自免及CCP

,自身免疫性疾病及其检测,目录,自身耐受(Self-tolerance),自身免疫(autoimmunity),自身免疫病(autoimmune disease，AID),自身抗体(致敏T淋巴细胞):针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的免疫应答过程产生的抗体和效应T细胞。,自身免疫,AID,LOREM,自身免疫病(AID),皮肤,血液,免疫,神经,心内,骨科,呼吸,肾内,器官特异性自身免疫病： 原发性肾上腺皮质功能减退症（Addison病）桥本氏甲状腺炎自身免疫性溶血性贫血 非器官特异性自身免疫病：系统性红斑狼疮类风湿性关节炎,原发性自身免疫病:原发性肝硬化继发性自身免疫病：许多疾病可伴发继发性自身免疫病，包括感染、恶性肿瘤、自身免疫性疾病、免疫球蛋白合成不足、淋巴细胞丢失以及某些其他疾病和免疫抑制治疗等。其病可以是暂时性的，也可以是持久性的。,自身免疫性疾病的共同特征,1多数自身免疫病为自发或特发，感染、药物等外因可能有一定的影响；2患者血液中有高效价的自身抗体或，但对外源性自身抗原应答降低；3病理特征为免疫炎症，出现大量淋巴细胞、浆细胞和中性粒细胞浸润；4病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅有少数为自限性；5有遗传倾向；6女性多于男性，老年多于青少年；7自身抗体在不同的AID中有交叉和重叠；8可复制出相似的动物疾病模型。9应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。,自身免疫性疾病的共同特征,1多数自身免疫病为自发或特发，感染、药物等外因可能有一定的影响；2患者血液中有高效价的自身抗体或，但对外源性自身抗原应答降低；3病理特征为免疫炎症，出现大量淋巴细胞、浆细胞和中性粒细胞浸润；4病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅有少数为自限性；5有遗传倾向；6女性多于男性，老年多于青少年；7自身抗体在不同的AID中有交叉和重叠；8可复制出相似的动物疾病模型。9应用肾上腺皮质激素等免疫抑制剂有效。,抗原方面的因素,01,免疫调节异常,02,Fas/FasL表达异常,03,遗传因素,04,1.抗原方面的因素,A.隐蔽抗原的释放隐蔽抗原（Sequestered antigen）：指在正常情况下，体内和免疫系统相对隔离的某些自身抗原成分。主要存在于脑、甲状腺球蛋白、眼的晶体和葡萄膜、肾上腺和精子等。,当机体受到感染、外伤或手术时，某些隐蔽抗原进入血液或淋巴液，从而激活相应淋巴细胞克隆，产生自身免疫和自身免疫病。,B.自身抗原发生改变如经过感染、辐射、药物等，自身抗原发生修饰肺炎支原体改变红细胞溶血性贫血小分子药物吸附到血小板紫癜IgG变性类风湿因子RFRA,1.抗原方面的因素,C.共同抗原引起的交叉反应分子模拟：微生物与正常宿主成分有相同/相似抗原表位，其诱发机体产生的免疫应答可攻击人体细胞或细胞外成分。柯萨奇病毒感染引起免疫应答共计胰岛细胞糖尿病乙型溶血性链球菌与人肾小球基底膜和心瓣膜有类似抗原引起急性肾小球肾炎和风湿性心脏病EB病毒编码蛋白与髓磷脂碱性蛋白（MBP）同源引起多发性硬化性的症状热休克蛋白（HSP）高度保守蛋白，其他物种来源HSP与人HSP有高度相似性诱导自身免疫病,1.抗原方面的因素,1.抗原方面的因素,D.表位扩展 抗原 表位扩展：免疫系统在对优势表位进行免疫应答后，可能对隐蔽表位相继发生免疫应答。 针对自身抗原应答发生表位扩展使自身抗原不断受到新的免疫攻击导致疾病迁延不愈,优势表位：初始接触时就刺激免疫应答隐蔽表位：后续免疫应答中刺激免疫应答,2.免疫调节异常,A.淋巴细胞旁路活化 正常情况下，针对自身抗原的Th细胞或克隆被排除，或功能受到抑 制，故不能辅助效应T、B细胞发生自身免疫 交叉抗原或药物与自身抗原结合，可通过其新的抗原决定簇激活相应的新的Th,导致自身免疫病,2.免疫调节异常,B.调节性T细胞亚群异常 CD4+CD25+调节性T细胞异常（Treg 细胞不仅抑制正常T淋巴细胞的激活,而且对B淋巴细胞、巨噬细胞及树突状细胞的功能也具有调节作用,在免疫应答中发挥重要的负调节作用。） CD8 +CD28-抑制性T细胞异常（负责细胞接触） Tr1 调节性 T细胞 异常（负责细胞接触和分泌细胞因子IL-10） Th3调节性T 细胞异常（分泌细胞因子TGF- ）调节性T细胞发生异常不能有效抑制自身反应T细胞引起自身免疫病,2.免疫调节异常,C.多克隆刺激剂旁路激活,自身反应性T、B细胞可通过多克隆激活剂（如人类疱疹病毒EBV或细菌内毒素）直接被激活,TH,T或B,多克隆激活剂（如EBV、细胞内毒素）,自身免疫病,无辅助信号,自身抗原,耐受TH,2.免疫调节异常,D. Th1和Th2细胞功能失衡 在适应性免疫应答中,Th1 与Th2 细胞处于相对平衡状态, 因为Th1 细胞分泌的IFN-对Th2 细胞的分化成熟有抑制作用,而Th2 细胞分泌的IL-4 对Th1 细胞有抑制作用。 许多疾病的发生和结局都与Th1/ Th2 细胞失衡有关, 一些自身免疫疾病与Th1 细胞过多有关，如多发性硬化症MS，胰岛素依赖性糖尿病, 而一些过敏性疾病与Th2 细胞过多有联系 ，如系统性红斑狼疮。,2.免疫调节异常,E. 协同刺激分子异常表达 除免疫细胞对抗原提呈细胞（APC）表面抗原肽复合物识别外，还需两细胞间辅助刺激因子的相互作用才能激活免疫细胞。（ B7主要表达于某些抗原提呈细胞表面，可提供T细胞活化的协同刺激信号；CTLA-4与B7结合后诱导T细胞无反应性，参与免疫反应的负调节 。） B7分子异常表达提供活化第二信号功能激活淋巴细胞自身免疫病 CTLA-4分子异常表达不能抑制活化信号2激活淋巴细胞自身免疫病,2.免疫调节异常,F. MHC-类分子异常表达 某些自身免疫病受累器官细胞表面会异常表达或高表达 MHC-类抗原分子，这些细胞可能具有向Th细胞提成自身抗原的潜能，导致自身免疫病。 提呈自身抗原激活自身反应性淋巴细胞引起自身免疫病,3.Fas/FasL表达异常,Fas属TNFR /NGFR家族成员，FasL为受体，二者结合可诱导细胞凋亡 Fas/FasL基因缺陷，由于细胞凋亡机制受损，T、B细胞克隆增殖 失控，易发生AID。 Fas/FasL基因过度表达，如I型糖尿病发病过程中产生的IL-1 和NO，使胰岛细胞表达Fas，激活的CTL表达FasL，Fas/FasL使胰岛细胞 受损。,4.遗传因素,AID有家族遗传倾向，与HLA某些基因型检出率呈正相关，HLA与自身免疫性疾病的关系举例：,4.遗传因素,与自身免疫性疾病相关的其他基因： 补体成分C1q和C4基因缺陷清除免疫复合物的功能减弱易发生SLE； CTLA-4基因缺陷易发生糖尿病，甲状腺疾病和原发性胆管硬化； DNA酶基因缺陷易导致SLE； 血清淀粉样蛋白SAP基因缺陷易导致SLE。,抗血细胞表面抗原的抗体引起的自身免疫性疾病,1.自身免疫性溶血性贫血（autoimmune hemolytic anemia, AIHA） 体内出现抗红细胞自身抗体，Coombs试验阳性。红细胞寿命缩短。2.免疫性血小板减少性紫癜（immunologic thromabacytopenic purpura, ITP） 血清中存在抗血小板抗体，使血小板寿命缩短。,抗细胞表面受体抗体引起的自身免疫病,1.重症肌无力（myasthenia gravis, MG） 2.毒性弥漫性甲状腺肿（Graves disease）,细胞外抗原的自身抗体引起的自身免疫病,1.抗肾小球基底膜肾炎 肺出血肾炎综合征（又称Good pasture 综合征） 由于肺泡基底膜与肾小球基底膜有共同抗原，可检测到抗肾小球基底膜型胶原抗体 临床特点：反复咯血，痰内有含铁血黄素，伴有血尿，蛋白尿等,自身抗体免疫复合物引起的自身免疫性疾病,1.系统性红斑狼疮（systemic disease erythematosus, SLE） 是一种累及多器官、多系统的小血管及结缔组织病。,自身细胞核抗原,IgG型自身抗体,复合物沉积于肾小球、关节和其它器官的细胞壁,中性粒细胞损伤,2.类风湿性关节炎（rheumatoid arthritis, RA）,是一种以侵蚀性关节炎为主要表现的全身性自身免疫性疾病。 病理表现为关节滑膜的慢性炎症，并出现关节的软骨和骨破坏，最终导致关节畸形和功能丧失。,感染、炎症 变性IgG(自身抗原) 抗变性IgG抗体（RF） 免疫复合物（变性IgGRF） 沉积于关节滑膜等部位 激活补体，引起病变,3.干燥综合征（Sjogren Syndrome,SS）,分泌腺功能异常导致皮肤和粘膜的干燥，泪腺和唾液腺最常被侵犯，从而产生口干和眼干。 病毒：与EB病毒、巨细胞病毒、HIV病毒有关。 机制：抑制性T细胞减少，细胞免疫异常。,自身抗体：是指抗自身细胞内、细胞表面和细胞外抗原的免疫球蛋白，是自身免疫和自身免疫病重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗体(谱)。,自身抗体免疫球蛋白补体淋巴细胞细胞因子,自身免疫性疾病的主要实验检测内容：,自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关参与免疫病理性损伤,自身抗体的特性：,自身抗体检测的临床意义：,以类风湿性关节炎为例：,2009年ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）标准,该标准对关节受累情况、血清学指标、滑膜炎持续时间和急相时相反应物共4个部分进行评分，总得分6分以上可诊断为RA。,1.类风湿因子（RF）：抗变性IgG Fc的自身抗体，有IgM型，IgG和IgA型，IgM型RF被认为是主要类型。测定方法： 胶乳颗粒凝集实验，速率散射比浊法，ELISA法特点：RF在RA、SLE、PSS等多种自身免疫性疾病患者中均可被检出；RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。IgG-RF与RA患者的滑膜炎、血管炎和关节症状密切相关，常伴随IgM-RF同时出现，在正常人及非RA患者中很难检出。IgA-RF与RA患者关节症状的严重程度及骨质破坏有显著相关性。特异性仅79，敏感性约为60。,类风湿性关节相关自身抗体：,2.抗角蛋白抗体（AKA）：靶抗原为上皮细胞特异性分泌的丝聚蛋白，仅能识别瓜氨酸化，蛋白质的瓜氨酸化在细胞分化和凋亡过程中青岛必不可少的生理生化调节作用，对RA诊断具有高度特异性，阳性率为30-55%，特异性为95-99%。高滴度可预示较严重的RA类型。3.抗核周因子（APF):靶抗原为颊黏膜上皮细胞胞质内透明角质颗粒。RA患者APF阳性率达为50%，特异性为95%左右。检测方法：间接免疫荧光法（IIF）。4.抗聚角蛋白微丝蛋白抗体（AFA）：靶抗原为人表皮细胞胞质内聚角蛋白微丝蛋白，大小为43KD，检测方法：免疫印迹法和酶联吸附法，可用于RA的诊断，但不能完全代替APF、AKA检测，三者相互补充可以提高RA早期诊断率。,5.环瓜氨酸肽抗体（抗- CCP抗体）以人工合成的由分子内的二硫键形成环状结构的瓜氨酸肽为抗原（图1）。Anti-CCP独立于RF，对RA具有较高的特异性，误诊率明显低于RF，应用环瓜氨酸肽(CCP)为包被抗原的ELISA检测试剂对RA诊断的特异性提高到96-98，而其敏感性无改变。且对RA的关节损害具有很大的预测价值，从而对RA预后意义重大。,瓜氨酸化：精氨酸正电荷丢失导致三维结构的变化；可能的CCP结构。PAD，肽基精氨酸去亚胺基酶。,6.抗瓜氨酸化的波形蛋白抗体（Anti-Sa）和抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体（Anti-MCV） 抗Sa抗体对RA的特异性高达98，但敏感性有限，仅22%- 40%,抗Sa抗体对RA严重的临床阶段的预后有意义。此外，抗Sa抗体对RA的诊断具有84-99的预测值，同关节外症状、严重的关节受累密切相关。用于RA诊断的检测抗MCV抗体的 ELISA试剂盒已经市场化，其诊断的特异性和敏感性同抗CCP抗体的类似。,各自身抗体检测RA的对比,酶联免疫：三明博峰生物科技有限公司 深圳市赛尔生物技术有限公司 杭州中翰盛泰生物技术有限公司 深圳市赛尔生物技术有限公司 有效期10个月。 上海北加生化试剂有限公司 上海科新生物技术股份有限公司苏州浩欧博生物医药有限公司北京正旦国际科技有限责任公司上海荣盛 北京热景生物技术有限公司,胶体金渗滤法；上海北加生化试剂有限公司,上转发光，热景,抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体检测试剂盒(胶体金法) 上海荣盛生物药业有限公司上海科新生物技术股份有限公司 北京热景生物技术有限公司,抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）测定试剂盒（胶乳免疫比浊法） 北京百奥泰康生物技术有限公司 抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒(电化学发光法)电化学发光法，罗氏诊断产品(上海)有限公司，18分钟，采用电化学发光,上海科新胶体金：研发生产了抗CCP抗体人体血清金标快速检测试剂盒，该试剂盒采用胶体金免疫层析技术，以间接法检测血清中的CCP抗体。通过对临床收集的疾病组（323例临床确诊为RA的患者）和对照组（400例健康志愿者和100例其他类风湿疾病患者）血清样本进行检测，结果显示：本试剂盒对临床诊断RA的敏感性为81.1%，特异性为97.2%，与酶联免疫方法学在敏感性与特异性上具有极高的符合性，全程操作仅需5分钟，不耗费