02药物的鉴别实验

1、第二章 药物的鉴别试验 （identification test）,1.概述 根据药物的分子结构、理化性质，采用化学、物理化学或生物学方法来判断药物的真伪。它是药品质量检验工作中的首项任务。 注意：药典鉴别试验对其所标示的药物(验真)鉴别，而不是对未知物进行(探新)定性分析。,2.鉴别实验的项目 鉴别项下规定的试验方法，仅适用于鉴别药物的真伪；对于原料药，还应结合性状项下的外观和物理常数进行确认。,（一）性状 药物的性状（description）反映了药物特有的物理性质，一般包括外观、溶解度和物理常数等。 1外观 指药物的聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。 2.溶解度 在一定程度上反映了药

2、品的纯度。药典采用“极易溶、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述药品在不同溶剂中的溶解性能。,3.物理常数 不仅对药品具有鉴别意义，也反映了该药品的纯杂程度。 药典收载的物理常数包括：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。,（1）熔点：固体 液体的温度（2）比旋度：在一定波长与温度下，偏振光透过长ldm且每1ml中含有旋光性物质1g的溶液时测得的旋光度称为比旋度。是反映手性药物特性及其纯度的主要指标， 用于鉴别药品、含量测定。,（3）吸收系数：在给定的波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时的吸收度称为吸收

3、系数。 有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者是中国药典收载的方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为1（W/V)，厚度为lcm时的吸收度，用 表示。 用于考查药品的质量，定量分析。,（二）一般鉴别试验 一般鉴别试验（general identification test)是依据某一类药物的化学结构或理化性质的特征，通过化学反应来鉴别药物的真伪。 无机药物：药物中的阴离子和阳离子的特殊反应； 有机药物：典型的官能团反应。 因此，一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。通常一般鉴别试验不适用于数种化学药物的混合物鉴别或在有干扰物质存在时鉴别。,（三）专属鉴别试验 药物的专

4、属鉴别试验（specific identification test)是证实某一种药物的依据，它是根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性不同，选用某些特有的灵敏的定性反应，来鉴别药物的真伪。,如巴比妥类药物含有丙二酰脲母核，主要的区别在于5，5一位取代基和2一位取代基的不同：苯巴比妥含有苯环，司可巴比妥含有双键，硫喷妥钠含有硫原子，可根据这些取代基的性质，采用各自的专属反应进行鉴别。又如甾体激素类药物含有环戊烷并多氢菲母核，主要的结构差别在A环和D环的取代基不同，可利用这些结构特征进行鉴别确证。,5,5-取代的巴比妥类药物,5,Barbital,Phenylbarbital,Se

5、cobarbital,硫代巴比妥类药物,基本结构：环戊烷骈多氢菲,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,甾体激素类药物,综上所述，一般鉴别试验是以某些类别药物的共同化学结构为依据，根据其相同的物理化学性质进行药物真伪的鉴别不同药物类别的区别。 专属鉴别试验，则是在一般鉴别试验的基础上，利用各种药物的化学结构差异，来鉴别药物区别同类药物或具有相同化学结构部分的各个药物单体，达到最终确证药物真伪的目的。,三、鉴别方法 药物的鉴别方法要求专属性强，重现性好，灵敏度高，以及操作简便、快速等。常用鉴别方法有化学法，光谱法，色谱法和

6、生物学法。（一）化学鉴别法 反应迅速、现象明显。 包括测定生成物的熔点，在适当条件下产生颜色、荧光，发生沉淀反应或产生气体。,1.呈色反应鉴别法系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应类型有：（1)三氯化铁呈色反应：一般都含有酚羟基或水解后产生酚羟基； （2)异羟肟酸铁反应：一般多为芳酸及其脂类、酰胺类；,（3）茚三酮呈色反应：一般在其化学结构中含有脂肪氨基； （4）重氮化一偶合显色反应：一般都有芳伯氨基或能产生芳伯氨基；,2.沉淀生成反应鉴别法 系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不同颜色和具有特殊

7、形状的沉淀。常用的沉淀反应有：（1)与重金属离子的沉淀反应：在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；（2）与硫氰化铬胺（雷氏盐）的沉淀反应：这类药物多为生物碱及其盐和具有芳香环的有机碱及其盐；,3.荧光反应鉴别法 常用的荧光发射形式有以下类型：（1）药物本身 （2）药物溶液加硫酸使呈酸性后 （3）药物和溴反应后（4）药物和间苯二酚反应后 在可见光下发射荧光；,4.气体生成反应鉴别法（1）胺类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物：经强碱处理后，加热，产生氨气；（2）含硫的药物：可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；（3）含碘有机药物：经直火加热，可生成紫色碘蒸气；（4）含醋酸酯和乙

8、酰胺类药物：经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯的香味。,（二）光谱鉴别法 1.紫外光谱鉴别法 有机药物分子中含有共轭结构，生、助色基团而显示特征吸收光谱，可作为鉴别的依据。 光谱简单，专属性差。,常用的方法有： （1）测定最大吸收波长，或同时测定最小吸收波长； （2）规定一定浓度的供试液在最大吸收波长处的吸收度； （3）规定吸收波长的吸收系数法； （4）规定吸收波长的吸收度比值法； （5）经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。 以上方法可以单个应用，也可几个结合起来使用，以提高方法的专属性。,2.红外光谱法 专属性强、应用较广（固体、液体、气体样品）。 主要用于组分单一、结构明确的原料药

9、，特别适合于结构复杂、细微差别同类药物，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。 鉴别方法：中国药典和BP(2000）均采用标准图谱对照法。 中国药典收载的光谱图，系用分辨率为2cm-1条件绘制，基线一般控制在90%透光率以上，供试品取样量一般控制在使其最强吸收峰在10透光率以下。,（1）试样制备方法 压片法、糊法、膜法、溶液法（2）应用光谱图对照时应注意的问题： 1）由于晶型的影响，致使录制的光谱图与光谱集所收载的光谱图不一致，应按光谱集中各相应光谱图中备注的方法进行预处理后，再行录制。 分别按同晶型对照的图谱比较同质异晶现象的药品。,2）采用压片法时，若样品（包括盐酸盐）与溴化钾之间不发生离子

10、交换反应，则采用溴化钾作为制片基质。否则，盐酸盐样品制片时必须使用氯化钾基质。3）测定时应注意二氧化碳和水汽等的大气干扰，必要时，应采取适当措施（如采用干燥氮气吹扫，真空）加以改善。,4）仪器间分辨率的差异及不同的操作条件（如狭缝程序，扫描速度等）可能影响药品光谱图的判断。 需用在比较样品的光谱图前，首先比较聚苯乙烯薄膜的光谱图。5）本法对于多组分药物或存在多晶现象而又无可重复转晶方法的药物不适用。,（三）色谱鉴别法 利用不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为（Rf，值或保留时间）进行鉴别试验。采用与对照品（或经确证的已知药品）在相同的条件下进行色谱分离，并进行比较鉴别。常用的方法有

11、：,1.薄层色谱法 一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品与对照品主斑点的颜色与位置应一致。2.高效液相色谱和气相色谱法 一般规定按供试品含量测定项下的色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。 内标法时，要求药物与内标物峰的保留时间比值也应相同。,（四）药物鉴别方法新动向 1.仪器分析应用数量增加，尤其是红外光谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。 2.制剂广泛采用IR法鉴别。与原料药相比，制剂需先分离再压片绘制图谱。,四、鉴别实验条件 鉴别试验必须在规定条件下完成，否则将会影响结果的判断。影响鉴别反应的因素主要有被测物浓度，试剂的用量，溶液的温度、 pH ，反应时间和干

12、扰物质的存在等。,五、鉴别试验的灵敏度（一）反应灵敏度和空白试验 在一定条件下，能在尽可能稀的溶液中观测出尽可能少量的供试品，反应对这一要求所能满足的程度，即称为反应的灵敏度（sensitivity）。它以两个相互有关的量来表示： 最低检出量（又称检出限量） （minimum detectable quantity) 最低检出浓度（又称界限浓度） （minimum detectable concentration),最低检出量（以m表示），就是应用某一反应，在一定的条件下，能够观测出试验结果的供试品的最小量，其单位通常用微克（g）表示。 最低检出浓度是应用某一反应，在一定条件下，能够观测出供试品的最低浓度，通常以1: V(或1:G）表示，其中V(或G)表示含有1g重某供试品的溶液的毫升（或克）数。,最低检出量和最低检出浓度之间的关系可以用下式表示： 式中为鉴别试验时，所取供试品溶液的最小体积（ml）。,影响条件：1.在选用灵敏度很高的反应时，必须采用高纯度的试剂，非常