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文档简介

1、孝感市第一高级中学 何小钊,基因工程中的工具酶,一轮复习,限制酶 “分子手术刀”,DNA连接酶 “分子缝合针”,这两种酶属于基因工程中的重要考点，在最近三年的全国卷考试中多次考查，该考点也是学生难以深入掌握的考点之一。,限制酶,存在位置：主要存在于原核生物。,作用：识别DNA中特定的脱氧核苷酸序列，并使每一条链中 特定位点的两个脱氧核苷酸之间的磷酸二酯键断开。,特性：一种限制酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列， 并在特定的位点切割。,产生末端的种类：黏性末端和平末端,DNA连接酶,作用：将DNA片段缝合起来，恢复被限制酶切开的两个脱氧 核苷酸之间的磷酸二酯键。,种类：E.coliDNA连接酶

2、T4DNA连接酶 来源：大肠杆菌 T4噬菌体 特点： 只连接黏性末端 黏性末端（高）和平末端 都可缝合,一轮复习过程中需要关注的几个问题,1. 限制酶和DNA连接酶的化学本质都是蛋白质，都属于一类酶的统称，而不是属于某一种酶，且都作用于磷酸二酯键。,2. 限制酶所识别的序列，两条单链的碱基序列一般相同且碱基互补配对(简称为回文序列）。,故同一限制酶切割产生2个黏性末端相同且碱基互补配对,5,5,3,3,3. 在识别序列中轴线两侧切开形成的是黏性末端，而在 识别序列中轴线处切开形成的是平末端。,EcoRI限制酶的切割,SmaI限制酶的切割,4. 限制酶不切割自身DNA的原因是原核生物DNA分子中

3、不存 在该酶的识别序列或识别序列已被修饰。,5. 将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切2处，同时产生 4个黏性末端或平末端，破坏4个磷酸二酯键。,6.限制酶的选择原则上不能破坏目的基因和载体（如抗性基因等）。 获取目的基因和切割载体时一般选择两种不同的限制酶切割，目的是防止目的基因和载体自身的环化，同时也可以提高目的基因和载体连接的效率。,最佳选择：用Pst和EcoR切割目的基因和载体,（1）据图推断，该团队在将甲插入质粒P0时，使用了两种限制酶，这两种酶是_。使用这两种酶进行酶切是为了保证_，也是为了保证_。,真题演练,E1和E4,甲的完整,甲与载体正确连接,1（2018全国卷）某种荧光

4、蛋白（GFP）在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。某科研团队将某种病毒的外壳蛋白（L1）基因连接在GFP基因的5末端，获得了L1-GFP融合基因（简称为甲），并将其插入质粒P0，构建了真核表达载体P1，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中E1E4四种限制酶产生的黏性末端各不相同。,2（2016全国卷）图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR、BamH和Sau3A三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR、Sau3A的切点是唯一的）。,（1）经BamH酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被酶切后的产物连接，理由是,（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有 和 其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是

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