《免疫学诊断与防治》PPT课件

1、免疫学诊断和防治，海南医学院微生物学和免疫学教研室的制作，版权所有2009，免疫学诊断，一，抗原或抗体的检测，二，淋巴细胞的检测，三，免疫学检测方法的应用，(一)抗原抗体反应的原理，免疫学诊断，一键力大和亲和力强，难解离，反之亦然。 (3)适宜的条件2、抗原抗体反应的可见性抗原抗体以适宜的比例结合，形成肉眼可见的现象。 应用1、已知抗原检测未知抗体；(1)检测病原微生物相应抗体辅助诊断疾病：伤寒论、流行性乙型脑炎、AIDS病等。 (2)自身抗体诊断自身免疫病的检测： SLE、类风湿性关节炎等2种，在已知抗体中检测未知抗原；(1)病原菌的鉴定：诊断疾病；(2)肿瘤相关抗原的检测：检测甲氧西林诊断

2、肝癌；(3)血型抗原、HLA抗原：凝集反应、沉淀反应、补体相关的抗原抗体反应免疫标记技术； 凝集反应(agglutination )、颗粒性抗原(红血球、细菌、乳胶粒子等)与抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。 1、直接凝聚(direct agglutination )玻璃片凝聚、试管凝聚2、间接凝聚(indirect agglutination )可溶性抗原被乳胶粒子或红细胞表面包围，与相应的抗体混合出现的凝聚现象。 3 .抗球蛋白试验(Coombs试验)抗原与一价抗体(不完全抗体)结合不出现凝聚块，加入抗球蛋白后形成凝聚块。 用于检测抗Rh抗体以诊断新生儿溶血性贫血。 直接凝聚、乳胶颗粒

3、、红细胞、风湿因子检测妊娠试验、间接凝聚、直接凝聚、(2)沉淀反应、(1)单向免疫扩散可溶性抗原(免疫球蛋白、细胞裂解物、组织浸液等)与相应的抗体结合，形成不溶性多在半固体琼脂凝胶上进行，形成白色沉淀。 沉淀环、抗体与琼脂凝胶混合而成板，环直径与抗原含量呈正相关，常用于2，双向免疫扩散：抗原或抗体的定性检测、组成和两种抗原相关分析。 有一致、部分一致、不一致、多种成分、3、免疫电泳(immunoelectrophoresis )，常用于血清蛋白的种类分析，观察Ig的异常增加或缺损。 如骨髓瘤及性连低c型球蛋白血症的诊断，4，免疫比浊法(immunonephelomtry ) :快速简便。 用于

4、血清IgG、IgA、IgM、补体C3、C4含量的测定，(3)与补体相关的抗原抗体反应，1，50 %补体溶血试验(CH50测定)血清总补体量的测定，(2)补体结合试验(complemeem )原理：用已知的指示系统检查测试系统是否与补体结合诊断，测试原理？ 检测系统：待测样品和已知抗原(或抗体)，指示系统： SRBC和溶血素、溶血阴性； 不溶血的阳性可通过用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应提高免疫学诊断的敏感性，荧光素：异硫氰酸荧光素(黄绿色荧光)、藻红蛋白、若丹明(红色荧光)、放射性同位素： 125I、131I，酶：辣根过氧化物酶液相(ELISA )、固相(免疫组化技术)、直接荧光法、间接

5、荧光法、间接ELISA、双抗夹心法、酶免疫吸附试验(enzymelinkedimmunosorbentassion )。 用于抗原抗体及DNA、RNA的检测。 蛋白和某些微生物中的蛋白质、抗细胞因子的抗体包复、(1)、(2)、(3)、(4)、抗原包复可用于测定起到细胞分泌作用的单一细胞因子，也可测定分泌特异性抗体的b细胞的度数。 放射免疫检查法(RIA ) :灵敏度达到了pg水平。 常用于胰岛素、生长激素、甲状腺激素、孕酮等激素，吗啡、地高辛等药物及IgE等微量物质的测定。 可分离分子大小不同的蛋白质，确定其分子量，常用于多种病毒的抗体和抗原，如抗HIV抗体的检测。二、淋巴细胞的测定、(一)淋

6、巴细胞的分离和类型鉴定、一、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖泛影葡萄糖密度梯度离心法、白膜层、单核细胞、淋巴细胞、b、t、CD3、CD4、CD8单克隆抗体测定患者外周血t细胞表面的对应抗原CD3 T细胞修正CD4 CD4 T细胞、CD4 T细胞数。 CD8 CD8 T细胞通过校正CD8亚群t细胞数来校正CD4 /CD8的比例，健康人PMB中t细胞占6575% CD4 /CD8约1.52，(3)流式细胞术，2，淋巴细胞的mIgM， mIgD单克隆抗体可检测检测出患者外周血b细胞表面相应抗原的b细胞数目，(2)串珠分离法：抗CD4交联玻璃珠可以分离t细胞中的CD4 T细胞和CD8 T细胞。 健康人外周

7、血中的SmIg细胞占812%，流式细胞仪、(二)淋巴细胞功能测定、1，t细胞功能测定、(1)T细胞增殖试验(淋巴):丝裂原、抗CD3单克隆抗体等异常活化t形态学观察法3H-TdR渗透法：用液体闪烁器进行样品的放射线放射(2)淋巴细胞介导的细胞毒试验(lmc)ctl、NK、LAK、TIL细胞杀伤目标细胞的功能，51Cr放出法细胞凋亡检查法： TUNEL法(tdtdependentdutp-biotinnickendlabeling )，FACS测定法，(3)细胞毒试验(LMC )。 IL-2、IL-2R、rIFN、TNF等的检测ELISA法生物活性测定法聚合酶链反应(PCR )法，(2)抗体形成

8、细胞测定溶血空斑试验(hemolytic forming cell assay，hemolytic forming cell assay检查) ELISPOT法检测特异抗体形成细胞，3，体内免疫细胞功能测定：皮肤试验，(1)迟发型超敏反应：原结核菌素试验(OT试验)皮试()细胞免疫功能缺损免疫调节(immunomodulation )利用物理、化学和生物学手段调节机体免疫功能，增强或减弱原来的免疫功能。 免疫重建(immunoreconstitution )将免疫功能正常的个体造血干细胞或淋巴细胞移植到有免疫功能缺陷的个体中，使后者的免疫功能全部或部分恢复。 分类，一、免疫增强疗法和免疫抑制疗

9、法，三、主动免疫治疗(active immunotherapy )和被动免疫治疗(passive immunotherapy )，二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗，抗体为2 .胎盘(c种)球蛋白：被动预防感染，c种球蛋白3 .抗菌免疫血清：效果不显着4、抗病毒免疫血清：病毒感染预防5、抗淋巴细胞蛋白：淋巴细胞抑制。 用于防止器官移植排斥反应和自身免疫性疾病的治疗。 二、单克隆抗体(mAb )、1、抗细胞表面分子的单克隆抗体：抗CD3单克隆抗用于治疗急性移植排斥反应；2、抗细胞因子的单克隆抗体：抗IL-1、抗TNF单克隆抗可减轻炎症反应； 用于治疗类风湿性关节炎等的3 .抗体诱导药物治疗(靶

10、向治疗):以特异性单抗为载体，承载化学药物(阿霉素、甲氨喋呤等)、毒素(赖氨酸等植物毒素，白喉毒素等细菌毒素)、同位素(131I，125I，111In )等细胞毒性物质基因工程抗体：降低抗体的免疫原性，1、嵌合抗体、2、人源化抗体、3、完全人源化抗体、4、单链抗体、二价抗体、双特异性抗体、抗原为2 .抗原以分子或片段的形式进行免疫治疗：表面抗原疫苗、核酸疫苗或DNA疫苗以疫苗、细胞因子及其拮抗剂为基础的免疫治疗，1、细胞因子补充和添加疗法：重组细胞因子作为免疫应答调制剂(BRM )治疗肿瘤、感染、造血障碍等。 干扰素、IL-2、TNF、CSF、EPO等2、细胞因子阻断和拮抗疗法：自身免疫性疾病

11、的治疗、移植排斥、感染性休克等。 如TNF单抗、IL-1R拮抗剂等。 3、细胞因子基因疗法：细胞因子转基因技术、细胞基础免疫治疗、1、骨髓移植(1)自体骨髓移植(2)异体骨髓移植(3)脐血干细胞移植、2、免疫效果细胞(1)同种淋巴细胞被动转移：注意配合外周血淋巴细胞在体外培养IL-2后诱导产生其杀伤肿瘤细胞不需要抗原致敏，无MHC限制性。 主要是NK细胞、til (tumorinfiltratinglymphocytes )细胞肿瘤浸润淋巴细胞。 从实体肿瘤组织中分离得到，体外il2培养后，杀伤活性比LAK细胞强。 cik (cytokininductivekillercells )细胞因子诱

12、导的杀伤细胞。 在抗CD3mAb中活化，是由il2、tnf及tnf等组合而成的细胞因子。 支持外周血单核细胞的增殖和向CD3 CD56杀伤细胞的分化，具有比LAK更强的杀伤活性。(1)免疫增强剂、化学制剂： 1、左旋咪唑2、西咪替丁、微生物制剂： 1，BCG) 2、棒状杆菌3、微生物提取物、中药制剂：黄芪、人参、枸杞子等适应证：免疫功能下降患者；(1)恶性肿瘤；(2)免疫缺陷症；(3)感染症，副作用：轻烷基化剂：环磷酰胺2，抗代谢药：激素：糖皮质激素激素真菌代谢产物1中药及其有效成分雷公藤多甙，免疫抑制药的适应症和副作用，适应症：免疫功能过高而引起机体障碍的患者1，抗移植排斥2，超感受性反应性

13、疾病：激素3， 自身免疫性疾病：激素、雷公藤多甙4，感染性炎症：激素，副作用：明显主要包括骨髓抑制、肝肾毒性等抑制灭活疫苗(死亡疫苗)和弱毒疫苗。 麻疹疫苗、小儿麻痹疫苗、乙肝疫苗等。 类毒素是用甲醛减毒细菌毒素调制而成的具有免疫原性的物质。 例如喉类毒素、破伤风类毒素。 (二)人工被动免疫是将含有特异性抗体的免疫血清、细胞因子等制剂注射到人体内，治疗或紧急预防感染的措施。 抗毒素、人免疫球蛋白制剂、细胞因子制剂、单抗制剂等。 (1)人工主动免疫(artificial active immunization )是用疫苗、类毒素接种机体，产生特异性免疫，预防感染的措施。 一、人工免疫，(三)订正免疫，productionofanattenuatedorganism，Pathogenic virus，Isolate virulence gene，delete productionofatoxoidfrom