位胶样水肿，肝脾肿大，出血等。,炭疽芽孢杆菌鉴定试验,青霉素抑制试验：与其他需氧芽孢杆菌鉴别 串珠试验：与其他类炭疽芽孢杆菌鉴别 青霉素和串珠联合试验 噬菌体裂解试验：与类炭疽芽孢杆菌鉴别 重碳酸盐毒力试验