乳制品中微生物的检测

1、.,乳制品中微生物的检测,组员： 邵顾 薛蓉雅 许华 刘孟晨,.,目录,乳酸菌简介 抗生素简介 乳酸菌的检验 抗生素残留量的检验,.,乳酸菌简介,1、代谢类型：异养厌氧型 2、生物类型：原核生物细菌 乳酸菌 乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称。 凡是能从葡萄糖或乳糖的发酵过程中产生乳酸的细菌统称为乳酸菌。这是一群相当庞杂的细菌，目前至少可分为18个属，共有200多种。除极少数外，其中绝大部分都是人体内必不可少的且具有重要生理功能的菌群，其广泛存在于人体的肠道中。目前已被国内外生物学家所证实，肠内乳酸菌与健康长寿有着非常密切的直接关系。,.,生理功能 1防治有些

2、人种普遍患有的乳糖不耐症（喝鲜奶时出现的腹胀、腹泻等症状）。 2促进蛋白质、单糖及钙、镁等营养物质的吸收，产生维生素B族等大量有益物质。 3使肠道菌群的构成发生有益变化，改善人体胃肠道功能，恢复人体肠道内菌群平衡，形成抗菌生物屏障，维护人体健康。 4、抑制腐败菌的繁殖，消解腐败菌产生的毒素，清除肠道垃圾。 5抑制胆固醇吸收，降血脂、降血压作用。 6免疫调节作用，增强人体免疫力和抵抗力。 7抗肿瘤、预防癌症作用。 8提高SOD酶活力，消除人体自由基，具抗衰老、延年益寿作用。,作用。,.,抗生素简介,抗生素（antibiotics）是由微生物（包括细菌、真菌、放线菌属）或高等动植物在生活过程中所产

3、生的具有抗病原体或其它活性的一类次级代谢产物，能干扰其他生活细胞发育功能的化学物质。现临床常用的抗生素有微生物培养液液中提取物以及用化学方法合成或半合成的 化合物。目前已知天然抗生素不下万种。,.,用途简介,抗生素以前被称为抗菌素，事实上它不仅能杀灭细菌而且对霉菌、支原体、衣原体等其它致病微生物也有良好的抑制和杀灭作用，近年来通常将抗菌素改称为抗生素。抗生素可以是某些微生物生长繁殖过程中产生的一种物质，用于治病的抗生素除由此直接提取外；还有完全用人工合成或部分人工合成的。通俗地讲，抗生素就是用于治疗各种细菌感染或抑制致病微生物感染的药物。 但是过量使用会抑制体内的有益菌，使肠道菌群失衡。导致疾

4、病的引起。,.,作用机理,抗生素等抗菌剂的抑菌或杀菌作用，主要是针对“细菌有而人（或其它高等动植物）没有”的机制进行杀伤，有5大类作用机理： 阻碍细菌细胞壁的合成，导致细菌在低渗透压环境下膨胀破裂死亡，以这种方式作用的抗生素主要是-内酰胺类抗生素。哺乳动物的细胞没有细胞壁，不受这类药物的影响。 与细菌细胞膜相互作用，增强细菌细胞膜的通透性、打开膜上的离子通道，让细菌内部的有用物质漏出菌体或电解质平衡失调而死。以这种方式作用的抗生素有多粘菌素和短杆菌肽等。,.,与细菌核糖体或其反应底物（如tRNA、mRNA）相互所用，抑制蛋白质的合成这意味着细胞存活所必需的结构蛋白和酶不能被合成。以这种方式作用

5、的抗生素包括四环素类抗生素、大环内酯类抗生素、氨基糖苷类抗生素、氯霉素等。 阻碍细菌DNA的复制和转录，阻碍DNA复制将导致细菌细胞分裂繁殖受阻，阻碍DNA转录成mRNA则导致后续的mRNA翻译合成蛋白的过程受阻。以这种方式作用的主要是人工合成的抗菌剂喹诺酮类（如氧氟沙星）。 影响叶酸代谢 抑制细菌叶酸代谢过程中的二氢叶酸合成酶和二氢叶酸还原酶，妨碍叶酸代谢。因为叶酸是合成核酸的前体物质，叶酸缺乏导致核酸合成受阻，从而抑制细菌生长繁殖，主要是磺胺类和甲氧苄啶。,.,使用历史,1877年，Pasteur和Joubert首先认识到微生物产品有可能成为治疗药物，他们发表了实验观察，即普通的微生物能抑

6、制尿中炭疽杆菌的生长。 1928年，弗莱明爵士发现了能杀死致命的细菌的青霉菌。青霉素治愈了梅毒和淋病，而且在当时没有任何明显的副作用。 1936年，磺胺的临床应用开创了现代抗微生物化疗的新纪元。 1944年在新泽西大学分离出来第二种抗生素链霉素，它有效治愈了另一种可怕的传染病：结核。 1947年出现氯霉素，它主要针对痢疾、炭疽病菌，治疗轻度感染。,.,1948年四环素出现，这是最早的广谱抗生素。在当时看来，它能够在还未确诊的情况下有效地使用。今天四环素基本上只被用于家畜饲养。 1956年礼来公司发明了万古霉素被称为抗生素的最后武器。因为它对G+细菌细胞壁、细胞膜和RNA有三重杀菌机制，不易诱导

7、细菌对其产生耐药。 1980年代喹诺酮类药物出现。和其他抗菌药不同，它们破坏细菌染色体，不受基因交换耐药性的影响。 1992年，这类药物中的一个变体因为造成肝肾功能紊乱被美国取缔，但在发展中国家仍有使用。,.,乳酸菌计数,.,.,操作步骤,液体样品： 液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品 25 mL 放入装有225 mL 生理盐 水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分振摇，制成1:10 的样品匀液。 步骤 1 、 用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品 匀液1 mL，沿管壁缓慢注于装有9 mL生理盐水 的无菌试管中（注意吸管尖端不要触及稀释液），振摇试管或换用

8、1 支无菌吸管反复吹打使其混合 均匀， 制成1:100 的样品匀液。,.,2、 另取1 mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做 10 倍递增样品匀液，每递增稀释 一次，即换用1 次1 mL灭菌吸管或吸头。 乳酸菌计数 1 、 乳酸菌总数 根据待检样品活菌总数的估计，选择2 个3 个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1 mL样品 匀液分别置于2 个MRS琼脂平板，使用 L 形棒进行表面涂布。36 1 ，厌氧培养 48 h2 h 后计数平 板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。,.,抗生素残留量的检测,.,.,操作步骤,1. 菌液制备:将单菌种(嗜热链球菌)以脱脂乳 为培养基,在361培养箱中培养15小时后,再以脱脂乳以至于1:1稀释待用;2.取待检样液9mL,在80水浴加热5分钟后冷却到37以下,加活菌液1mL,在361水浴2小时,加入