动物细胞融合和单克隆抗体.ppt

1、2010-3-26,1,2010-3-26,2,2.2.2 动物细胞融合与单克隆抗体,2010-3-26,3,植物体细胞杂交,原生质 体融合,杂种细胞,组织培养,杂种植株,纤维素酶、果胶酶,2010-3-26,4,一、动物细胞融合,1、概念：,指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,2、结果：,形成单核的杂交细胞,3、原理：,细胞膜的流动性,4、过程：,5、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,6、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体,2010-3-26,5,4、过程：,动物

2、细胞A 动物细胞B,诱导，融合,2个完整的杂交细胞AB,有丝分裂,（膜融合、,诱导方法,质融合、,核融合）,单核细胞,2010-3-26,6,为什么灭活的病毒能作为诱导剂？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 不灭活的病毒能作为诱导剂吗？ 不能，因为不灭活的病毒会感染细胞，而不能诱导细胞融合。,2010-3-26,7,2、什么是抗体？,二、单克隆抗体,回顾,3、抗体的分布？,抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。,主要分布在血清中。,1、什么是克隆？,“克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先

3、，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养.,2010-3-26,8,该法制备抗体的特点： 产量低、纯度低， 且抗体的特异性差、灵敏度低。,自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？,思 考：如何获取某种特定抗体？,2010-3-26,9,B淋巴细胞特点,每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。,B淋巴细胞受抗原刺激后，可以 产生抗体。,动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。,2010-3-26,10,二、单克隆抗体,由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产

4、生的化学性质单一、特异性强的抗体,称为单克隆抗体。,1、概念:,2010-3-26,11,怎样才能大量生产单克隆抗体？,提示1：仅用细胞培养技术可行吗？,提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？,提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能 力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？,2010-3-26,12,大量生产单克隆抗体思路,B淋巴细胞具产生抗体的功能 骨髓瘤细胞具无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞,2010-3-26,13,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,骨髓瘤细胞,培养骨髓瘤细胞,融合,（只考

5、虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？融合细胞几种类型？,骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞 B淋巴细胞- B淋巴细胞 B淋巴细胞-骨髓瘤细胞,多种杂交细胞,在具有筛选作用的培养基上培养,专一抗体检验阳性,克隆上述杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体， 检验阳性细胞,单克隆抗体,注射到小鼠体内,体外培养,2、单克隆抗体的制备过程,第1次筛选目的：得到杂交瘤细胞（多种）。,第2次筛选目的：在杂交瘤细胞中筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。,该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。,杂交瘤细胞有何特点？,特异性强，灵敏度高,2010-3-26,14,免疫小鼠,培养骨髓瘤细胞,融合,骨髓瘤细

6、胞,B淋巴细胞,注射特定抗原蛋白,选择培养基上培养,专一抗体检验阳性,专一抗体检验阳性,注射到小鼠体内,体外培养,单克隆抗体,克隆杂交细胞,分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞,多种杂交细胞,杂交瘤细胞有何特点？,本过程利用的那些技术？,动物细胞融合技术 动物细胞培养技术,是否注射抗原,（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几种融合细胞？,两次筛选的目的分别是什么？,2、单克隆抗体制备过程,与传统制备的抗体相比具有什么特点？,2010-3-26,15,3.单克隆抗体的应用：,作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速,用于,运载药物：制成“生物

7、导弹”,治疗疾病：主要用于癌症治疗,资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。,2010-3-26,16,两个过程,动物细胞融合过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法,一个新细胞,一个优势,课堂小结,你记住了吗？,灭活的病毒,杂交瘤细胞,单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势,2010-3-26,17,形成杂种细胞,获得杂种植株,结果,物理、

8、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振荡、电刺激）,化学（聚乙二醇）,诱导方法,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性、,植物细胞全能性,原 理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,1、植物、动物细胞融合的比较,课堂小结,融合前处理,用纤维素酶、 果胶酶去壁,用胰蛋白酶 使细胞分散,2010-3-26,18,2、单克隆抗体制备过程,B淋巴细胞 骨髓瘤细胞,诱导融合,B-B细胞,B-瘤细胞,瘤-瘤细胞,选择培养,杂交瘤细胞（ B-瘤细胞）,克隆化培养,抗体检测,产生所需抗体的杂交瘤细胞,体外培养,单克隆抗体,课堂小结,2010-3-26,19,1.右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产

9、破伤风杆菌抗体的实验方案,制备单克隆抗体,不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的B淋巴细胞。,(1).该实验方案的目的是：_,(2).该方案能达到预期效果吗？为什么？,课堂练习,2010-3-26,20,(3).A是从小鼠的脾脏中取得_ 该细胞能够产生_ 。,(4).图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_ ,又能_。,B淋巴细胞,抗体,细胞融合,灭活的病毒,双亲细胞,产生专一抗体,无限增殖,课堂练习,2010-3-26,21,(5)._ 技术是单克隆抗体的技术支持。,动物细胞培养,（6）单克隆抗体的特点 _，并可大量制备。,特异性强，灵敏度高,课堂练习,

10、2010-3-26,22,2、动物细胞融合和植物细胞杂交的比较中，正确的是（ ） A.诱导融合的方法完全相同 B.所用的技术手段完全相同 C.所采用的原理完全相同 D.都能形成杂种细胞,课堂练习,D,2010-3-26,23,3、用a表示骨髓瘤细胞，用b表示B淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别是（ ） A.a、aa、ab、bb 、b a、aa、ab ab B. a、aa、ab、bb 、b ab、bb 、b ab C. a、aa、ab、bb 、b ab 产生特定抗体的ab D. a、aa、ab、bb 、b aa 能无限增殖的aa,C,课堂练习,2010-3-26,24,已成功的动物细胞

11、融合实例还有哪些？,生物种类 成功年代 酵母菌鸡 1975年 人胡萝卜 1976年 人小鼠 1978年,要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。,2010-3-26,25,1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？ 提示：植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。,2010-3-26,26,2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 提示：哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗