肺部感染的实验室检查.ppt

1、肺部感染的实验室检查,第二军医大学长征医院 全军临床免疫研究所,仲人前,2,肺部感染的临床特点肺部感染的发生过程肺部感染实验室检查实验室检查质量保证,报告提纲,3,肺部感染的临床特点,肺部感染临床症状相似，以咳嗽、咳痰为主 感染的病原体繁多，不同年龄，不同季节，不同环境，不同基础疾病感染的病原体不同 针对不同的病原体应采取针对性的治疗方法,4,肺部感染的发生过程,遗传因素,环境因素,免疫因素,肺部感染,病原体,5,病原体感染的易感基因,Adrian VS Hill, Phil Trans R Soc B (2012) 367, 840849,6,肺部感染的环境因素,生物燃料 吸烟 空气污染 滥

2、用抗生素 免疫抑制剂 气候变化,Robert J. Laumbach, J Allergy Clin Immunol. 2012 January ; 129(1): 313 Joon Young Song. J Korean Med Sci 2013; 28: 4-15,7,Effect of cigarette smoke on inflammation,J. Lee, J Dent Res. 2012; 91(2): 142149,8,肺部感染的免疫因素,TLR on airway epithelial cells,Yong Li, Clin Dev Immunol. 2012; 2012

3、: 791392,9,肺部感染的免疫因素,Epithelial cell produced chemokines and cytokines against bacteria infections,Yong Li, Clin Dev Immunol. 2012; 2012: 791392,10,肺部感染常见病原体类型,细菌性肺炎 如肺炎链球菌、甲型溶血性链球菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷白杆菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌、埃希大肠杆菌、结核杆菌等 真菌性肺炎 如白念珠菌、曲霉菌、放射菌等 病毒性肺炎 如冠状病毒、腺病毒、流感病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等 非典型性肺炎 如军团菌、支原体和衣原体

4、等 其它病原体所致的肺炎 如立克次体、弓形虫、原虫、寄生虫如肺包虫、肺吸虫、肺血吸虫）等,11,英国肺炎病原体,12,肺部感染的实验室检查,1、根据检验常规初步判定是否感染 2、根据感染部位推测可能的病原体 3、根据感染人群推测可能的病原体 4、根据可能的病原体选择检测方法,13,肺部感染的实验室检查,1、根据检验常规初步判定是否感染 血常规 CRP PCT 内毒素 G试验，GM试验,14,血常规检查,15,CRP （C reactive Protein）,与肺炎链球菌C多糖体反应 是一种重要的急性时相反应蛋白 血清CRP由肝脏合成,半衰期19小时 IL-1、IL-6、TNF是其最重要的调节因

5、子,16,Diagnostic accuracy of CRP in combination with IL-6 and IL-8,Nora Hofer, Neonatology 2012;102:2536,17,PCT （ procalcitonin）,Procalcitonin（降钙素原）由细菌内毒素诱导产生 升高：严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭 不升高：自身免疫、过敏和病毒感染 不升高：局部有限的细菌感染、轻微感染和慢性炎症,18,PCT as to Guide Antibiotic Therapy in Adult Patients with Respirator

6、y Tract Infections,David N. Gilbert, Clinical Infectious Diseases 2011;52(S4):S346S350,19,G试验,G试验检测的是真菌的细胞壁成分-(1,3)-D-葡聚糖，人体的吞噬细胞吞噬真菌后， 能持续释放该物质，使血液及体液中含量增高（浅部真菌感染无类似现象）。1-3-D-葡聚糖可特异性激活鲎（Limulus）变形细胞裂解物中的G因子，引起裂解物凝固，故称G试验。 适用于除隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、根霉菌等）外的所有深部真菌感染的早期诊断，尤其是念珠菌和曲霉菌，但不能确定菌种。 以下情况可出现假阳性：（1）使用纤维

7、素膜进行血透，标本或患者暴露于纱布或其他含有葡聚糖的材料；（2）静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；（3）链球菌血症；（4）操作者处理标本时存在污染。（5）另外，使用多糖类抗癌药物、放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液等也可能造成假阳性，食用菌类，如蘑菇等食物可以导致假阳性。,20,GM试验,GM试验检测的是半乳甘露聚糖（galactomannan)，曲霉菌特有的细胞壁多糖成分是（1-5）呋喃半乳糖残基，菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原。 主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断，GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度。连续

8、检测GM可作为治疗疗效的监测。在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高。 以下情况可出现假阳性：（1）使用使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦；（2）新生儿和儿童；（3）血液透析；（4）自身免疫性肝炎等；（5）食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物和污染的大米等。 以下情况可出现假阴性：（1）释放入血循环中的曲霉GM（包括甘露聚糖）并不持续存在而是会很快清除；（2）以前使用了抗真菌药物；（3）病情不严重；（4）非粒细胞缺乏的患者。,21,病原学诊断,2、根据感染部位推测可能的病原体,22,病原学诊断,3、根据感染人群推测可能的病原体 社区获得性感染：肺炎链球菌，流感嗜血杆菌，卡他莫拉菌，军团菌，肺

9、炎支原体，沙眼衣原体，肺炎衣原体，金黄色葡萄球菌 医院获得性感染：肺炎克雷伯菌，大肠埃希菌，铜绿假单胞菌，鲍曼不动杆菌，嗜麦芽窄食单胞菌，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 免疫缺陷患者感染：卡氏肺孢子菌，结核分支杆菌，奴卡菌，曲霉菌 肺部特殊病原体感染：鼠疫耶尔森菌，放线菌，炭疽杆菌，球孢子菌，组织胞浆菌，结核分支杆菌，奴卡菌，弗朗西斯菌，隐球菌，洋葱伯克霍氏菌，马红球菌，立克次体,23,CAP、HAP的发病时间和病原体构成,48hHAP 早期5天,肺炎链球菌,流感嗜血杆菌,HAP 中期5天,HAP 晚期,MSSA or MRSA,肠杆菌属,肺炎克雷伯菌, 大肠杆菌,绿脓杆菌,不动杆菌属,嗜麦芽窄食假

10、单胞菌,3,5,10,15,20,CAP48h,主要致病菌,多为非多重耐药菌，预后好,肺炎支原体,G菌为主, G菌比例较早发性HAP低,2,0,入 院 时 间（天）,多为多重耐药菌株,ATS. Am J Respir Crit Care Med.2005;171.38841,嗜肺军团菌,24,病原学诊断,4、根据可能的病原体选择检测方法 培养：细菌、真菌 染色镜检：结核分枝杆菌、真菌、肺孢子菌 病原体鉴定：生化鉴定、质谱分析（布鲁克、梅里埃） 抗原检测：肺炎链球菌（尿抗原）、军团菌（尿抗菌）、 病毒、支原体、衣原体、真菌 抗体检测：立克次体、军团菌 PCR：所有病原菌，尤其是难培养的细菌和病毒

11、 细胞因子检测：INF-,25,培养基的选择 增菌培养基：肉汤、碱性蛋白胨水 基础培养基：营养琼脂、M-H琼脂 选择培养基：麦康凯琼脂、SS琼脂 鉴别培养基：胆汁七叶苷琼脂 厌氧培养基：厌氧血平板,接种方法 肉汤增菌：血液、脑脊液等 蛋白胨水增菌：粪便（弧菌） 平板划线接种：其他标本（四区划线法）,26,染色镜检,直接镜检：湿片法或悬滴法，观察细菌动力 革兰染色镜检：阳性（紫色）、阴性（红色） 抗酸染色镜检：抗酸菌（红色） 其它染色镜检：a.荚膜 b.鞭毛 c.异染颗粒,27,流感嗜血杆菌,肺炎克雷伯菌,28,六胺银染色（肺孢子菌）,PAS染色（肺诺卡菌）,肺活检组织抗酸杆菌,29,生化鉴定,

12、利用细菌可以分解、发酵不同的底物： 葡萄糖、乳糖等糖类，氨基酸、盐类等 产生不同的代谢产物的特性： 酸性、碱性、产气等等,30,质谱与传统细菌鉴定仪的区别,31,抗原抗体检测,32,分子诊断,定性PCR 实时荧光定量PCR 多指标检测平台,33,呼吸道感染常见病原体及检测方法,肺炎病原体分子诊断平台,Bhat N，Use and Evaluation of Molecular Diagnostics for Pneumonia Etiology Studies. Clinical Infectious Diseases 2012;54(S2):S1538,34,肺炎病原体分子诊断平台的条件,35,Antigen-specific T cells,Liu HY, Hepatobiliary Pancreat Dis Int 2006; 5(1):129-132,36,37,实验室检查的质量保证,分析前影响因素 分析中影响因素 分析后影响因素,38,Review of laboratory errors,39,Boni