马铃薯中龙葵素含量的测定 液相色谱质谱联用法-标准文本

1、ICS点击此处添加ICS号点击此处添加中国标准文献分类号备案号：中华人民共和国行业标准XX/T XXXXXXXXX马铃薯中龙葵素含量的测定液相色谱串联质谱法Determination of solanine in potatos by LC-MS/MS点击此处添加与国际标准一致性程度的标识 - XX - XX发布XXXX - XX - XX实施发布XX/T XXXXXXXXX前言本标准的附录A为资料性附录。本标准按照GB/T1.1-2020给出的规划起草。本标准由中华人民共和国农业农村部提出。本标准由农业农村部农业农村部农产品营养标准专家委员会归口。本标准起草单位：农业农村部食物与营养发展研究

2、所，北京市营养源研究所，内蒙古蒙牛乳业集团有限公司，中国合格评定认可委员会，食品行业生产力促进中心，北京市理化分析测试中心，中国农业科学院蔬菜花卉研究所，北京市农林科学院蔬菜研究中心。本标准主要起草人：朱大洲，崔亚娟，梁敏慧，孔凡华，白沙沙，孙君茂，屠振华，熊兴耀，郭燕枝，仇菊，杨春雪，李东，马文丽，宋晓东，杨志刚，李宏，马杰，贾丽，王万兴，刘光敏。5马铃薯中龙葵素含量的测定 液相色谱质谱联用法1 范围本标准规定了马铃薯中龙葵素（-茄碱和-卡茄碱）含量的液相色谱质谱联用测定方法。本标准适用于马铃薯中龙葵素（-茄碱和-卡茄碱）含量的测定。本标准-茄碱和-卡茄碱的检出限为1 mg/kg，定量限为3

3、 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法3 原理样品经0.1%甲酸乙腈提取，提取液氮吹至干，复溶后用液相色谱串联质谱仪测定，采用外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂。水为GB/T 6682 规定的一级水。4.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.2 乙腈（C2H3N）：色谱纯。4.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.4 无水硫酸镁（MgSO4）。4.5 无水乙酸钠（CH3CO

4、ONa）。4.6 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。4.7 乙酸铵水溶液（10 mmol/L）：称取0.77 g乙酸铵于1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度。4.8 0.1%甲酸乙腈：取1 mL甲酸于1000 mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度。4.9 50%甲醇水溶液：取500 mL甲醇于1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度。4.10 龙葵素标准品：-茄碱和-卡茄碱，纯度均大于95%。4.11 -茄碱和-卡茄碱标准储备液：分别准确称取1.0 mg标准品于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，制成浓度为100 g/mL的混合标准储备液，-18 及以下冰箱保存，有效期3个月。4.12

5、滤膜：0.22 m，有机相滤膜。5 仪器与设备5.1 液相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾离子源。5.2 分析天平：感量为0.01 mg和0.0001 g。5.3 均质器。5.4 涡旋振荡器。5.5 离心机：最大转速8000 r/min或以上。5.6 氮吹仪6 样品制备与保存取500 g马铃薯，水洗干净，用纱布擦去表面水分，经均质器均浆，放入分装容器中，密封，-18 及以下冷冻存放。7 分析步骤称取1 g（精确至0.0001 g）粉碎均匀的样品于50 mL离心管中，加入5 mL水涡旋混匀1 min，再加入25 mL0.1%甲酸乙腈（4.8）涡旋混匀3 min。之后，向离心管中加入2 g无水硫酸镁，

6、1 g无水乙酸钠，剧烈震摇30 s后涡旋混匀1 min。以8000 r/min离心10 min。取1 mL上清液于10 mL离心管中，40 氮气吹干，加入10 mL50%甲醇水溶液，过0.22m滤膜后，上机测定。8 仪器条件8.1 液相条件色谱柱：C18柱（100 mm 2.1 mm，1.7 m）或相当者；柱温：40 ；进样体积：10 L；流动相A：乙酸铵水溶液（10 mmol/L）（4.7），流动相B：乙腈，梯度洗脱，梯度洗脱条件见表1；流速：0.3 mL/min。表1 液相色谱梯度洗脱参考条件时间（min）A（%）B（%）09550.1955359545954.595579558.2 质谱

7、条件采用电喷雾正离子（ESI+）模式，扫描模式为多反应监测（MRM）。毛细管电压：3 kV；脱溶剂气温度：450 ；脱溶剂气流速：600 L/h；锥孔气流速：50 L/h。定性定量离子、碰撞电压及碰撞能等参数见表2。表2 质谱参数化合物母离子（m/z）锥孔电压（V）子离子（m/z）碰撞电压（eV）-茄碱868.29598.1*73398.181-卡茄碱852.4100706.4*87398.373*定量离子对9 测定9.1 标准曲线的绘制选取-茄碱和-卡茄碱含量极低的样品，分别称取1 g（精确至0.00 1 g）粉碎均匀样品于6个50 mL离心管中，分别准确吸取100 g/mL的混合标准储备液

8、25、75、125、200、250、500 L到离心管中混匀，按照步骤7进行处理，制成10 ng/mL，30 ng/mL，50 ng/mL，80 ng/mL，100 ng/mL，200 ng/mL的标准系列工作液后上机测定。以标准溶液中-茄碱和-卡茄碱的浓度为横坐标，以-茄碱和-卡茄碱的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。9.2 试样溶液的测定将试样溶液注入液相色谱质谱联用仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中-茄碱和-卡茄碱的浓度，平行测定次数不少于两次。10 分析结果的表述试样中龙葵素的含量为-茄碱和-卡茄碱含量之和，按公式（1）计算；-茄碱含量按公式（2）计算；-卡茄碱含量按公式（3）计算： （1） （2） （3）式中：X试样中龙葵素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；X1试样中-茄碱的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；X2试样中-卡茄碱的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）C1由标准曲线得到试样中-茄碱的浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；C2由标准曲线得到试样中-卡茄碱的浓度，单位为纳克每毫升（ng