束永前胃癌新

驱动基因及非编码RNA 在胃癌研究及临床中的应用,束永前江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院2018年1月20日,目录,晚期胃癌化疗药物,氟脲嘧啶类：5-Fu、卡培他滨、S-1紫杉醇类：紫杉醇、多西紫杉醇铂类：顺铂、奥沙利铂拓扑异构酶I抑制剂：伊立替康蒽环类：表柔比星,化疗药物常见biomarker,Miszczal et al.J Exp clin Cancer.Res，2008Meropol et al J Clin Oncol， 2006Ichikawa et al.Int J Cancer. 2006,化疗药物常见biomarker,Lu M, Gao J, Wang XC, Shen L.Chin J Cancer Res. 2011；Urano et al.Int J Oncol. 2006Panda et al.J Med Chem. 2011；Hirakawa et al. Cancer Chemother Pharmacol. 2013,Challenge,胃癌化疗敏感性的biomarker研究多为回顾性研究尚无大型前瞻性研究加以验证上述biomarker的有效性一项肺癌biomarker指导下化疗前瞻性研究结果为阴性胃癌异质性强，信号通路复杂，靠1-2种biomaker预测一类药物敏感性不可靠,胃癌的分型,胃癌组织学分型与分子生物学,WHO,乳头状腺癌管状腺癌粘液腺癌低分化腺癌印戒细胞癌,Lauren,肠型未分化弥漫型,Matti V, et al. Best Practice 20(4): 651-674.,胃癌组织学分型与分子生物学,Matti V, et al. Best Practice 20(4): 651-674.,弥漫型胃癌遗传，10%-20%基因错误,肠型胃癌后天，80%-90%基因错误,正常,“遗传易感性”CHD1遗传突变,幽门螺旋杆菌,胃炎非萎缩性浅表,萎缩性胃炎肠化生,表达：CDX1/2 COX-2hTERT,腺瘤增生,甲基化：CHD1，DAP-K，HRASLS，LOX，MGMT，p14，RAB-扩增：c-MET，K-SAM突变：CHD1，TP53表达：hTERT,CIMP/微卫星不稳定性甲基化：p16，COX-2，GSTP1，hMLH1，RASSF1A，RUNX3,TFF1扩增：Her2突变：K-RAS，TP53杂合性缺失：APC，MCC,TP53,突变：APC，TP53甲基化：APC，CDH1，DAP-K hMLH1，p14，THBS1，TIMP3表达：EGFR，TNF-,不同Lauren分型对化疗敏感性不同,1. Wasaburo K, et al. Lancet Oncol 2008; 9: 215221.；2. Seong Hyun Jeong ,Dig Dis Sci (2011) 56:1311383.Shen, et al. Journal of Translational Medicine 2013; 11: 73；4. Yasunori E, et al. Surg Today 2008; 38(11):1013-1020.5. Wataru ICHIKAWA, et al. Int. J. Cancer 2004; 112: 967973,胃癌分子分型,EB病毒（EBV）感染型胃癌微卫星不稳定（MSI）型胃癌基因组稳定（GS）型胃癌染色体不稳定（CIN）型胃癌,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,胃癌四种分子分型的临床特征,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,胃癌四种分子分型的分子特征,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,常见位点体细胞拷贝数和突变情况,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,常见位点体细胞拷贝数和突变情况,CIN型胃癌：存在可靶向的RTK基因扩增。VEGFA基因扩增多见， 抗血管生成作用明显。 靶向VEGFR2的抗体ramucirumab对此型胃癌可显示出抗肿瘤作用， 而其疗效是否由VEGFA基因扩增决定则有待验证。MSI型胃癌：未发现MSI型结直肠癌中的BRAF V600E基因突变， 取而代之的则是可靶向的PIK3CA、 ERBB3、 ERBB2和EGFR基因突变。EBV型胃癌：DNA超甲基化（如CIMP），且PIK3CA基因突变频率高， PI3K抑制剂在EBV型胃癌中的疗效将成为研究重点。 此外， 此型胃癌中PD-L1/2水平升高， 提示PD-L1/2拮抗剂可成为此类患者的治疗新选择。GS型胃癌：CDH1 、 ARID1A、 RHOA基因突变或RHO家族GTP酶活化蛋白基因融合现象（ CLDN18-ARHGAP融合）。 GTP酶中的RHO家族有调节肌球蛋白动力及包括黏附、 增殖和生存在内的细胞行为。 RHOA信号通路与肿瘤细胞侵袭和转移密切相关，因而此型胃癌将关注转移相关研究。,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,不同亚型中驱动基因表达率,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,四亚型主要特征,Cancer Genome Atlas Research Network. Nature. 2014,胃癌靶向治疗,Nat Rev Clin Oncol.2013 Nov;10(11):643-55.,小结,以肿瘤分子表达为特征的分子病理分型与个体化治疗密切相关。分型的不断发展，将对胃癌治疗的药物选择更有指导价值。分子分型将指导个体化治疗和靶向药物临床试验。,非编码RNA的定义及分类,真核生物转录组及非编码RNA的概况,非编码RNA在不同物种表达,Lander E. Nature, 2001Taft R and Mattick J. Bioessays, 2007,ncRNA可能是基因调控网络的重要元件,ncRNA,MiRNA在胃癌诊断中的价值,Zhu X, et al. Dig Dis Sci,2013,合并敏感性：0.78 (95 % CI 0.710.85),合并特异性0.89 (95 % CI 0.820.94), 合并的AUC： 0.91.,Mir21文献报道最多,循环血液的microRNA可以作为检测胃癌的重要诊断指标,对已报道mir21的ROC曲线进行Meta分析,循环血液中mir21可作为胃癌的biomaker,MiRNA在胃癌治疗中的价值,Hummel et al. EJC 2010,miR15b,miR16的上调可以增加多药耐药的胃癌细胞对长春新碱、阿霉素、顺铂及依托泊苷的敏感性。上调mir34a可以增强P53突变的胃癌细胞对阿霉素、铂类、吉西他滨、紫杉醇的化疗敏感性。,LncRNA在胃癌中的诊断价值,Song et al. Journal of Translational Medicine 2013,lncRNA 芯片,ROC曲线显示H19的曲线下面积为0.613；UC001为0.751；两者的联合为0.761.说明H19和UC001对胃癌的诊断有一定的辅助作用,LncRNA在胃癌中的预后价值,Sun et al. Tumor Biol. (2014) 35:1065-1073,MEG3癌组织表达下调,MEG3表达高低与肿瘤大小相关,MEG3表达高低与病人分期相关,MEG3表达高低与病人预后相关,科研新成果,我们鉴定了两条与胃癌发生发展相关的长非编码RNA：第一条：TINCR（与胃癌细胞增殖及凋亡相关）第二条：FENDRR（与胃癌的侵袭转移相关）,SP1-induced upregulation of the long noncoding RNA TINCR regulates cell proliferation and apoptosis by affecting KLF2 mRNA stability in gastric cancer束永前等. Oncogene. 2015 Mar 2. doi: 10.1038,本研究显示：1.胃癌组织及细胞中TINCR的表达出现明显的上调, 且TINCR的表达水平与胃癌病人的临床分期，肿瘤的转移及术后生存期存在明显的相关性2.癌组织中TINCR的表达上调与转录因子SP1的激活相关3.TINCR能促进胃癌细胞的增殖并抑制凋亡4.TINCR可以通过调控KLF2 mRNA的稳定性影响KLF2，P21及P15的表达。,TINCR在胃癌组织及细胞系中的表达和其启动子结合位点分析,T在癌组织和细胞系表达上调,T启动子与转录因子SP1结合位点验证,TINCR与病理分期的关系,TINCR在胃癌中的预后和诊断价值,T表达高的病人预后较差T高表达病人中位DFS：21月T低表达病人中位DFS：29.7月,TINCR的ROC曲线 灵敏度：0.65 特异度：0.782 曲线下面积=0.701,TINCR对BGC923和SGC7901增殖和凋亡的影响,MTT实验,克隆形成实验,细胞周期实验,流式细胞仪实验,WB实验,TINCR通过影响KLF2，P21, P15表达调节细胞周期和凋亡,RNA转录组测序,KEGG数据库,GO数据库,qPCR实验,qPCR实验,WB实验,TINCR与胞浆蛋白STAU1相互作用形成复合物影响KLF2 mRNA的稳定性和表达,RNA IP实验,Pull down实验,KLF2对胃癌细胞系的增殖和凋亡的影响及其机制,MTT实验,克隆形成实验,流式细胞仪实验,动物实验,WB,qChIP,qChIP,胃癌组织及细胞系中KLF2表达水平,RT-PCR,qPCR,IHC,KLF2与临床分期,KLF2与预后,KLF2与TINCR相关性,动物实验验证TINCR的功能和KLF2，P21及P15的表达,Decreased expression of the long non-coding RNA FENDRR is associated with poor prognosis in gastric cancer and FENDRR regulates gastric cancer cell metastasis by affecting fibronectin1 expression.束永前等. J Hematol Oncol.2014 Aug 29;7:63.,本研究显示：1. 胃癌组织及细胞中FENDRR的表达出现明显的下调, 且FENDRR的表达水平与胃癌病人的临床分期，肿瘤的转移及术后生存期存在明显的相关性2.癌组织中FENDRR的表达下调与组蛋白去乙酰化相关3. FENDRR的表达下调能显著促进胃癌细胞的转移能力4. FENDRR同时在mRNA及蛋白水平调控靶基因FN1的表达。,FENDRR 在胃癌组织及细胞系中低表达,F在癌组织表达下调,F在胃癌组织系表达下调,F的过表达及敲低效率,FENDRR 的表达与胃癌的侵袭深度及淋巴结转移相关,FENDRR的低表达预示着病人的预后较差,组蛋白的去乙酰化可能与 FENDRR的低表达相关,FENDRR 在胃癌细胞中功能的鉴定（结果表明对细胞的增殖影响不大）,803-NC,803-F,823-NC,823-F,MTT实验,克隆形成,细胞周期,FENDRR 可以抑制胃癌细胞的侵袭及转移,划痕实验,TRANSWELL实验,FENDRR在体内也可以抑制胃癌的侵袭及转移,FENDR