细胞工程课件

细胞工程课件第1页，共45页，2023年，2月20日，星期日1996年7月5日,世界上第一只体细胞克隆动物----克隆羊多利诞生于英国,标志着一种新的生物技术---动物体细胞克隆技术面世,也揭开细胞工程更深层次发展的序幕!第2页，共45页，2023年，2月20日，星期日细胞工程是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过细胞水平或细胞器水平上的操作，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。什么叫细胞工程？包括哪两大领域？第3页，共45页，2023年，2月20日，星期日细胞工程应用的原理和方法研究的水平研究的目的细胞生物学和分子生物学细胞整体水平或细胞器水平按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品概念植物细胞工程动物细胞工程理论基础细胞的全能性分类第4页，共45页，2023年，2月20日，星期日主要技术植物组织培养植物体细胞杂交动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体技术胚胎移植核移植植物细胞工程技术动物细胞工程技术第5页，共45页，2023年，2月20日，星期日2.1植物细胞工程2.1.1植物细胞工程的基本技术第6页，共45页，2023年，2月20日，星期日所采用技术的理论基础植物细胞工程植物组织培养植物体细胞杂交植物细胞的全能性通常采用的技术手段第7页，共45页，2023年，2月20日，星期日细胞的全能性1、定义:2、原理:3、差异:4、大小：5、潜在全能性的原因:

生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。

⑴受精卵的全能性最高⑵受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。

基因的选择性表达受精卵＞生殖细胞＞体细胞植物细胞＞动物细胞第8页，共45页，2023年，2月20日，星期日思考讨论：为什么体内细胞没有表现出全能性，而是分化成为不同的组织、器官？

基因在特定空间和时间条件下选择性表达的结果。在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的基因是不同的，合成的蛋白质也不一样，从而形成了不同的组织和器官。第9页，共45页，2023年，2月20日，星期日Schwann在1839年明确的指出：“如果具有与有机体内一样的条件时，每个细胞应该可以独立生活和发展”。德国著名植物学家G.Haberlandt在细胞学说的基础上于1902年提出了细胞全能性学说。他认为，高等植物的组织、器官可以不断分割，直到单个细胞。如果每个细胞都有植物个体一样的性质和能力，那么，可以通过植物细胞培养使单个细胞发育成为一个新个体。背景资料第10页，共45页，2023年，2月20日，星期日植物组织培养的发展简史①探索阶段（19世纪初－30年代中）德国植物生理学家HaHerlandt首次进行了植物细胞培养实验②奠基阶段（30－50年代）

1934年，White培养番茄离体根尖成功

1939年，Gautheret连续培养胡萝卜根形成层首次成功

White:烟草种间杂种的瘤组织进行组培

Nobecourt：胡萝卜进行组培以上三人是植物组织培养的奠基人③迅速发展阶段（60年代后）原生质体，花药，快繁技术迅速发展第11页，共45页，2023年，2月20日，星期日植物组织培养的发展简史1958年Steward和Reinert用胡萝卜根的愈伤组织诱导成了体细胞胚，并进而获得了完整植株。科学研究表明，处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。人工条件下实现的这一过程，就是植物组织培养。第12页，共45页，2023年，2月20日，星期日植物组织培养（实现全能性必要条件）：离体状态有一定营养物质、激素和其他外界条件（如无菌、pH等）关键词：外植体、脱分化、再分化、愈伤组织一、植物组织培养第13页，共45页，2023年，2月20日，星期日植物组织培养外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官（条件一：离体）第14页，共45页，2023年，2月20日，星期日外植体：

1）外植体灭菌消毒（根尖、茎、芽、嫩叶、种子、花粉等）

2）用消毒过的器械将外植体置于培养皿上

3）切取所需的外植体

4）将外植体接种于培养容器的培养基上整个试验在超净工作台上进行，保持无菌！外植体经过一段时间在培养基上生长后，会形成愈伤组织第15页，共45页，2023年，2月20日，星期日切取第16页，共45页，2023年，2月20日，星期日接种第17页，共45页，2023年，2月20日，星期日植物组织培养定义：含有一定营养成分，供组织培养植物生长的基质矿质元素：大量元素及微量元素有机营养成分①含N物质：包括维生素和某些有机添加物②碳源：蔗糖③琼脂：起支持作用④植物激素：生长素、细胞分裂素等第18页，共45页，2023年，2月20日，星期日愈伤组织的形成愈伤组织：

在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞（细胞排列疏松、无规则、高度液泡化的无定形的薄壁细胞）。第19页，共45页，2023年，2月20日，星期日愈伤组织的形成第20页，共45页，2023年，2月20日，星期日接种第21页，共45页，2023年，2月20日，星期日植物组织培养（试管苗的形成）第22页，共45页，2023年，2月20日，星期日第23页，共45页，2023年，2月20日，星期日培养室第24页，共45页，2023年，2月20日，星期日试管苗大规模培养第25页，共45页，2023年，2月20日，星期日移栽经过炼苗的小苗，可以和一般植物一样进行大规模栽培第26页，共45页，2023年，2月20日，星期日过程离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织根、芽植物体外植体脱分化植物激素：细胞分裂素、生长素再分化植物组织培养植物组织培养条件：

含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。第27页，共45页，2023年，2月20日，星期日请同学们讨论如何实现?第28页，共45页，2023年，2月20日，星期日于是，这些科学家试图用这两种植物的体细胞进行杂交，来实现这一美妙的设想。二、植物体细胞杂交技术这幅番茄—马铃薯图利用传统有性杂交方法能实现吗？为什么？因为不同种生物之间存在着生殖隔离，所以用传统的有性杂交方法是不可能做到这一点的。第29页，共45页，2023年，2月20日，星期日

1972年卡尔森等通过两个烟草品种之间原生质体的融合，获得了第一个体细胞杂种。1978年梅尔彻斯(Melchers)等首次获得了番茄和马铃薯的属间体细胞杂种——“Potamato”。目前，已得到栽培烟草与野生烟草、栽培大豆与野生大豆、籼稻与野生稻、籼稻与粳稻、小麦与鹅冠草等细胞杂种及其后代，获得了有价值的新品系或育种上有用的新材料。

背景资料第30页，共45页，2023年，2月20日，星期日1、定义：用两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞，且把杂种细胞培育成新的植物体的方法。2、优势（与有性杂交方法比较）：打破了不同种生物间的生殖隔离限制，大大扩展了可用于杂交的亲本组合范围。植物体细胞杂交第31页，共45页，2023年，2月20日，星期日植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合正在融合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞愈伤组织杂种植株去细胞壁纤维素酶果胶酶物理方法化学方法：离心振动电刺激聚乙二醇细胞分裂植物组织培养植物细胞融合酶解法人工诱导方法3、过程第32页，共45页，2023年，2月20日，星期日4、成果和尚未解决的问题：成果：克服不同生物远缘杂交的障碍，出现自然界没有的新品种。未解决问题：尚未让杂种植物按照人们的需要表现出亲代的优良性状杂种细胞AAAA杂种细胞BBBBAB杂种细胞AB第33页，共45页，2023年，2月20日，星期日白菜甘蓝白菜－甘蓝第34页，共45页，2023年，2月20日，星期日1.为什么“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？马铃薯—番茄没有像人们预想的那样地上长番茄、地下结马铃薯，主要原因是：生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，所以马铃薯—番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，杂交植株不能地上长番茄、地下结马铃薯就是很自然的了。第35页，共45页，2023年，2月20日，星期日2.自然界中有一种含有叶绿体的原生动物──眼虫，说明植物的细胞器同样可以在某些动物细胞中存活，请探讨：动物细胞与植物细胞之间可以实现杂交吗？如果理论上可行，请设计出具体实验方案。第36页，共45页，2023年，2月20日，星期日1.对细胞全能性的表述正确的是A.非离体植物细胞能够表现出全能性B.动物细胞融合标志着动物细胞全能性的实现C.单克隆抗体的制备原理依据是细胞的全能性D.花粉培育成单倍体是细胞全能性的体现2.植物细胞表现出全能性的必要条件是A.给予适宜的营养和外界条件B.脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件C.导入其他植物细胞的基因D.将成熟筛管的细胞核移植到去核的卵细胞内第37页，共45页，2023年，2月20日，星期日3.在生物体的所有细胞中，全能性最高的是A．卵细胞B植物花粉C．体细胞D.受精卵4.在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化为不同的组织、器官，是因为：A.细胞丧失了全能性B.基因的表达有选择性C.不同的细胞内基因不完全相同D.在个体发育的不同时期，细胞内的基因发生了变化第38页，共45页，2023年，2月20日，星期日5.植物组织培养依据的原理、培养过程的顺序及诱导的植物激素分别是①细胞的全能性②离体植物器官，组织或细胞③根，芽④生长素和细胞分裂素⑤生长素和乙烯⑥愈伤组织⑦再分化⑧脱分化⑨植物体A．①②⑧⑥⑦③⑨和④B．①②⑦⑥⑧③⑨和⑤C．①⑥②⑨⑧③⑦和⑤D．①②⑨⑧⑥⑦③和④第39页，共45页，2023年，2月20日，星期日6.植物组织培养可以形成愈伤组织，下列有关愈伤组织的叙述错误的是A.愈伤组织是离体细胞经过脱分化形成的B.形成愈伤组织的培养基不需含有机分子C.愈伤组织可以形成具有生根能力的胚状结构D.愈伤组织细胞的线粒体和核糖体可能发生碱基互补配对7.能刺激愈伤组织形成的诱导剂是A.细胞分裂素和生长素B.赤霉素C.生长素和赤霉素D.细胞分裂素和乙烯第40页，共45页，2023年，2月20日，星期日8.将胡萝卜韧皮部细胞培养成幼苗时，下列条件中不需要的是A、具有完整细胞核的细胞B、一定的营养物质和植物激素C、离体状态D、导入指定基因9.（多选）植物体细胞的组织培养常被用于保留杂种优势。因为植物组织培养的过程A.不可能发生基因突变B.生殖方式属于无性生殖C.子代不发生性状分离D.体细胞内不存在等位基因第41页，共45页，2023年，2月20日，星期日10.植物体细胞杂交的目的是A.用酶解法去掉细胞壁分离出有活力的原生质体B.以人工诱导法使两个不同植物的原生质体融合C.用植物组织培养法培养融合的原生质体得到杂种植株D.通过以上三者来完成11.在细胞工程―原生质体融合育种技术中，、其技术的重要一环是将营养细胞的细胞壁除心去，通常是采用纤维素酶的酶解破壁法处理。如将去掉了细胞壁的成熟植物细胞置于清水中，细胞最终将A.皱缩B.胀破C.呈球形D.保持原状第42页，共45页，2023年，2月20日，星期日12.(多选)有关原生质体的下列叙述中，正确的是A.组成原生质体的主要生命物质是蛋白质和核酸B.原生质体包括细胞膜、液泡膜及两者之间的原生质C.被脱掉细胞壁的植物裸露细胞是原生质体D.原生质体只能用于植物细胞工程第43页，共45页，2023年，2月20日，星期日13.2006年普通高等学校招生全国