拓展视野　神奇的基因芯片 (2).ppt

1、有关基因工程中的“酶切”和“酶连”的题型分析,无锡市洛社高级中学 刘晓燕,学习目标：,1.会分辨不同的黏性末端，并会书写黏性末端及产生过程 2.会自主分析单酶切和双酶切产生的结果 3.会选择正确的限制酶切割目的基因和质粒 4.会判断及分析限制酶的切割位点在质粒或DNA上的个数及位置 5.会分析切割后的质粒与DNA片段连接形成的重组质粒种类 6.会分析限制酶切割重组质粒产生的DNA片段种类,历年江苏高考中基因工程内容考查的分值,考查1.限制酶切割产生的黏性末端,G CCTAG,G CTTAA,A TTCGA,A TCTAG,例1：,BamHI,G GATCC CCTAG G,考查2.限制酶切割产

2、生的DNA片段的种类,1个酶切位点上被该酶切断：,2个酶切位点上被该酶切断：,3个酶切位点上被该酶切断：,a, bcd, ab, cd, abc, d,a, b, cd, a, bc, d, ab, cd,a, b, c, d,a, b, c, d, ab, cd, bc, abc, bcd,例2：,例3：Msp I、BamH I、Mbo I、Sma I 4种限制酶识别的碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。,考查3.选择相应的限制酶切割目的基因、质粒,质粒和目的基因D通过同一种限制酶处理后进行连接,BamHI识别的碱基序列和酶切位点为GGATCC,例4：,M

3、sp I、BamH I、Mbo I、Sma I 4种限制酶识别的碱基序列和酶切位点分别为CCGG、GGATCC、GATC、CCCGGG。,考查4.判断限制酶的切割位点在质粒或DNA上的个数及位置,Kpn,EcoR,EcoR,400,400,200,例6：,Mbo,Mbo,6kb,5.5kb,2.5kb,EcoR ,例7：,考查5.切割后的质粒与DNA片段连接形成的重组质粒种类,例8：,1,2,3,4,考查6：限制酶切割重组质粒产生的DNA片段种类,采用EcoR和Pst酶切重组质粒T，得到_种DNA片断。,采用EcoR和Sma酶切重组质粒T，得到_种DNA片断。,AG TC,G AATTC,CC

4、C GGG,例9：,G AATTC,2,1,【学以致用】,（16年苏锡常镇二模）pBV220载体是我国预防医学科学院病毒研究所自行构建并广泛应用的大肠杆菌温控载体，大小为3666bp(bp表示碱基对)，其结构如下图所示。图中PRPL是启动子，rrnB是基因转录终止信号，Ampr是氨苄青霉素抗性基因，ori是质粒复制起点，EcoR、Hind等为各种限制性内切酶。请据图回答下列有关问题： 该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割。单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段。若以A的切割位

5、点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为 ，C的两个切割位点与A点的最短距离分别为 、 。,2666 bp,500 bp,250 bp,250 bp,该质粒可被A、B、C三种限制性内切酶同时切割。单独A切割得一条长链，单独B切也得一条长链，A和C同时切割得2个500bp和1个2666bp片段，B和C同时切割得2个250bp和1个3166bp片段。若以A的切割位点为计算起点，则B的切割位点与A点最短长度为 ，C的两个切割位点与A点的最短距离分别为 、 。,1000bp,750bp,500bp,【综合运用】,（16年江苏）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题： （1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用 两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过 酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒，需将其转入处于 态的大肠杆菌。,Bcl和Hind,DNA连接,感受,（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加 ，平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中 。 （3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。 （4）若