溶血性实验室检测.ppt

1、溶血性贫血实验室检测内容,红细胞渗透脆性试验,【目的】 掌握红细胞渗透脆性试验的原理、方法、注意事项及临床意义。 【实验原理】 红细胞渗透脆性试验是检测红细胞对不同浓度低渗盐溶液抵抗力的一种半定量试验。红细胞在低渗盐溶液中会因为水的渗入而逐渐膨胀，导致溶血，其脆性主要取决于细胞表面积与其体积之比值。比值愈小，红细胞抵抗力愈小，渗透脆性增加。反之，红细胞抵抗力愈大，渗透脆性减低。,1. 取12支小试管，排成一排，按照下表操作： 试管编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 蒸馏水 （滴） 1%NaCl （滴） NaCl最终 2.4 2.8 3.2 3.6 4.0 4.4 4.8

2、 5.2 5.6 6.0 6.4 6.8 浓度(g/L),实验方法,2. 用干燥消毒注射器静脉取血1ml ，将注射器平执，针头斜面向上平搁在试管口，小心推动注射器，每管加入1滴血，轻轻摇匀；若患者有贫血，可每管加两滴。,3.各管置于室温静置2h，红细胞自然沉淀或溶解，从高浓度管开始观察上层液体的颜色及管底沉淀。 4. 记录红细胞开始溶血（上层液体开始有淡红色出现，管底尚有多量未溶的红细胞）和完全溶血（上层液体呈红色，管底无红细胞）时NaCl浓度。,1. NaCl必须干燥，准确称量，用前新配。 2. 加入血液前需将蒸馏水和NaCl溶液混匀. 3. 试剂加量要准确，血液应直接滴入液体中，不能沿 管

3、壁流入。 4. 空针及针头必须干燥，以免溶血。红细胞在低渗液中很容易被机械力所破坏，故不应用力振荡。,注意事项,蔗糖溶血试验,【实验原理】 蔗糖溶血试验用于检测PNH患者的红细胞缺陷。患者的红细胞在低离子强度的蔗糖溶液中对补体的敏感性增强，经孵育，补体与红细胞膜结合加强，使其缺损，结果导致蔗糖溶液通过缺损处进入红细胞，引起渗透性溶血。而正常人红细胞则不发生溶血。,【实验方法】 1. 取健康人与患者同型或AB型新鲜血清0.05 ml，加10% 蔗糖溶液0.85 ml，混匀。 2. 加待测者50%的红细胞悬液0.1 ml，混匀。 3. 置37 水浴箱30min 后，取出直接观察或低速离心后观 察有

4、无溶血。 【实验结果】 上清液呈红色为阳性，无色为阴性。,酸化血清溶血试验,【实验原理】 PNH患者体内存在对补体敏感的红细胞，在酸化的正常血清中（PH值6.6-6.8），经孵育，补体被激活，红细胞被破坏，产生溶血。而正常红细胞不被溶解，无溶血现象出现。,1. 取试管两支，按下表操作： 测定管 对照管 正常人血清（ml）0.5 0.5 0.2 mol/L HCL (ml) 0.05 / 50%被检者红细胞悬液（ml）0.025 0.025 生理盐水（ml） / 0.05,实验方法,2. 混匀后，试管加塞，置37 水浴1 h ，低速离心后，观察上清液有无溶血现象。 【实验结果】 如阴性对照管不溶血而测定管溶血为阳性反 应，如测定管不溶血则为阴性反应。,1. 一切用具要干燥，针头要粗，以免溶血。 2. 红细胞要洗净，HCL加量要准确，血清要新鲜，以免补体失活。 3. 加酸时勿加在管壁上，并将酸与血清混匀后，再加红细胞悬液，而且红细胞悬液要直接滴入，不要沿管壁流下，以免溶血。 4. 血清酸化后用塞盖好，以免二氧化碳逸出而降低了血清的酸度，以致溶血程度减低。 5. 若患者经多次输血，其血