科技探索之路　细胞工程的发展历程 (4).ppt

1、专题二第二节动物细胞工程 单克隆抗体,制作人：于海书 朝阳市第一高级中学,1、抗体的化学本质？由什么细胞产生？,2、浆细胞是如何产生的？,3、一个B淋巴细胞能产生几种抗体？,知识回顾,走进生活,1、日常生活中什么时候需要注射抗体？,2、从哪获得的？,3、以上获取方法有什么缺陷？,单克隆抗体,【集思广益】 依据已学过的生物学技术 请尝试设计，可以克服以上缺陷的，抗体制备方案。,A组 如何让小鼠产生相应B细胞？ 在小鼠什么器官分离？分离得B细胞只有一种吗？ 诱导动物细胞融合的常用方法？ 融合的细胞有几种？,B组 如何从众多未融合及融合的细胞中筛选出杂交瘤细胞？ （请同学们参考学案B组资料卡给出的信

2、息）,C组 B组同学筛选出来的所有杂交瘤细胞都是同一种吗？ 如何从中筛选出能产生专一抗体的杂交瘤细胞？,选择性培养基筛选,不是,给小鼠注射相应抗原,脾脏,多种,灭活的病毒或聚乙二醇,B-B，瘤-瘤， B-瘤,氨基喋呤,专一抗体检测,克隆化培养,从培养液中分离,从小鼠腹水中分离,特点：,制备过程：,可大量制备 特异性强 灵敏度高,1.作为诊断试剂,三 、单克隆抗体的应用,2.用于治疗疾病和运载药物,”生物导弹 “,（单克隆抗体）,（抗癌药物和放射性同位素）,瞄准装置,杀伤性弹头,单克隆抗体,本节小结,1 制备 2 特点 3 应用,利用哪些细胞工程技术 两次筛选的目的和方法,作为诊断试剂 用于治疗

3、疾病和运载药物,：特异性强，灵敏度高， 可以大量制备,巩固练习,（1）_技术是单克隆抗体技术的基础。 （2）根据培养基的用途分类，图中HAT培养基属于_培养基。 （3）单克隆抗体与常规的血清抗体相比，最大的优越性是_。 （4）动物细胞融合除了采用植物细胞原生质体融合常用的诱导剂外，还可以采用_。 （5）选出的杂交瘤细胞既具备骨髓瘤细胞的_特点，又具备淋巴细胞的_特点。 （6）淋巴细胞是由动物体_中的_细胞分化、发育而来。 （7）杂交瘤细胞从培养基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是_。,1.下图是单克隆抗体制备流程阶段示意图。,动物细胞培养,选择,特异性强,灵敏度高,灭活的病毒,在体外大量增殖,分

4、泌特异性抗体,骨髓,造血干细胞,主动运输,作业：,2.下图是单克隆抗体制备过程示意图，据图回答：,（1）图中A过程是从小鼠的脾脏中取得_细胞，该细胞能够产生_。从小鼠体内提取分离该细胞之前，应给小鼠注射_类物质。 （2）B过程是一个_过程，该过程的进行需要灭活的_或_的诱导。 （3）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成_种类型的C细胞，因此需用_培养基筛选出D细胞用于 培养，D细胞的名称是 ，其特点是_ _ _ _。,浆细胞,抗体,抗原,细胞融合,病毒,聚乙二醇,选择性,3,又能产生特异性抗体,杂交瘤细胞,既能无限增殖,（3）假设仅考虑某两个细胞的融合，则可形成_种类型的C细胞，因此需用_培养

5、基筛选出D细胞用于 培养，D细胞的名称是 ，其特点是_ _ _ _。,选择性,3,又能产生特异性抗体,杂交瘤细胞,既能无限增殖,(4)在培养时通过_分裂方式大量繁殖。D细胞体外培养需要注意的条件是（要求答4项）_。 （5）单克隆抗体在疾病的诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，其特点是_。,特异性强、灵敏度高,有丝,无菌、无毒的环境；充足的营养；适宜的温度和pH；适宜的气体环境,A组 如何让小鼠产生相应B细胞？ 诱导细胞融合的常用方法？ 融合的细胞有几种？,B组 如何从A组同学得到的，混合多种细胞的培养液中，筛选出杂交瘤细胞？ （请同学们参考学案思考2给出的信息）,C组 B组同学筛选出来的杂交

6、瘤细胞都是同一种吗？ 如何筛选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞？,给小鼠注射相应抗原,灭活的病毒或聚乙二醇,3种： B-B，瘤-瘤， B-瘤,选择性培养基筛选,不是,脾脏,A组 如何让小鼠产生相应B细胞？ 诱导细胞融合的常用方法？ 融合的细胞有几种？,B组 如何从A组同学得到的，混合多种细胞的培养液中，筛选出杂交瘤细胞？ （结合学案思考2）,C组 B组同学筛选出来的杂交瘤细胞都是同一种吗？ 如何筛选出能产生我们所需专一抗体的杂交瘤细胞？,给小鼠注射相应抗原,灭活的病毒或聚乙二醇,B-B，瘤-瘤， B-瘤,选择培养基 筛选,专一性抗体检测 和克隆化培养,不是,脾脏 多种B细胞,多孔动物细胞培养板

7、,有限稀释法： 对培养液进行稀释，尽量保证每个小孔中的细胞数不多于1个，培养后，对上清液进行抗体检测。,克隆化培养和专一抗体检测（多次）,1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12,（多次）,1.作为诊断试剂,三 、单克隆抗体的应用,2.用于治疗疾病和运载药物,（单克隆抗体）,（抗癌药物和放射性同位素）,瞄准装置,杀伤性弹头,”生物导弹 “,特点： 可大量制备 特异性强 灵敏度高,1,2,3,4,？,杂交瘤细胞,单个B淋巴细胞,细胞群,化学性质单一，特异性强的抗体,克隆,产生,（单克隆抗体）,思考：,信息1： 一个B细胞在体外不可能无限增殖；,有什么办法让B淋巴细胞也具有无限增殖的能

8、力？,细胞融合,信息2： 我们学过的癌细胞有无限增殖能力；,一个B淋巴细胞（只分泌一种特异性抗体） 骨髓瘤细胞(能无限增殖),杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,动物细胞融合技术,单克隆抗体,既能产生特异性抗体， 又能大量增殖的细胞,1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验,1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合， 得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗 体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A、经过免疫的B淋巴细胞 B、不经过免疫的T淋巴细胞 C、经过免疫的T淋巴细胞 D、不经过免疫的B淋巴细胞,A,巩固练习,2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细

9、胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ ） 淋巴细胞 小鼠骨髓瘤细胞 B淋巴细胞自身融合细胞 小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 杂交瘤细胞 A B C D,C,3、动物细胞融合的目的中最重要的是（ ） A、克服远缘杂交不亲和 B、制备单克隆抗体 C、培育新物种 D、生产杂种细胞,B,4、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（ ） A利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞 B以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞 C抗癌物质在克隆细胞中大量合成 D单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合,D,5、“生物导弹”是指 （ ） A.单克隆抗体 B.杂交瘤细胞 C.产生特定抗体的B淋巴细胞 D.在单抗上连接抗癌药物,D,6

10、、由单克隆抗体研制而成的“生物导弹”由两部分组成，一是“瞄准装置”，二是杀伤性“弹头”，下列对此描述不正确的是（ ） A“瞄准装置”是由识别肿瘤的单克隆抗体构成B“弹头”是由放射性同位素、化学药物和毒素等物质构成C“弹头”中的药物有选择杀伤肿瘤细胞的功能D“生物导弹”是利用细胞工程制备出来的,C,抗体的传统生产方法,同种抗原,反复注射动物,从动物的血清中分离抗体,该法制备抗体的缺点： 产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,细胞融合,氨基喋呤,注射到小鼠腹腔,体外培养,从腹水中获得抗体,从培养液中获得抗体,扩大培养,讨论2：有几种融合细胞？,已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基蝶呤阻断。 淋巴细胞中虽有这两种DNA合成途径，但一般不分裂增殖。 鼠骨髓瘤细胞中只有D途径没有S途径