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1、革兰氏染色法,实验三,一 、实验目的与要求:,1、了解革兰氏染色法的原理及其 在细菌分类鉴定中的重要性 2、学习并掌握革兰氏染色法,二、实验原理：,革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。,G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成

2、红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。,三、实验仪器及材料,1.仪器：显微镜、酒精灯等 2.实验材料： 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌 染色剂：草酸铵结晶紫染液、碘液、 番红、95%乙醇,四、内容与方法,1.涂片 2.晾干 3.固定 4.结晶紫染色：加适量（以盖 满细菌涂面）的结晶紫染色 液染色1分钟； 5.水洗：倾去染色液，用水小 心地冲洗。,6.媒染：碘液，媒染1min； 7.水洗：用水洗去碘液。 8.脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱 色10s-18s至流出液无色，立即水洗。 9.复染：

3、滴加番红复染1min； 10.水洗：用水洗去涂片上的番红染色液。 11.晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。 12.镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最 后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染 色反应性。,革兰氏染色流程图,涂片 干燥 结晶紫染色 碘液媒染 水洗 95%酒精脱色 水洗 番红染色 水洗 晾干 镜检,1分钟,10秒,1分钟,固定,水洗,1分钟,注意事项：,1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色 过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性 菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被 染成革兰氏阳性菌。 2.菌龄也有影响。若菌龄太老，由于菌体死亡 或自溶常使革兰氏阳性菌转呈阴性反应。 3.不要涂片太厚，会造成假阴性或假阳性。,五、实验结果：,紫色菌：革兰氏阳性菌,红色菌：革兰氏阴性菌,六、思考题,1.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 2.现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你鉴

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