医学免疫学课件：22 23 免疫诊断与防治

1、第二十二章 免疫学检测技术的基本原理,主要内容,抗原或抗体的检测 免疫细胞的检测,抗原抗体反应特点,抗原抗体反应的特异性 抗原抗体反应的可逆性 抗原抗体反应的可见性 抗原抗体比例合适 肉眼可见IC (凝集物，沉淀物）,第一节 检测抗原或抗体的体外试验,抗原-抗体反应影响因素,1 电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为 稀 释液 ，以供给适应浓度的电解质。 2 温度：一般常使用反应在37度水浴 或孵育箱中进 行。 3.酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度 为PH68。,抗原-抗体反应受多种因素影响,往往采用人或动物的血清作为抗体来源， 体外的抗原抗体反应也称血清学反应。 经典的血清学

2、反应： 凝集反应（agglutination reaction) 沉淀反应(precipitation reaction) 免疫标记技术,（一）凝集反应(agglutination),颗粒性Ag 与相应 Ab结合后，出现肉眼可见 的凝集物。,直接凝集反应 间接(被动)凝集反应,1. 直接凝集反应,玻片法： 定性，已知抗体测未知抗原 细菌的鉴定和分型 人类ABO血型测定,1. 直接凝集反应,试管法： 定量，用已知抗原测未知抗体的量 肥达氏试验-诊断伤寒和付伤寒,2. 间接凝集反应,可溶性抗原 载体颗粒 免疫微球 （致敏载体）, 抗体,凝集,间接凝集反应：可溶性抗原先吸附在一与 免疫反应无关的颗粒

3、载体 上，成为致敏颗粒，再与 相应抗体结合，出现的凝 集现象.,常用的载体颗粒,乳胶颗粒,人O型RBC、绵羊RBC,(二) 沉淀反应,概念：可溶性抗原与相应抗体结合，在 一定条件下形成沉淀物的现象。 可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、 组织浸出液、细菌滤液等 类型： 1）单向琼脂扩散试验(singlel agar immunodiffusion) 2）双向琼脂扩散试验(double agar immunodiffusion) 3）对流免疫电泳（counter immunoeletrophoresis),1）单向琼脂扩散试验,应用：Ag鉴定，定量,2）双向琼脂扩散试验,(三) 免疫标记技术,利用荧光

4、素、酶、放射性核素等标记抗体或抗原进行的抗原抗体反应。 四大标记技术： 1）免疫酶测定(enzyme immunoassay, EIA) 酶联免疫吸附试验(ELISA） 2）免疫荧光技术(immunofluorescence technique) 3）放射免疫测定法(radioimmunoassay, RIA) 4）免疫胶体金技术（immunological colloidal gold signature, ICS),1. 酶免疫测定,用酶标记抗体进行的抗原抗体反应，通过酶作用于底物后显色来判断结果。 抗原抗体反应酶促反应,酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbe

5、nt assay, ELISA）,将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，再用酶标抗体进行检测的抗原抗体反应。 特点：敏感性高（ng-pg），操作简便 类型： 直接法(双抗体夹心法): Ab +Ag + Ab* 间接法: Ag +Ab + 抗Ab*,双抗体夹心法,2. 免疫荧光技术,免疫荧光技术:用荧光素标记一抗或二抗，检测特异 性抗原或抗体的方法。 分类： (1)直接荧光法 （2) 间接荧光法 结果观察: (1) 荧光显微镜 (2) 流式细胞仪(Flow cytometer，FCM),3、放射免疫测定法(radioimmunoassay,RIA),用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测的技术,

6、第二节 免疫细胞功能的检测,免疫细胞的分离 免疫细胞的功能测定,一、免疫细胞的分离,外周血单个核细胞 T、B细胞的分离与鉴定 磁珠分离法 荧光激活细胞分选仪分离法 （流式细胞术，FCM),外周血单个核细胞,二、免疫细胞功能的测定 （一） T细胞功能测定： (1)T 细胞增殖(转化)试验： 形态计数 3H-TdR或125I-UdR掺入法 MTT比色法 （2）皮肤试验,淋巴细胞转化试验（形态学示意图）,淋巴细胞增殖试验（3H-TdR掺入法）示意图,结核菌素,注射受试者前臂内侧皮内,红肿硬结0.5cm,阳性,观察局部超敏反应,4872小时后,无红肿硬结 或0.5cm,阴性,原理： 型超敏反应 步骤：

7、,皮肤试验（结核菌素试验）,应用：,OT试验,（二） B细胞功能测定 (1) 单向琼脂扩散试验等测定Ig的含量 (2) 抗体形成细胞测定 溶血空斑形成试验,第二十三章 免疫学防治,特异性免疫,自然免疫,人工免疫,自然被动免疫,自然主动免疫,来自母亲的抗体,自然感染 （隐性、显性）,人工被动免疫,抗毒素 免疫球蛋白,人工主动免疫,疫苗 类毒素,SIgA,IgG,一、人工主动免疫,输入抗原物质（疫苗，类毒素)，主动刺激机体免疫系统建立长期的免疫应答，获得特异性免疫力的方法。,作用: 预防或治疗,慢、持久,主动免疫 被动免疫,(一) 灭活疫苗 （二）减毒活疫苗 （三）类毒素,病原体灭活,减毒活病原体

8、,细菌外毒素脱毒,体液免疫,体液免疫、细胞免疫,类毒素（toxiod） 用细菌的外毒素经0.3%0.4%甲醛处理制成。 特点：毒性消失,保留免疫原性； 接种后能诱导机体产生抗毒素。 如：白喉类毒素 破伤风类毒素,（四）新型疫苗,亚单位疫苗： 提取病原体有效的免疫原成分制成的疫苗。 霍乱亚单位疫苗 结合疫苗：细菌荚膜多糖+白喉类毒素 合成肽疫苗： 用人工合成多肽抗原连接适当载体与佐剂 制成的疫苗。 猪口蹄疫合成肽疫苗 基因工程疫苗： 利用DNA重组技术制备的只含保护性抗原 的纯化疫苗。HBsAg疫苗,计划免疫Planed immunization,据某些传染病的疫情监测和人群免疫状况，按照规定的免疫程序有计划地对人群进行预防接种，提高人群免疫水平，控制以至最终消灭相应的传染病,二、人工被动免疫（Artificial passive immunization）,输入免疫效应物质（抗体等），使机体被动立即获得短期特异免疫力的方法。,快、短暂,应用：紧急预防或治疗,人工被动免疫制剂,抗毒素 人免疫球蛋白制剂 单克隆抗体 细胞因子,抗毒素的两重性：,异种抗原，可刺激机体产生抗马血清抗体，引起超敏反应（I，III）。,特异性抗体-中和外毒素,两类免疫方法的比较：,人工免疫