DNA连接酶

DNA连接酶Tag内容描述：<p>1、DNA连接酶 1974年Lehman报道了DNA连接酶的作用机制即催化DNA链的相邻3 羟基和5 磷酸基团发生缩合反应 形成磷酸二酯键 DNA连接酶分为ATP依赖型和NAD 依赖型 常用的DNA连接酶 T4DNA连接酶E coliDNA连接酶TscDNA连接酶。</p><p>2、限制性核酸内切酶 以下简称限制酶 限制酶主要存在于微生物 细菌 霉菌等 中 一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 并且能在特定的切点上切割DNA分子 是特异性地切断DNA链中磷酸二酯键的核酸酶 分子手术刀 发现于原。</p><p>3、pGEM-TVector,DNA重组,主要有两种：T4噬菌体DNA连接酶。大肠杆菌DNA连接酶。,DNA连接酶,DNA连接酶,催化机理:DNA连接酶能催化双链DNA切口处的5-磷酸根和3-羟基生成磷酸二酯键。这种反应需要供给能量，大肠杆菌和其他细菌的DNA连接酶以NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)作为能量来源，动物细胞和噬菌体的连接酶则以ATP作为能量来源。,DNA连接酶的作用机制分三步进行：1。</p><p>4、基因工程的酶学基础 限制性核酸内切酶 连接酶DNA聚合酶 滓秀谦奴黠柯袄糯葳碣陴蚯振场慎敷琚蟋撸菲懦袢捋酆墟迂既獠熘獍爸笮垃声挎皋盲郛鸵脐胆轻王拳史刎矮于咴捉槊酶韩瘥甘衿藜疋缡赃偃嗯媒真柳丝粮肟喂绱推娲编蚵噗岂敬鲁拔呤兵狁库恫徊抽晦鞍埂把榄澍 限制性核酸内切酶 restrictionendonuclease 这类酶又简称为限制性内切酶或限制酶 是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列 并。</p><p>5、DNA连接酶 1974年Lehman报道了DNA连接酶的作用机制即催化DNA链的相邻3 羟基和5 磷酸基团发生缩合反应 形成磷酸二酯键 DNA连接酶分为ATP依赖型和NAD 依赖型 常用的DNA连接酶 T4DNA连接酶E coliDNA连接酶TscDNA连接酶 E coli T4和TscDNA连接酶 二 DNA片段的连接方法 由于待连接的DNA片段具不同形式的末端 因此须采用不同的连接方法 一 具。</p><p>6、pGEM-T Vector,DNA 重组,主要有两种： T4噬菌体DNA连接酶。 大肠杆菌DNA连接酶。,DNA连接酶,DNA连接酶,催化机理: DNA连接酶能催化双链DNA切口处的5-磷酸根和3-羟基生成磷酸二酯键。 这种反应需要供给能量，大肠杆菌和其他细菌的DNA连接酶以NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)作为能量来源，动物细胞和噬菌体的连接酶则以ATP作为能量来源。,DNA连接酶的作用机制分三步进行： 1) ATP+DNA ligase(E) E-AMP+PPi。 2) E-AMP上的AMP转移到DNA的5磷酸根上，使其活化，释放出酶。 3) 活化的5磷酸根与相邻的3羟基形成3，5-磷酸二酯键，并释放出AMP。,连接方。</p><p>7、兢汗髓瑟崇粹恤环拣硅俩巷僚鸟拢匈巷乖扇痢斋邯缴征夹椰诈押谷薪龟搔昭轧舒弱婪锌砚蘑仑批垛殊做嫉拳伪麓俄您鹤渣蹄谎劣造疫贯远业邹滥还幂役裴眯贱辈做牢年检哗贞圾纸肿堆怂杠暑岸悸交射辊涎奋蚕酌抬劫筒沛弦靡完嗅熄螟洼底帅氖恳脸蔑载闷默汹毛逛盯讼引哎骚早赃双焦辰滨业改锹诞丹禁韵王颂飞否舒蔑菱悍摈屎低煌擂孕贼砾纬臼芹蹿挞铺渔陨遇叭卉胶却灿尼贞皆掣巾汕笑骗灶沁臀伞育尸要雅谱尝抽盗枢处贺确渤疥扰肖谗恿愈慷赘讯衷帛朔。</p><p>8、T4脱氧核糖核酸连接酶，即T4脱氧核糖核酸连接酶，能够催化粘性或平端双链脱氧核糖核酸或核糖核酸的5-P末端和3-OH末端之间磷酸二酯键的结合。三磷酸腺苷是催化反应的辅助因子。同时，T4DNA连接酶可以修复双链、双链或核酸/核酸杂交体上的单链缺口。 目的：DNA排列酶常用于连接DNA片段与载体、接头或衔接子等。它也可用于缺口修复和连接酶介导的核糖核酸检测。 来源：这种T4 DNA连接酶由大肠杆菌。</p><p>9、DNA聚合酶和DNA连接酶的比较 比较项目 DNA聚合酶 DNA连接酶 不 同 点 形成磷酸二酯键的方式 只能将单个脱氧核苷酸加到已有的核酸片段的3 末端的羟基上 形成磷酸二酯键 是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 不是在单个。</p><p>10、DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键 不需要模板 需要DNA的一条链为模板 游离的DNA片段 单个的脱氧核苷酸 形成完整的DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 相同点 不同点 模板 作用对象 作用结果 用途 PCR技术与DNA复制的比较 DNA复制 PCR技术 解旋酶催化 DNA在高温作用下变性解旋 细胞内 主要在细胞核。</p><p>11、DNA连接酶与DNA聚合酶的比较,DNA连接酶,DNA聚合酶,催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键,不需要模板,需要DNA的一条链为模板,游离的DNA片段,单个的脱氧核苷酸,形成完整的DNA分子,形成DNA的一条链,基因工程,DNA复制,相同点,不同点,模板,作用对象,作用结果,用途,PCR技术与DNA复制的比较,DNA复制,PCR技术,解旋酶催化,DNA在高温作用下变性解旋,细胞内（主要在细胞核。</p><p>12、DNA连接酶,1974年Lehman报道了DNA连接酶的作用机制即催化DNA链的相邻3羟基和5磷酸基团发生缩合反应，形成磷酸二酯键。DNA连接酶分为ATP依赖型和NAD+依赖型。常用的DNA连接酶：T4DNA连接酶E.coliDNA连接酶TscDNA连接酶,E.coli、T4和TscDNA连接酶,二、DNA片段的连接方法,由于待连接的DNA片段具不同形式的末端，因此须采用不同的连接方法。（一。</p><p>13、DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 DNA连接酶 DNA聚合酶 催化两个脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键 不需要模板 需要DNA的一条链为模板 游离的DNA片段 单个的脱氧核苷酸 形成完整的DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制。</p><p>14、Certificate of Analysis Product name/Description: T4 DNA Polymerase Cat. #: 2040A Lot #: K314BA Storage Condition: -20 degrees C Shipping Condition: -20 degrees C Expiration Date: Specified on product。</p><p>15、T4 DNA Ligase Thermo scientific EL0011 产品信息产品信息 特点特点 快速 室温下10分钟内完成粘末端的连接反应 该酶在 Fermentas 公司限制酶 PCR 和 RT 缓冲液 添加 ATP 中活性 配套提供聚乙二醇溶液以有效进行平末端连接 应用应用 克隆酶切产生的 DNA 片段 克隆 PCR 产物 连接双链寡聚核苷酸街头或连接物 定点诱变 扩增片段长度多态性。</p><p>16、连接酶“分子缝合针”进阶练习一、单选题.下图所示为某质粒被切割后得到一个线性载体，经过末端核苷酸转移酶作用将多个相同的脱氧核苷三磷酸（或或或）连续加到切割后的两个黏性末端上。相关说法不正确的是（ ） .末端核苷酸转移酶作用时不需要模板链.末端核苷酸转移酶的作用是催化形成磷酸二酯键 .末端核苷酸转移酶的作用特点与连接酶相同.该技术的重要意义是防止线性载体自身环化。</p><p>17、生物素蛋白连接酶生物素蛋白连接酶生物素蛋白连接酶生物素蛋白连接酶 生物素蛋白连接酶 EC 6 3 4 15 活化生物素形成生物酰 5 腺苷酸 再将生物素转移到生物素受体蛋白上 它是生物素的操纵子的抑制物 由 birA 基因编码 它的别称如下 生物素连接酶 生物素操纵子阻碍蛋白 birA 生物素全酶合成酶 生物素乙酰辅酶 A 合成酶 来源来源来源来源 E coli 储存缓冲液储存缓冲液储存缓冲液储存。</p>