第三章药物的杂质检查.ppt

1,第三章 药 物 的 杂 质 检 查,2,基本要求,掌握药物中杂质的来源和分类，杂质限量的定义和计算；氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、溶液颜色、易炭化物、澄清度、炽灼残渣、干燥失重、有机溶剂残留量等检查项目的原理和方法。 了解药物特殊杂质的概念及其检查方法。 重点：1药物杂质来源，限量检查及计算 2氯化物、重金属、砷盐的检查方法 难点：1.砷盐检查方法原理 2各类热分析法的原理,3,第三章 药物的杂质检查法,第一节 概述 第二节 一般杂质的检查方法 第三节 特殊杂质的检查方法,第三章,4,第一节 概述,基本要求 掌握药物中杂质的来源和分类，杂质限量的定义和计算 了解药物的纯度和化学试剂的纯度的区别,5,第一节 概述,一、药物纯度的概念与要求,第三章,三、杂质的限量检查,二、杂质的来源与种类,6,第三章,一药物的纯度要求,指药物纯净的程度. 是反映 药品质量的一项重要指标.,1）评价：综合考虑药物的外观性状、理化常数、杂质检查和含量测定. 综合评定药物的纯度. 杂质检查 是药物纯度评价的一项重要内容.,1.药物的纯度 purities of drugs,7,第三章,2）药物纯度与试剂纯度,共同点：均规定所含杂质的种类和限量. 不同点： a.药物纯度又称为药用规格,主要从用药 安全、有效和对药物稳定性等方面考虑,只 有合格品和不合格品.,8,第三章,b.化学试剂的纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用. 化学试剂一般分为4个等级基准试剂GR、优级纯或特种试剂(光谱纯、色谱纯、农药残留检测级)、分析纯AR、化学纯CP和实验室试剂LR,9,第三章,例如：硫酸钡（BaSO4） 试剂规格 对可溶性钡盐不做检查. 检查：氯化物、铁、灼烧失重等 药用规格 如存在可溶性钡盐则导致 医疗事故. 检查：酸溶性钡盐、重金属、砷盐等,化学试剂不能代替药品使用,10,第三章,一药物的纯度要求,是指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效,甚至对人体健康有害的微量物质.,2. 药物的杂质,为保证药品质量,确保用药安全、 有效,必须检查杂质,控制药物纯度.,11,第三章,1）对人体有害的 如：砷盐和重金属 2）影响药物稳定性 如：水分（青霉素钾盐） 3）虽对人体无害也不影响药物稳定性，但可用于考核生产工艺和生产控制是否正常指示性杂质（信号杂质） 如：Cl- SO42-,一药物的纯度要求,12,第三章,二杂质的种类,按来源可分为2类,一般杂质 指在自然界中分布广泛,在多种药物的生产或贮存过程中容易引入的杂质.,特殊杂质 指在该药物的生产或贮存过程中,根据药物的性质、生产方法和工艺条件,有可能引入的杂质.,13,第三章,二杂质的种类,按结构可分为2类,无机杂质 Cl-、S2-、CN-、As、重金属.,有机杂质 中间体、副产物、分解物、异构体、残留溶剂.,14,第三章,二杂质的种类,按性质可分为3类,信号杂质 指本身一般无害,但其含量多少可反映药物纯度水平,指示生产工艺是否合理. 如：氯化物、硫酸盐等.,有害杂质 对人体有毒害的杂质.在质量标准中严加控制,以保证用药安全. 如：重金属、砷盐、氰化物、氟化物等.,15,第三章,二杂质的种类,a 具有立体异构体的药物,其生物活性有很大差异; 如：肾上腺素为左旋体,其升压作用是右旋体的12倍. b 异构体中,其顺式体与反式体的生物活性也不相同; 如：VA以全反式的生物活性为最高.,无效或低效杂质,16,第三章,二杂质的种类,c 药物的晶型不同,其理化常数, 溶解性稳定性、体内的吸收和疗效也有差异. 如：驱虫药甲苯咪唑,有A、B、C三种晶型. 其中C晶型的驱虫率90%,B晶型的驱虫率4060%,A晶型的驱虫 率小于20%.,17,第三章,二杂质的种类,必须重视异构体和多晶型对药物有效性和安全性的影响. 控制药物中低效、无效以及具有毒性的异构体和多晶型, 在药物纯度研究中日益受到重视.,18,第三章,药物中杂质的来源与种类 有针对性地制订杂质检查项目的方法和限度,二杂质来源,药物中可能存在的杂质 决定杂质检查的项目,19,第三章,二杂质来源,药物生产过程引入,药物贮存期间引入,20,第三章,二杂质来源,(4) 合成工艺中使用的设备、器皿可能 引入重金属、以及使用溶剂,有机溶剂.,1 生产过程中引入,(1) 所用原料不纯,(2) 合成工艺中未反应完全的原料、 合成中间体、副产物等.,（3）从药用植物中提取分离过程中引入,21,第三章,二杂质来源与种类,例： 阿斯匹林由水杨酸乙酰化制得,22,第三章,制剂过程中可能产生新物质,23,第三章,二杂质来源与种类,(1)保管不善或贮存时间过长,(2)包装不当,2 贮藏过程中引入,24,第三章,二杂质来源与种类,25,第三章,二杂质来源与种类,例1: 麻醉乙醚在日光、空气及湿气作用下, 易氧化分解为醛及有毒的过氧化物. CH3CH2OCH2CH3 CH3CHO + CH3CH(OH)-O-O-CH(OH)CH3（二羟乙基过氧化物）药典规定:起封后24小时内使用,26,第三章,二杂质来源与种类,例2： 四环素在酸性条件下可发生差向异构化反应,生成差向四环素(毒性高、活性低),27,易发生水解反应的结构：酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等 易发生氧化反应的结构：醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等,二杂质来源与种类,第三章,28,第三章,1 杂质限量,在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下,药物中所含杂质的最大允许量.,三 杂 质 限 量 检 查,百分表示( %) 百万分表示( ppm),限量表示方 法,29,第三章,2 杂质检查的要求,三 杂 质 限 量 检 查,由于杂质不可能完全除尽，也没有必要除尽。所以在不影响疗效和不发生毒性的原则下，既保证药物质量，又便于制造、贮藏和制剂生产，对于药物中可能存在的杂质，允许有一定限量，这一允许量被称为杂质的限量。通常不要求测定其准确含量。药典中规定的杂质检查均为限量（或限度）检查（Limit test）。,30,第三章,三 杂 质 限 量 检 查,3 杂质检查方法(限量检查法),31,操作: 平行试验比较两比色管的颜色或浊度,判断杂质限量是否符合规定.,管2 （对照管）,管1 （样品管）,第三章,取限度量的待检杂质对照品配成的对照溶液,与一定量供试品配成的供试品容液在相同条件下处理, 比较反应结果, 判断供试液中所含杂质限度是否符合规定.,标 准 对 照 法,32,在供试品溶液中加入试剂,在试验条件下反应,不得出现正反应. 既以检测条件下反应灵敏度控制杂质限量.,第三章,如：蒸馏水中氯化物的检查,5滴 1mL,0.2mg/50mL 4g/mL,灵 敏 度 法,33,取一定量供试品,在规定条件下测定待检杂质吸光度, 与规定限量比较, 判断供试品中杂质限量.,第三章,比 较 法,34,例：肾上腺素中肾上腺酮的检查,第三章,比 较 法,规定： A310nm0.05,35,写成：,4 限量计算公式,三 杂 质 的 限 量 检 查,第三章,36,若用ppm表示杂质限量 则：,注意: 单位是否统一 供试品是否有稀释 表示方法%或ppm,第三章,37,例1. 对乙酰氨基酚中氯化钠的检查,对照品溶液: 标准NaCl溶液(10gCl-/ml),方法：取5.0ml同法操作比较,浊度不得更大. 计算：氯化物限量是多少(% )？,第三章,38,规定：含重金属百万分之五(5ppm) 计算：应取标准铅溶液(10gPb/ml)多少ml？,例2. 葡萄糖中重金属的检查 方法：,第三章,39,例3. 溴化钠中砷盐检查,第三章,方法：中国药典规定：取标准砷溶液2.0ml (每1ml相当于1g砷)制备砷斑 规定：含砷量不得超过4 ppm 计算：应取供试品量(g)？,40,小结,1，药物纯度：药物的纯净程度。 2，杂质的来源与种类 来源：生产和贮存 种类：一般杂质和特殊杂质 3，杂质的限量检查 杂质的限量：药物中允许含杂质的最大量;计算： 识记：杂质、一般杂质、特殊杂质、杂质来源、药用纯度与化学纯度的区别,41,思考题 1, 什么是一般杂质和特殊杂质。 2, 请解释信号杂质和有害杂质。 3, 请阐明杂质的限量和药物纯度的含义。 4, 试说明信号杂质的存在对药物有何影响。,42,1. 临床所用药物的纯度与化学品及试剂纯度的主要区别是（A） A. 所含杂质的生理效应不同 B. 所含有效成分的量不同 C. 所含杂质的绝对量不同 D. 化学性质及化学反应速度不同 E. 所含有效成分的生理效应不同,练习题与答案,43,2在药物生产过程中引入杂质的途径为(A,B,C,D) A. 原料不纯或部分未反应完全的原料造成 B. 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成 C. 需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金属器皿及装置等引入杂质 E. 由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质,44,3检查某药物中的砷盐，取标准砷溶液2ml（每1ml相当于1g的As）制备标准砷斑，砷盐限量为0.0001，应取供试品的量为 A. 0.20g B. 2.0g C. 0.020g D. 1.0g E. 0.10g,已知：C1 g/ml110-6 g/ml; V2ml; L0.0001%,45,4检查维生素C中的重金属时，若取样量为1.0g，要求含重金属不得过百万分之十，问应吸取标准铅溶液（每1ml0.01mg的Pb）多少ml？ A. 0.2ml B. 0.4ml C. 2ml D. 1ml E. 20ml,46,基 本 要 求,掌握一般杂质检查项目的原理和方法 重点：氯化物、重金属、砷盐、 铁盐和干燥失重,第三章,47,一般杂质检查规则 药品检验操作标准规定 1. 遵循平行操作原则 （1）仪器的配对性 如纳氏比色管应配对，刻度线高低相差不超过2mm，砷盐检查时导气管长度及孔的大小要一致 （2）对照品与供试品的同步操作 2. 正确的取样及供试品的称量范围 1g不超过2%，1g不超过1% 3. 正确的比色、比浊方法 4. 检查结果不符合规定或在限度边缘时应对供试管和对照管各复查二份,48,一 氯 化 物 检 查 法,1. 原理 利用氯化物在硝酸酸性条件下与硝 酸银反应, 生成氯化银白色浑浊液, 与一 定量标准氯化钠溶液在相同条件下产生 的氯化银浑浊程度比较, 浊度不得更大. Cl-+Ag+ H+ AgCl,第三章,49,2操作方法(对照法),样品管,对照管,第三章,葡萄糖中氯化物检查,1.0ml,用水稀释至50ml,6.0mL,0.60g,0.010%,(浓度：10gCl/ml),一 氯 化 物 检 查 法,50,一 氯 化 物 检 查 法,3. 结果观察方法 暗处放置5min(避免AgCl分解),第三章,51,4注意事项及讨论,一 氯 化 物 检 查 法, 平行试验 加稀硝酸的目的 氯化物的最适检测浓度范围 稀释到40ml后加硝酸银试液的目的 供试品溶液不澄清处理方法 供试品溶液有色时的处理方法 供试品溶液显碱性的处理方法 干扰物的排除 有机药物中氯化物的检查,第三章,52,一 氯 化 物 检 查 法,为了保证样品管与对照管的反应条件一致,要求样品管与对照管要平行操作平行试验.,第三章, 平行试验,53, 加稀硝酸的目的,一 氯 化 物 检 查 法,加速氯化银混浊的生成,产生较好的乳浊,避免产生碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀. 50ml供试液含稀硝酸10ml为宜. 过多会增大氯化银的溶解度,使浊度降低.,第三章,54,一 氯 化 物 检 查 法,氯化物的最适检测浓度范围,50ml供试液中含0.050.08mg的Cl-, 相当于标准氯化钠溶液(10gCl-/ml) 5.08.0ml 时,所显浑浊梯度明显. 根据限量取用适宜的供试品量, 使氯化物的浓度在适宜的范围内.,第三章,55, 稀释到40ml后加硝酸银试液 的目的,一 氯 化 物 检 查 法,使产生的AgCl浑浊均匀. 硝酸银加得过早, 由于氯化物浓度过大而产生AgCl沉淀而影响比浊.,第三章,56, 供试品溶液不澄清处理方法,一 氯 化 物 检 查 法,供试品溶解后溶液不澄清,应过滤,过滤时的滤纸要先用含硝酸的水溶液(1100)洗涤, 除去滤纸中含有的氯化物.,第三章,57, 供试品溶液有色时的处理方法,a.内消色法 如枸橼酸铁铵中氯化物的检查.,第三章,58,向供试品溶液中加入某种试剂,使溶液颜色褪去后再依法检查.,一 氯 化 物 检 查 法,例：高锰酸钾中氯化物的检查 因溶液呈紫色,加入适量乙醇,使颜色消失后再检查.,第三章,b. 外消色法,59, 供试品溶液显碱性的处理方法,一 氯 化 物 检 查 法,先中和为中性后再检查. 避免硝酸银在碱性条件下生成氢氧化银和氧化银.,第三章,60,a.碘化物中氯化物的检查,第三章, 干扰物的排除,61,b.碘中氯化物的检查,反应原理: 根据氨中溶解度不同 AgCl(溶解)AgBr(微溶)AgI(不溶),第三章,62,Cl的氧化电位高(1.35)不能被氧化为Cl2 Br-的氧化电位低(1.08),c. 溴化物中氯化物的检查,第三章,63,一 氯 化 物 检 查 法, 有机药物中氯化物的检查,第三章,a 溶于水的有机药物直接检查.,b 不溶于水的有机药物,64,d 杂质中卤素原子连接于苯环上 先进行有机破坏,使分解后再检查.,第三章,氧瓶燃烧进行样品处理.,65,二 硫 酸 盐 检 查 法,硫酸盐与氯化钡在盐酸酸性溶液中生成硫酸钡的白色浑浊液,与一定量标准硫酸钾溶液与氯化钡在相同条件下生成的浑浊比较.,第三章,1. 原 理,66,二 硫 酸 盐 检 查 法,第三章,2. 操作法,浓度范围 0.1mg0.5mgSO42-/50ml,67,1. 标准K2SO4溶液0.1mg/ml，50ml溶液中含0.10.5mg的所显浑浊梯度明显，相当于标准K2SO4溶液15ml。 2. 反应需在盐酸酸性条件下进行，且以50ml供试溶液中含稀盐酸2ml为宜。 (盐酸酸性条件防止BaCO3，BaPO4沉淀生成，pH约=1) 3. 试剂：氯化钡 4. 供试液和对照液稀释后，再加氯化钡溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀。 5. 比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。,二 硫 酸 盐 检 查 法,2. 测定条件,第三章,68,三 铁 盐 检 查 法,第一法 硫氰酸盐法ChP USP,1. 原理 铁盐在盐酸酸性溶液中与硫氰酸铵生成红色可溶性硫氰酸铁配离子,与一定量标准铁溶液用同法处理后所呈的颜色进行比较.,第三章,69,三 铁 盐 检 查 法,第三章,2. 操作,70,三 铁 盐 检 查 法,第三章,2) 最佳比色浓度 a. 仪器分析线性范围5 90g Fe3+ /50ml b. 目视比色浓度范围1050g Fe3+ /50ml,3. 讨 论,标准铁溶液硫酸铁铵(含硫酸) 浓度10 gFe3+/ml,71,3）试剂：硫氰酸铵。加过量硫氰酸铵，使反应向正反应方向进行 4）检查Fe2+和Fe3+ 5）铁盐检查时，加氧化剂氧化Fe2+为Fe3+。加过硫酸铵可氧化Fe2+为Fe3+，同时可防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色。 加硝酸后加热也可氧化Fe2+为Fe3+ 6）比色方法：同置于白色背景上，自上向下观察。,第三章,72,三 铁 盐 检 查 法,第二法 巯基醋酸法 BP,第三章,73,枸橼酸的作用：使枸橼酸与铁离子形成配位离子，以免在氨碱性溶液中产生氢氧化铁沉淀。 巯基醋酸：还原剂 本法灵敏度较高，但试剂较贵,第三章,74,四 重 金 属 检 查 法,重金属是指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用呈色的金属. 如：Ag、Pb、Hg、Cu、Cd、Bi、Sb、Sn、As、Ni、Co、Zn等. 重金属存在影响药物的稳定性及安全性. 铅易在体内积蓄中毒,以Pb为代表.,第三章,1.重金属的概念,75,四 重 金 属 检 查 法,第二法:炽灼后检查法 适用于含芳环、杂环以及不 溶于水、稀酸及乙醇的有机药物.,第一法:硫代乙酰胺法 适用于溶于水、稀酸、乙醇 的药物,是最常用的方法.,第三章,76,四 重 金 属 检 查 法,第三法:硫化钠法 适用于难溶于稀酸但能溶于 碱性溶液药物(巴比妥类、磺胺类),第四法:微孔滤膜法. 适用于重金属限量低(2-5g) 药物.,第三章,77,四 重 金 属 检 查 法,适用于溶于水、稀酸和乙醇的药物.,第三章,第一法 硫代乙酰胺法,78,四 重 金 属 检 查 法,硫代乙酰胺在弱酸性 (pH3.5 醋酸盐缓冲液)条件下水解,产生H2S,与微量重金属离子(以Pb2+为代表)生成黄色到棕黑色的硫化物混悬液, 与一定量标准铅溶液经同法处理后所呈颜色比较, 不得更深.,第三章,1 原 理,79,2 操作方法,样品管,对照管,80,第三章,结果观察,81,四 重 金 属 检 查 法, 标准铅溶液浓度 硫代乙酰胺试液 溶液的pH 供试品溶液有颜色时的处理 干扰物的排除方法,第三章,3讨论,82,四 重 金 属 检 查 法, 标准铅溶液浓度,适宜目视比色的浓度范围 Pb2+标准溶液10g/ml 12ml,第三章,83,四 重 金 属 检 查 法, 硫代乙酰胺试液,H2S试液：恶臭和毒性；不稳定；易被空气氧化而析出硫；浓度难以控制.,第三章,改用硫代乙酰胺为显色剂（95版药典）硫代乙酰胺在实验条件下水解产生H2S,与重金属离子反应.,84,四 重 金 属 检 查 法,pH在3.03.5时, 呈色较完全. 酸度增大, 呈色变浅甚至不呈色.,第三章,溶液的pH对于金属离子与硫化氢呈色影响较大., 溶液的pH,85,四 重 金 属 检 查 法, 供试品溶液有颜色时的处理,第三章,a.外消色法 b.内消色法,86,四 重 金 属 检 查 法,a. 外消色法,. 稀焦糖溶液调节,. 指示剂调节,第三章,87,第三章,88,四 重 金 属 检 查 法, 干扰物的排除方法,干扰：弱酸性溶液中Fe3+氧化H2S析出S,产生混浊影响检查.,a.供试品中微量高价Fe3+存在,第三章,如：葡萄糖酸亚铁中重金属的检查.,排除：加入抗坏血酸或盐酸羟胺使 Fe3+还原为Fe2+.,89,b.供试品为铁盐（大量的Fe3+）,Fe3+在HCl溶液中能形成配位化合物用乙醚提取 Fe3+HCl HFeCl62-（黄色） 水层加氨试液调至碱性,残存的Fe3+可用KCN掩蔽, 按第三法检查. 如：枸橼酸铁铵的重金属检查,第三章,四 重 金 属 检 查 法,90,四 重 金 属 检 查 法,c.药物本身能生成不溶性硫化物,加入掩蔽剂消除干扰 加掩蔽剂KCN,使锑、锌形成稳定的配合物后, 用第三法检查.,第三章,如：葡萄酸锑钠 中重金属的检查,91,四 重 金 属 检 查 法,1.原理 供试品先炽灼破坏后,使有机结合的重金属游离, 再按第一法检查.,第三章,第二法 灼烧后检查,适用于含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸、乙醇的有机药物.,92,四 重 金 属 检 查 法,2. 操作,第三章,缓缓炽灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml 供试品 炭化 加热 HNO3 500-600 H2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干 HCl 2ml 水15ml 中性 按第一法检查 蒸干 氨试液 注意：做空白试验,93,四 重 金 属 检 查 法,a. HNO3处理后,必须蒸干除尽NO.,第三章,3. 讨 论,b. 炽灼温度严格控制：500-600,c. 含钠盐或氟的有机药物在炽灼时 改用铂坩埚或硬质玻璃 (玛瑙) 蒸 发皿. 如：盐酸氟奋乃静中重金属检查,94,四 重 金 属 检 查 法,1. 原理 在碱性介质中,以Na2S为显色剂, 使Pb2+与S2-作用生成PbS 的混悬液, 与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较, 不得更深.,第三章,第三法 硫化钠法,95,四 重 金 属 检 查 法,适用于难溶于稀酸但能溶解于碱性溶液的药物中重金属的检查. 如：磺胺类与巴比妥类药物,第三章,96,四 重 金 属 检 查 法,2. 方法,取供试品适量,加NaOH试液5ml和水 20ml使溶解后,置纳氏比色管中,加Na2S试液5滴, 摇匀, 与一定量标准铅溶液经同法处理所呈颜色比较.,第三章,97,四 重 金 属 检 查 法,3. 讨论,Na2S 对玻璃有腐蚀性,久置产生絮状物,应临用新配.,第三章,98,四 重 金 属 检 查 法,第四法 微孔滤膜法,当重金属含量低(2-5g) 时, 在比色管中难于目视观察,采用本法.,第三章,99,四 重 金 属 检 查 法,1. 原 理,第三章,同第一法 使重金属生成的硫化物富集于微孔滤膜上(铅斑)提高检查的灵敏度.,100,(二) 白田道夫法,(一) 古蔡氏法,(三) Ag-DDC法,(四) 奇列氏法(次磷酸法),第三章,五 砷 盐 检 查 法,101,第三章,五 砷 盐 检 查 法,(一) 古蔡氏法（Gutzeit）,1. 原 理 金属锌与酸作用产生新生态的氢与药物中微量砷盐反应生成具挥发性的砷化氢,遇溴化汞试纸产生黄色至棕色的砷斑,与同条件下一定量标准砷溶液所生成的砷斑比较,判断砷盐的含量.,102,反应式如下：,第三章,103,第三章,C,五 砷 盐 检 查 法,104,2 操作,加锌粒2g, 立即将装妥的导气管 B 密塞与 A 瓶, 置25-40 水浴中, 反应45分钟, 取出溴化汞试纸, 比较砷斑.,第三章, 导气管B中装入醋酸铅棉球60-80mm;,再于旋塞C的平面上放一片溴化汞试纸,样品、对照品分别置于检砷瓶中, 加盐酸5ml与 水21ml, 再加2.5%碘化钾试液5ml 与0.3%酸性氯化亚锡试液5滴, 在室温放置10分钟,105,3. 讨 论,1)试剂的作用,a. KI的作用还原剂：As5+As3+,五价砷生成AsH3的反应速度比三价砷速度慢, 加入 KI 使五价砷还原为三价砷后再与活泼氢反应, 以增大AsH3的生成速度.,第三章,五 砷 盐 检 查 法,106,第三章,五 砷 盐 检 查 法,还原剂(表现在3方面) . 将五价砷还原为三价砷(As5+As3+),b.酸性SnCl2的作用,107,第三章,进而促进AsH3不断生成,稳定的络离子,. 将KI被氧化生成的I2再还原为I-,108,第三章,五 砷 盐 检 查 法,. SnCl2与Zn粒表面形成Zn-Sn齐 起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生.,109,第三章,五 砷 盐 检 查 法,c.PbAc2棉花的作用,排除硫化物的干扰(1mgS2- ),110,第三章,五 砷 盐 检 查 法,d.HgBr2试纸的作用,HgBr2试纸与AsH3作用生成砷斑.,111,2) 反应最佳条件,a. Zn粒的大小及用量 大小：能通过1号筛（8502000m） 用量：约2g.,b. 标准砷溶液2 ml (1 g /ml),第三章,五 砷 盐 检 查 法,112,a. 供试品是硫化物,亚硫酸盐,硫代硫酸盐,排除方法：加入浓硝酸处理,第三章,3) 干扰物的排除,五 砷 盐 检 查 法,113,Fe3+能消耗还原剂(KI、SnCl2), 并能氧化砷化氢.,排除方法：先加酸性SnCl2试液使 Fe3+ Fe2+,第三章,五 砷 盐 检 查 法,b. 供试品是铁盐(Fe3+),114,c. 共价键结合的砷化物,排除方法：进行有机破坏 酸破坏法或碱破坏法,第三章,五 砷 盐 检 查 法,115,碱破坏法 a 加入氢氧化钙 500-600 C灼烧 例：酚磺酞 b 加入无水碳酸钠碱融 例：苯甲酸钠,第三章,五 砷 盐 检 查 法,酸破坏法 加稀硫酸与溴化钾 例：葡萄糖中砷盐检查,116,4)古蔡氏法特点,第三章,五 砷 盐 检 查 法,117,第三章,五 砷 盐 检 查 法,(二) 白田道夫法,对含锑药物中砷盐的检查不能用古蔡氏法,需用白田道夫法.,118,第三章,五 砷 盐 检 查 法,1. 原 理,119,2. 白田道夫法的特点,优点：不受Sb干扰,缺点：灵敏度低 20gAs2O3/10ml 加入少量HgCl2,灵敏度提高至2 gAs2O3（1.5 gAs）/10ml.,第三章,五 砷 盐 检 查 法,120,(三) 二乙基二硫代氨基甲酸银法 (Ag-DDC法) USP silver diethyldithiocarbamate,第三章,本法不仅用于砷盐的限量检查, 而且可用作微量砷盐的含量测定.,121,第三章,1. 原 理,122,AsH3+6Ag(DDC)As(DDC)3+6Ag(红色)+3HDDC,砷化氢与Ag-DDC溶液作用，还原AgDDC为红色胶态银，直接比色或于510nm波长处测定吸收度，进行比较。 用有机碱吸收反应产生的HDDC有利于反应的进行。 USP（24）用吡啶，灵敏但试剂恶臭 ChP（2000）用三乙胺。灵敏度低 本法适用于含Sb量小于500g的供试品。,123,2. Ag-DDC法的特点,a 灵敏度高 0.5 gAs/30ml b 可仪器测定,还可定量 c Sb干扰小（ 500g ）,第三章,五 砷 盐 检 查 法,124,第三章,五 砷 盐 检 查 法,(四)奇列氏法（次磷酸法）BP,125,2. 特点,不受S2-,SO32-,Sb干扰,灵敏度较古蔡氏法低,第三章,五 砷 盐 检 查 法,126,第三章,六 溶 液 颜 色 检 查 法,控制药物中有色杂质限量的方法。 生产、贮藏中产生 ChP(2005)采用三种方法检查。 第一法 目视比色法 即与标准比色液比较的方法，全波长范围定性观察 观察方法,127,第三章,六 溶 液 颜 色 检 查 法,标准比色液的配制,黄绿、黄、橙黄、橙红、棕红,128,第二法 分光光度法 单一波长定量，吸收度不得超过规定值。 第三法 色差计法 全波长范围定量 本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法。 测色仪器一般为光电积分型色差计 科学客观 三刺激值即是在给定的三色系统中与待测色达到色匹配所需的三个原刺激量。 自然界的每种颜色都可以用红、绿、蓝三原色按适当比例混合而成。 当目视法难判断色差时，应考虑本法。,第三章,129,第三章,七 易 碳 化 物 检 查 法,检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。 方法：H2SO4炭化后与对照液比较。 对照液：有三类 （1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液； （2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液； （3）高锰酸钾液 比色：同置白色背景前，平视观察比较。 不得更深,130,第三章,八 澄 清 度 检 查 法,检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查。 1检查方法 对照法,131,第三章,八 澄 清 度 检 查 法,2. 浊度标准液的配制 中国药典规定用浊度标准液作为澄清度检查的标准。 反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。 1.00硫酸肼溶液与10乌洛托品溶液等量混合配制浊度标准贮备液（151000） 浊度标准原液 550nm处吸收度0.12-0.15 浊度标准液（5个级号）0.5,1,2,3,4,132,第三章,八 澄 清 度 检 查 法,3. 判断 药典中规定的“澄清”，系指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂，或未超过0.5号浊度标准液。 4. 溶剂：水、酸、碱、有机溶剂(乙醇、甲醇、丙酮) 有机酸的碱金属盐类药物强调用“新沸过的冷水”,133,检查不含金属的有机药物或挥发性无机药物中混入的非挥发性无机杂质(金属氧化物或无机盐类)。,第三章,九 炽 灼 残 渣 检 查 法,134,1. 原理 样品炭化后+ H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣(residue on ignition)（硫酸灰分） （sulphated ash） 限量一般为0.1%0.2% 无机杂质的硫酸盐。 H2SO4湿润（低温加热至硫酸蒸汽除尽） 炽灼残渣（USP）, 硫酸灰分（BP）,第三章,九 炽 灼 残 渣 检 查 法,135,第三章,九 炽 灼 残 渣 检 查 法,2. 操作方法,136,第三章,九 炽 灼 残 渣 检 查 法,注意事项 （1）供试品的取样量应根据炽灼残渣限量和称量误差决定。 （2）含氟的药物对瓷坩埚有腐蚀，应采用铂坩埚。 （3）若残渣需留作重金属检查，则500600炽灼至恒重。 （重金属（铅）在高温下易挥发） 检查结果偏低 （4）加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化。,137,十 干 燥 失 重,第三章,138,十 干 燥 失 重,中国药典采用的测定法 常压干燥法 干燥剂干燥法 减压干燥法 热分析法,第三章,139,适用于受热较稳定的药物。干燥温度一般为105。 干燥失重：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续干燥1h后进行。 炽灼残渣：第二次及以后各次称重均应在规定条件下继续炽灼0.5h后进行。 注意： 供试品应平铺，厚度5mm，疏松物10mm 结晶药物应该研细 瓶盖半开，或者放置旁边 取时，先盖瓶盖,第三章,十 干 燥 失 重,常压干燥法,140,适用于受热易分解或挥发的供试品。 干燥剂：硅胶、浓硫酸、P2O5 。 1，硅胶：吸水率居中，变色硅胶，加有氯化钴（CoCl2），无水氯化钴蓝色，吸水后含二分子结晶水呈淡红色。105干燥后可恢复使用。价廉、方便、无腐蚀性、可重复，最常用的干燥剂。 2，浓硫酸：吸水率低，有腐蚀性。 3，P2O5 ：吸水性好，不能反复使用。,第三章,十 干 燥 失 重,干燥剂干燥法,141,适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物。 除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下。,第三章,十 干 燥 失 重,减压干燥法,142,在程序控制温度的情况下,测定物质的物理、化学变化与温度关系的一类仪器分析方法. (一) 热重分析法 (二) 差示热分析法 (三) 差示扫描量热法,第三章,十 干 燥 失 重,热分析法,143,测量物质的质量随温度变化的热分析技术,可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率.,第三章,(一) 热重分析法 (thermogravimetric,TGA),144,c. 测定速度快,第三章,TGA的特点,分析样品少, 适用于贵重药材或在 空气中容易氧化药物干燥失重测定.,d. 可用于判断结晶水或吸附水, 并推断结晶水含量.,b. 灵敏度高,可达1 g以下,145,第三章,供试品 TGA热重曲线,W,W,1 测定曲线上平台之间的质量差值计算出样品相应温度范围内减失质量的百分率,结晶水 失重台阶,2 可用于药物结晶水与吸附水的区分,146,测量供试品和惰性参比物(常用石英砂、煅制MgO)之间的温度差与温度(或时间) 关系的热分析技术.,第三章,(二)差示热分析法 (differential thermal analysis, DTA),147,第三章,供试品发生放热反应温度高 于参比物质从而产生吸热峰,供试品发生吸热反应温度低 于参比物质从而产生放热峰,差示热分析法(DTA)曲线,148,DTA用途(1) 熔点测定,熔程,T, T=0,第三章,149,DTA用途(2) 定性和纯度检定根据峰的数目、形状、位置对供试品进行纯度判别, T=0,T,第三章,供试品,对照品,150,测量保持供试品和惰性参比物的温度相同, 系统所需输给供试品或参比物的能量差随温度(或时间)变化的热分析技术.,第三章,(三) 差示扫描量热法 (differential scanning calorimetry, DSC),151,97.2%,98.6%,标准品,不同纯度苯甲酸的DSC曲线,第三章,DSC用途：熔点测定、晶型鉴别和纯度测定峰在横轴上位置、形状、数目与物质的性质有关,152,药物中的水分包括结晶水和吸附水。 中国、美国和英国药典收载了费休氏法和甲苯法。 费休氏法（卡尔费休法）（karl fischer）:可以测定结晶水、吸附水和游离水。 原理：I2+SO2+H2O2HI+SO3,十 一 水 分 测 定 法,第三章,根据消耗碘的量来测定水分的含量。,153,第三章,1. 有机溶剂残留量测定法 是用以检查药物在生产过程中引入的有害有机溶剂，2000版药典包括苯、氯仿、二氧六环、二氯甲烷、吡啶、甲苯及环氧乙烷。 2005版有较大修订。 2. 检查方法 中国药典采用气相色谱法检查残留有机溶剂 色谱条件： 固定相：直径为0.25-0.18mm的二乙烯苯乙基乙烯苯型高分子多孔小球 载气：氮气 检测器：氢火焰离子化检测器检测（FID） 柱温：80-170,十 二 有 机 溶 剂 残 留,154,色谱系统适用性试验：中国药典规定，在残留溶剂测定前应作色谱系统适用性试验。 （1）用待测物的色谱峰计算的理论塔板数填充柱应大于1000，毛细管柱应大于5000 ； （2）用内标法测定时，内标物与待测物色谱峰的分离度应大于1.5； （3）用内标法测定时，每个标准溶液（限量待测溶剂与内标液）进样5次，待测物与内标物峰面积之比的相对标准偏差应不大于5；若用外标法测定，待测物峰面积的相对标准偏差应不大于10,第三章,155,3. 测定法 残留溶剂的测定有直接进样法（第一法）和顶空进样法（第二法）两种。 第一法 溶液直接进样法 第二法 顶空进样法 适用于挥发性大的组分，可以避免污染柱子（非挥发性组分） 从方法的精密度考虑，二氧六环、吡啶宜用第一法；苯、甲苯、氯仿、二氯甲烷可用第一法或第二法，环氧乙烷直接用第二法。,第三章,156,色谱条件与系统适用性实验包括下列四项内容。 色谱柱的理论塔板数 分离度,， 要求R1.5% 重复性,进样5次，要求RSD2% 拖尾因子， 其中d1为峰极大至峰前 沿之间的距离，T应在 0.951.05,第三章,157,小结 1、掌握药物中一般杂质检查的原理和方法： （1）氯化物检查法：原理及干扰色的消除 （2）重金属检查法： （a）重金属：指实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质； （b）四种方法之原理及注意事项 （3）砷盐检查法 （a）古蔡氏法：包括原理及试剂作用 （b）Ag-DDC法：原理4、熟悉特殊杂质的检查方法 识记：杂质限量、干燥失重、炽灼残渣、易炭化物、指示性杂质、重金属。,第三章,158,思考题 1，药物重金属检查法中，重金属以什么代表？有那几种显色剂？检查的方法共有哪几种？（05年版的药典一共收载几法） 2，简述中国药典对药物中氯化物检查法的原理，方法及限量设计公式？ 3，简述硫代乙酰胺法检查重金属的原理和方法,第三章,159,第三章,特殊杂质,是指在该药物生产和储藏过程中,根据其生产方法、工艺条件及药物本身结构性质可能引入的特有杂质. 阿司匹林水杨酸 盐酸普鲁卡因对氨基苯甲酸,160,特殊杂质的检查法,二、化学性质的差异,一、物理性质的差异,第三章,三、光学性质的差异,四、色谱性质的差异,161,臭味及挥发性差异 颜色差异 溶解行为差异 旋光性质的差异 吸附或分配性质的差异 对光吸收性质的差异,一 物 理 性 质 差 异,第三章,162,第三节 特殊杂质检查,2. 杂质无挥发性 利用药物在室温或加热挥发后,遗留残渣于一定温度加热至恒重,其重量不得超过规定. 例：乙醇中不挥发物的检查.,一 物 理 性 质 差 异,第三章,(一) 嗅味及挥发性差异,1. 杂质有特殊气味： 乙醇中的杂醇油（异臭）,163,第三节 特殊杂质检查,药物自身无色 生产中引入有色的有关物质或分解产物.,一 物 理 性 质 差 异,第三章,例：磺胺嘧啶原料药颜色检查 磺胺苯环上胺基被氧化生成有色偶氮苯化合物.,(二) 颜色差异,164,第三节 特殊杂质检查,根据药物与杂质溶解度的差异 例：葡萄糖中糊精的检查,一 物 理 性 质 差 异,第三章,(三) 溶解行为的差异,165,第三节 特殊杂质检查,1. 药物有旋光度而杂质没有. 例:黄体酮在乙醇中比旋度+186-+198,一 物 理 性 质 差 异,第三章,(四) 旋光性质的差异,2. 杂质有旋光度而药物没有. 例:硫酸阿托品中莨菪碱的检查,供试品 水溶液50mg/mL不得过-0.4 ,166,1 酸碱性的差异 例：苯巴比妥中苯基丙二酰脲检查 甲基橙不得显红色,2 氧化还原性的差异 例：氯化物中碘化物检查 供试品与含亚硝酸钠的淀粉指示剂不得显蓝 Cl的氧化电位高(1.35)不能被氧化为Cl2. I-的氧化电位低(0.53)能被氧化为I 2,第三章,二 化 学 性 质 差 异,167,3 杂质与一定试剂反应产生沉淀 间苯二酚中邻苯二酚检查.,4 杂质与一定试剂反应产生颜色 阿司匹林中游离水杨酸的测定,5 杂质与一定试剂反应产生气体 盐酸乙基吗啡中胺盐检查.,第三章,二 化 学 性 质 差 异,168,二 化 学 性 质 差 异,例1阿司匹林中游离水杨酸的检查,杂质来源,a. 生产过程中反应不完全,b. 贮存过程中阿司匹林水解,第三章,169,紫堇色（有酚羟基）, 检查原理,阿司匹林 + Fe3+,（无酚羟基）,水杨酸+ Fe3+,第三章,170,例2对氨基水杨酸钠中间氨基酚的检查 杂质来源 生产中引入(反应不完全),贮存中样品脱羧,第三章,171,第三章, 检查原理与方法 对氨基水杨酸钠乙醚中不溶 间氨基酚乙醚中溶解 采用双相滴定法测定, 控制间氨基酚的限量.,172,色谱法 (一) 薄层色谱法(TLC) (二) 高效液相色谱法(HPLC) (三)气相色谱法(GC),三 色 谱 行 为 差 异,第三章,173,根据药物与杂质对吸附剂的吸附或对展开剂的解析能力不同(Rf值的差异), 加以分离和检查.,三 色 谱 行 为 差 异,第三章,(一)薄层色谱法(TLC),174,三 色 谱 行 为 差 异,第三章,本法灵敏、简便、快速； 不需特殊的设备、费用低； 分离和鉴定同步进行.,1. TLC法特点,175,三 色 谱 行 为 差 异,我国药典2005年版增加了TLC系统适用性试验。,第三章,1，检测灵敏