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文档简介
1、【使用时间】 第 9 周 第 2 课时【编辑】李玲珍 【审核】刘萍萍【编号】【主题】专题五 课题3 血红蛋白的提取和分离 2012.04.26【情景创设】 蛋白质是生命活动不可缺少的物质。对蛋白质的研究和应用,首先需要获得纯度较高的蛋白质。因此,从复杂的细胞混合物中提取、分离高纯度的蛋白质是生物科学研究中经常要做的工作。 血红蛋白是人和其他脊椎动物红细胞的主要组成成分,负责血液中O2和CO2的运输。在本课题中,我们将以血红蛋白为实验材料,学习蛋白质提取和分离的一些基本技术。【问题设计】1、 什么是凝胶色谱法?用这种方法分离蛋白质的原理是什么?2、 缓冲溶液的作用体现在哪里?如何配制缓冲溶液及控
2、制缓冲范围?3、 什么叫电泳?用电泳法分离一些生物大分子的原理是什么?常用的电泳方法有哪些?4、 简单说说哺乳动物的血液组成及血红蛋白的相关知识,如何对血样进行处理及对血红蛋白进行粗分离?处理后的血样发生了哪些变化?5、 简述凝胶色谱柱的制作及装填操作步骤,如何判断色谱柱的装填是否成功?回答P70旁栏思考。6、 如何加样及洗脱?此过程中需注意什么,可观察到什么现象?常用的对蛋白质进行纯度鉴定的方法是什么?7、 完成课后作业5 。【达标检测】(必做)1. 用凝胶色谱法分离蛋白质的过程中,下列叙述正确的是( )A、 相对分子质量较小的蛋白质行程大于相对分子质量较大的蛋白质B、 相对分子质量较小的蛋
3、白质行程小于相对分子质量较大的蛋白质C、 相对分子质量较小的蛋白质行程等于相对分子质量较大的蛋白质D、 二者根本无法比较2. 使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳过程中,不同蛋白质的电泳迁移率完全取决于( )A、 电荷的多少 B、分子的大小C、肽链的多少 D、分子形状的差异3. 一分子的血红蛋白最多可携带的O2分子数和CO2分子数分别是( )A、 4、2 B、4、4 C、2、1 D、1、14. 样品处理中血红蛋白溶液离心后的分层顺序自上而下是:无色透明的甲苯层- - -红细胞破碎物的暗红色沉淀。5.在蛋白质的提取和分离中,对于样品的处理过程的分析正确的是( )A、洗涤时离心速度过高,时间过长,白细胞
4、等也会沉淀,达不到分离的效果B、洗涤红细胞的目的是除去血浆中的葡萄糖、无机盐C、洗涤过程中用0.1%的生理盐水D、透析的目的是去除样品中相对分子质量较大的杂质(选做)红细胞含有大量血红蛋白,红细胞的机能主要是由血红蛋白完成,血红蛋白的主要功能是携带O2和CO2,我们可以选用猪、牛、羊或其他脊椎动物的血液进行实验,来提取和分离血红蛋白。请回答下列有关问题:(1)血红蛋白的提取和分离一般可分为四步: 、粗分离、纯化和 。(2)实验前取新鲜的血液,要切记在采血容器中预先加入柠檬酸钠,取血回来,马上进行离心,收集血红蛋白溶液。加入柠檬酸钠的目的是 。以上所述的过程既是样品处理,它包括红细胞的洗涤、 。(3)收集的血红蛋白溶液要进行粗分离,其方法是 。(4)然后通过 将样品进一步纯化,最后经 进行纯度鉴定。样品纯化的目的是 。(5)电泳
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