降压物质检查法PPT课件

1、。1，DEPRISTOR CONTINENTS，省药物管制研究所。2，执行摘要，基本概念和原理，2010版，添加和修订，检验方法，欧洲药典，抗高血压物质，组胺物质，3、基本概念和原理、检查目的、组胺、缓激肽等物质具有血管舒张作用，如果超过一定剂量，血压会迅速下降，对人体造成危害。对于动物或微生物的发酵提取物以及生产过程中可能与此类物质混合的原料，应建立抗高血压物质的检查项目，如抗生素、氨基酸和多肽。对于生产过程中可能混入组胺或类组胺物质的动物、植物和微生物发酵提取物和注射剂(静脉)，应建立抗高血压物质的检查项目。如抗生素、中药注射剂、氨基酸和多肽。降压物质测试方法的基本概念和原理、定义：本法律

2、体系比较了组胺对照品(S)和测试品(T)引起的麻醉猫血压下降的程度，以确定测试品中所含降压物质的限度是否符合要求。该法的原理是利用猫对组胺类物质敏感，静脉注射一定剂量的试验产品，观察对麻醉猫血压的影响，从而确定试验产品中降压物质的限量是否符合要求。5，2010版，历史沿革，从1985年版到现行药典(2005年版)的方法基本相同，2005年版动物已去除狗(5公斤以上)，2010年版修订，6，2010年版与2005年版差异，7，2010年版与2005年版差异，1.强调对照品的抗高血压活性应符合要求。2.强调猫的正常血压范围是13.320.0千帕3。强调每次注射应在先前的反应稳定后进行，但不能在35

3、分钟内进行。9、检查方法-材料、1个血压记录装置：生物功能实验系统(多通道生理记录仪)、相应的传感器、血压计(用于校准)、2个连接装置如动脉插管(细硬塑料管)、静脉插管(10号或12号钝针)、三通、可调定量取样器、软管(硅胶管或乳胶管)。3支1毫升、2毫升、5毫升、10毫升注射器(4号半针头)，玻璃容器：吸管、容量瓶等。4台相应的精密天平(1/10，000对照品)、动物天平(天平)5台试剂：供试品、组胺对照品、肝素钠(注射液或原料)、苯巴比妥钠注射液、戊巴比妥钠及其他麻醉剂、生理盐水(氯化钠注射液)6台手术器械、绝缘手术台、固定猫的绳索等。10、检验方法-材料、手术器械：剪刀、手术剪刀、眼科剪

4、刀、止血钳、手术刀、手术钳、眼科钳(直的和弯曲的)、气管插管、动脉夹、脱脂棉、纱布、11在活动被证实符合要求的情况下，可在3个月内使用。在制备参考稀释剂之前，准确测量组胺参考溶液的适当量，并使用氯化钠注射液制备每1毫升含有0.5微克组胺的溶液。注：1当标准物质被切割时，不要将玻璃碎片转化为2，转化为0.362。1毫克磷酸组胺相当于组胺3。储存溶液用无菌水制备并储存。使用时，将其取出并置于室温下。12。检验方法测试溶液。根据品种下规定的剂量，将供试品溶液配制成适当浓度的供试品溶液。在测试过程中，通常要求测试溶液和参考物质稀释剂的注射体积相等。注：试验溶液和补充溶液的注射量应相等，一般为0.2毫升

5、/千克体重。例如，注射用阿奇霉素应配制成10，000 u/ml，并以0.2ml/kg注射。如果供试品溶液和对照品之间的体积差异过大，可通过补充生理盐水的量进行调节。13。检查方法：健康合格，体重在2公斤以上的猫，雌性不怀孕。用适当的麻醉剂(如巴比妥酸盐)麻醉后，将其固定其他合适的仪器也可以用来记录血压。将静脉插管插入一条股静脉，用于注射液体药物。实验过程中应注意保持动物体温。所有操作完成后，将压力计调整到与动物血压相当的高度(一般为13 . 316 . 0千帕)，打开动脉夹，待血压稳定后注射药液。每次注射应该以相同的速度进行。每次注射后应立即注射一定量的氯化钠注射液。两次相邻注射之间的时间间隔

6、应相同(35分钟)，每次注射应在前一次反应稳定后进行。14、动物要求，合格的猫体重超过2公斤，雌性不怀孕。来源：目前市场上的家猫一般都在3公斤以上，麻醉耐受性好，血压稳定。在非怀孕实验中注意保温。15。检查方法-麻醉、常用麻醉剂和戊巴比妥钠剂量：静脉注射或腹腔注射3040毫克/千克，一般配制成30-40毫克/毫升，每千克体重给予1毫升，一旦给予，麻醉可维持24小时，具有起效快的优点。缺点维护时间短。苯巴比妥钠戊巴比妥钠：(不同实验室的比例不同)苯巴比妥钠(1毫升：100毫克)135毫克/千克约2毫克/千克戊巴比妥钠(可制成10毫克/毫升)。乌拉坦：静脉或腹腔注射11.25克/公斤，几乎没有呼吸

7、抑制。16、检查方法-仪器连接、颈动脉插管换能器记录器股静脉插管给药装置、17、检查方法-动物敏感性检查，依次静脉注射上述参考稀释剂，剂量为每1kg动物体重0.05微克、0.1微克和0.15微克组胺，重复23次。例如，0.1微克剂量引起的血压下降不低于2.67千帕注：当组胺浓度为0.5微克/毫升时，剂量为0.1、0.2、0.3毫升/千克。18。检验方法试验品检验。取参考稀释液，按每1kg动物体重0.1微克的剂量注射组胺。根据处方剂量(dT)按下列顺序在品种项下给供试品溶液注射一组4剂：ds、dT。然后分别比较第一剂和第三剂、第二剂和第四剂引起的反应。如果由dT引起的反应值不超过由ds引起的反应

8、值的一半，则认为被测产品的降压物质检查符合要求。19，检查方法-复试，否则，应按上述顺序注射一组4剂，并按相同方法比较两组中dS和dT试剂的最大诱发反应值。如果由dT引起的反应值不大于由dS引起的反应值，仍认为受试物的降压物质检查符合要求；如果由dT引起的反应值大于由dS引起的反应值，则认为测试产品的降压物质检查不符合要求；否则，另一只动物应该被重新检查。如果经复试，dT引起的反应值大于dS引起的反应值，则认为受试产品的降压物质检查不符合规定。使用的动物如果在敏感性检查后仍符合要求，可继续用于检查降压物质。21，原始记录，组胺参考溶液及其稀释液的制备，供试品溶液的制备，实验动物的种类和性别，体

9、重(许可证号),麻醉剂的名称，制剂和剂量，抗凝剂的名称和剂量，血压计的记录，模型动物基础血压的测定，动物敏感性的测定，供试品溶液和参考稀释液的注射量测量和结果判断的完整图，22，组胺试验方法， 附录十九化学注射安全试验方法应用指导原则，化学注射的安全试验包括异常毒性、细菌内毒素(或热原)、抗高血压物质(或组胺物质)、过敏反应等。 根据处方、工艺、用法和用量，设置相应的检验项目，并进行适用性研究。本法中组胺物质的检查检查方法参见附录“组胺物质检查方法”。24，设定限制前先学习。在确定极限之前，应研究测试产品对由组胺控制引起的离体豚鼠回肠收缩反应的干扰(抑制或增强)，并可获得无收缩干扰的最大浓度。

10、如果配方、生产工艺和其他可能影响试验结果的条件发生变化，应重新进行干扰试验。在干扰试验中，根据组胺试验方法，按照以下顺序准确注射低剂量、低剂量、高剂量和高剂量的试验稀释剂和参考稀释剂(dS T、DsT、dSH T、dSH)。重复一次。如果本品引起的反应值与本品引起的反应值基本相同，则可视为试验品，否则不宜设置组胺试验项目，建议设置抗高血压试验项目。26、除特殊要求外，原则上限量测定与抗高血压药物的检查限量一致。注射液中组胺的检测限按临床单剂量的1/55倍和每公斤体重0.1g组胺剂量计算。计算公式为：限值L=K/M，其中K为人体每公斤体重所接受的组胺量(0.1g/kg)，M为抗高血压物质的检查限

11、值(mg/kg)，试验剂量应低于无收缩干扰的最大剂量。抗肿瘤药物、心血管药物和其他急重症应尽量高剂量使用。27，组胺试验方法，定义：本法系统比较了组胺对照品(S)和供试品(T)引起的豚鼠离体回肠收缩程度，以判断供试品中所含组胺的限度是否符合要求。28.对照品溶液的制备：准确称取适量的磷酸组胺对照品，按组胺计算，加水溶解并定量稀释，制成每1毫升含1.0毫克的溶液，然后装在合适的容器中保存。在保证收缩活动符合要求的前提下，可在3个月内使用。29.标准物质稀释剂的制备。在试验当天，根据高剂量组和低剂量组(dSH和dS)，准确测量适当量的组胺对照品溶液，并用氯化钠注射液稀释。高剂量dSH不应导致回肠收

12、缩达到极限，低剂量DSh引起的响应值约为高剂量的一半，因此可以通过调整剂量来重复。一般来说，高剂量和低剂量组胺的最终浓度为10-610-8g/ml，注射体积为0.21.0ml .30。根据参考物质稀释剂的种类和低剂量(dS)下规定的限值，将供试品溶液的制剂制备成合适的浓度。在测试过程中，测试溶液和参考稀释剂的注射体积应该相等。31.回肠肌营养液的制备。溶液甲：实验当天，将160.0克氯化钠、4.0克氯化钾、2.0克氯化钙(按无水物质计算)、1.0克氯化镁(按无水物质计算)和0.10克磷酸氢二钠(包括12种结晶水)加入700毫升注射用水溶解，然后加入适量注射用水，使溶液乙：取0.5克硫酸阿托品，

13、 1.0克碳酸氢钠和0.5克葡萄糖(含一结晶水)，加入适量注射用水溶解，加入50.0毫升溶液A，混合，加入注射用水至1000毫升。 液体b应在使用前准备好，并在24小时内使用。检查方法：健康合格的成年豚鼠，雌雄不限，无妊娠，体重250350克，禁食24小时，迅速处死并抽血。立即剖腹取出一段回肠(选择最敏感的远端肠段)，注意避免牵拉造成回肠损伤，必要时小心分离肠系膜。剪下23厘米的长度，用注射器抽取上述溶液B，并仔细冲洗肠段的内容物。肠段下端固定在体外器官恒温水浴装置的浴槽底部，上端通过导线与肌肉张力传感器连接；将一定量的硼溶液(约1030毫升)预先放入浴中，并引入95O2和5CO2的混合气体两次相邻给药之间的时间间隔应保持一致(约2分钟)，并应在每次给药前先前的反应稳定后进行。33、取参比稀释液和供试品溶液，按照下列顺序准确地注入到浴液中：稀释度、稀释度、稀释度、稀释度和稀释度。如果由dSH引起的反应值大于由dS引起的反应值，则判断测试有效。如果测试溶液引起回肠收缩，分别计算由dS和dT引起的反应平均值。如果由dT引起的反应的平均值不大于由dS引起的反应的平均值，则判断被测产品的组胺试验符合要求；如果由dT引起的反应的平均值大于由dS引起的反应的平均值