多肋藻提取物对两种赤潮微藻的生长抑制作用研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 多肋藻提取物对两种赤潮微藻的生 长抑制作用研究 摘要：通过测定赤潮微藻细胞密 度，分析了微藻细胞内叶绿素、蛋白质 和多糖等生理生化指标的变化，研究了 多肋藻（Costaria costata）提取物对 2 种赤潮微藻塔玛亚历山大大藻 （Alexandum tamarense）和东海原甲藻 （Prorocentrum donghaiense）生长的影 响。结果表明：当提取物浓度为 16g/L 时能显著抑制东海原甲藻的生长，生长 抑制率为 57.8%，当提取物浓度为 32g/L 是显著抑制塔玛亚历山大大藻的 生长，抑制率为 58.8%。同时，2 种微 藻的叶绿素、可溶性蛋白质和多糖含量 显著降低，比对照组的相应含量低约 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 80.0%。 中国论文网 /7/view-12990325.htm 关键词：赤潮微藻；东海原甲藻； 塔玛亚历山大大藻；生长抑制；多肋藻 提取物 中图分类号：X55 文献标识码：A 文章编号： 1674-9944（2017）14-0068-03 1 引言 赤潮，又称为有害藻华，随着污 染物对海洋污染的日趋加重，已成槿 球性的海洋灾害， ，对近海水域生态 环境、人类生活和沿海水产业的可持续 发展造成了极大的威胁。近 20 年来， 发生在我国的有害赤潮事件达到 300 多 起，仅 1998 年就发生 22 起赤潮事件， 经济损失达 10 亿元以上1。赤潮产生 的毒素由鱼类、贝类等生物传递给人类 2，有害赤潮严重制约着沿海经济的发 展、破坏海洋生态环境进而威胁人类健 康3。 近来研究者提出利用黏土矿物， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 季铵盐类化合物4以及病毒5 、细菌6等 方法抑制或灭杀赤潮微藻，这些研究取 得一定成果，但是外来添加物质可能对 海洋水体产生不可预见的影响，现在利 用海洋环境中的生物因子进行赤潮的防 控已经越来越引起重视7. 海藻在代谢过程中可向环境中分 泌抑藻物质，抑制赤潮微藻的生长，例 如，从墨角藻（Fucus vesiculosus）中分 离出的聚酚能抑制陆兹单鞭金藻 （Monochrysis）的生长8，从空石莼 体内也分离鉴定出抑制赤潮异弯藻的 9，12，15- 十八碳三烯酸等物质9。 多肋藻（Costaria costata）隶属 于褐藻门海带目多肋藻属，主要自然生 长于太平洋北部沿岸、日本海和鄂霍次 克海、大彼得湾等海域。多肋藻因富含 褐藻胶及多种人体必需的氨基酸，营养 价值较高，同时也是海藻工业的重要原 料，近年来对其研究逐渐增多。 本实验采用日本采集的多肋藻， 提取水溶性物质，研究其对赤潮微藻塔 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 玛亚历山大大藻和东海原甲藻的抑制作 用，通过实验测定藻细胞内叶绿素、蛋 白质和多糖等生理指标的变化，分析多 肋藻水提物对这 2 种赤潮微藻的生长影 响，以期为进一步研究多肋藻抑藻物质 提供实验基础和理论依据。 2 材料与方法 2.1 实验材料 塔玛亚历山大大藻、东海原甲藻 来自于中国科学院海洋研究所种库，在 f/2 培养液中培养10. 培养温度为 20， 光照 3500lx，光暗比为 1212。多肋藻 采自日本北海道函馆惠山，原料经自来 水洗涤，除去泥沙，干燥，粉碎后保存 备用。 天然海水经过脱脂棉和 300 目筛 娟过滤，煮沸、冷却。pH 值和盐度分 别调节至 8.5 和 30 备用。 2.2 多肋藻水提物的制备 称取 100 g 多肋藻干粉末，置于 500 mL 圆低烧瓶中，加水，加热回流 提取 8 h，离心去除多肋藻，上清液经 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 旋转蒸发浓缩，冷冻干燥成粉末，得到 多肋藻提取物 22.5 g。 2.3 抑藻实验 在 f/2 培养基中，分别添加一定 量的多肋藻，浓度为 2、4、8、16、32 g/L，接种 2 种赤潮微藻，培养混合液 总体积为 250ml。东海原甲藻和塔玛亚 历山大藻接种密度分别为 5104 cells/mL、6104 cells/mL，同时设定添 加相同体积空白对照组，每个处理 3 个 重复。 培养瓶置于 GXZ-260B 智能型光 照培养箱中培养，温度 26，光照强度 3500lx，光暗比 1212。每天定时摇动 培养瓶 2 次。每隔 1 天从培养瓶中取 1 mL 培养液，用 Lugols 试剂固定后，计 数藻细胞数量的变化。第 10 d，测定藻 细胞叶绿素、蛋白质和多糖含量。 2.4 微藻的生理指标测定 2.4.1 叶绿素的测定 藻液 5000 r/min 离心 15 min，弃 去上清液，加入 90%丙酮，4抽提 24 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 g，离心后，测定上清液 630、645 和 665 nm 吸光度，参照文献11 计算叶绿 素含量（以细胞干重衡量，mg/g） 。 2.4.2 蛋白质和多糖的测定 15 mL 藻液 2000 r/min 离心 10 min，弃去上清液，藻泥于-20冻融碾 碎后，加入 3 mL 磷酸缓冲液（PBS， 磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的混合溶液） 并充分震荡，离心 10 min。上清液用于 测定蛋白质和多糖。 蛋白质含量测定：取 1 mL 上清 液加入 3 mL 考马斯亮蓝溶液，测定 595 nm 处的吸光度，根据标准蛋白质曲 线，确定蛋白质的含量。 多糖含量测定：取 1 mL 上清液 加入 0.1 mL 硫酸锌，沸水浴 5min，立 即加入亚铁氰化钾 0.1 mL，离心 10 min，取上清液 1 mL 加到 3 mL 蒽酮中， 沸水浴 10 min，用冷水迅速冷却至室温， 稳定后测定 620 nm 波长处的吸光度， 根据标准葡萄糖溶液曲线确定多糖的含 量。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 2.5 数据处理 实验数据采用 SPSS11.5 软件包 进行独立样本检验统计分析，p0.05 为显著性差异，p0.01 为极显著性差 异。 微藻生长抑制率：I=（1-N/N0） 100%，式中， N 为处理组藻细胞密度 （104 cells/mL） ；N0 为对照组藻细胞 密度（104 cells/mL） 。 3 结果与分析 3.1 多肋藻提取物对 2 种赤潮微 藻生长的影响 耐1、图 2 可 以看出，多肋藻提取物对东海原甲藻和 塔玛亚历山大藻 2 种赤潮微藻的生长表 现出较强的抑制作用。生长抑制率最高 依次为 60.94%、58.8% 。 2.2 多肋藻提取物对 2 种赤潮微 藻叶绿素、蛋白质和多糖含量的影响 图 35 表明，多肋藻提取物对 2 种赤潮微藻的叶绿素、蛋白质和多糖 的合成表现出较强的抑制作用。浓度为 32 g/L 时，叶绿素、蛋白质与多糖含量 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 比对照组分别下降了 86.7%、83.3%与 85.7%。 3 讨论 本文研究表明，多肋藻提取物对 2 种赤潮微藻均有不同程度的抑制作用， 而且这种抑制效应具有浓度依赖性。多 肋藻提取物对 2 种微藻的抑制作用稍有 不同，可能与他们的细胞结构有关，塔 玛亚历山大藻细胞外涵盖一层坚硬的外 壳12，因而对外来生长抑制物质具有 一定的