芦荟苷的提取分离研究VIP

化工学院09 级制药一班马星200914132011/11/4芦荟中提取芦荟苷一 、 芦 荟 简 介芦荟属百合科多年生常绿肉质植物，是大自然赐予人类的仙丹草。这种植物颇受大众喜爱，主要因其易于栽种，为花叶兼备的观赏植物。更兼含有多种有效成分，具有极高的药用价值，显得倍受研究者们的青睐。1、种属名称科中文名：独尾草科 Asphodelaceae 属中文名：芦荟属 (Aloe) 别 名：卢会、讷会、象胆、奴会、劳伟英 文 名：Aloes现存芦荟有三百多个品种，被广为利用的主要有库拉索芦荟( A loe vera L ) 、木立芦荟( A . arborescens ) 、好望角芦荟( A . ferox Mill ) 、开普芦荟( A . af ricana ) ，被民间少量应用的有皂质芦荟( A . saponaria ) 、中华芦荟( A . varavia ) 、不夜城芦荟( A . nobilis )等。2、产地芦荟原产于地中海、非洲，为独尾草科多年生草本植物芦荟本是热带植物，生性畏寒，但也好种活。据考证的野生芦荟品种 300 多种，主要分布于非洲等地，后传入美洲。3、 植 物 形 态一 般 芦 荟 为 常 绿 、 多 肉 质 的 草 本 植 物 。 叶 簇 生 ， 呈 座 状 或 生 于 茎 顶 ， 叶常 披 针 形 或 叶 短 宽 ， 边 缘 有 尖 齿 状 刺 。 花 序 为 伞 形 、 总 状 、 穗 状 、 圆 锥 形 等 ，色 呈 红 、 黄 或 具 赤 色 斑 点 ， 花 瓣 六 片 、 雌 蕊 六 枚 。 花 被 基 部 多 连 合 成 筒 状 。4、 包 含 成 分芦 荟 含 有 多 化 学 成 分 ， 蒽 醌 类 化 合 物 是 芦 荟 有 机 活 性 成 分 中 的 最 主 要 部分 。 主 要 有 芦 荟 大 黄 素 （ Aloeemodin） 、 芦 荟 大 黄 素 甙 （ Aloin, Barbaloin） 芦 荟 大 黄 素 甙 的 异 构 体 异 芦 荟 大 黄 素 苷 （ Isobarbaloin） 、 高塔 尔 芦 荟 素 （ Homonataloin） 、 大 黄 酚 （ Chrysophanol） 、 大 黄 酚 葡 萄 糖 苷（ Chrysophanol glucoside） 、 蒽 酚 （ Anthranol） 等 化 合 物 。5、 药 用 价 值芦 荟 作 为 一 种 天 然 药 用 植 物 ,已 经 拥 有 几 千 年 的 发 展 历 史 。 尤 其 在 最 近几 十 年 ,国 外 对 芦 荟 的 研 究 和 开 发 速 度 大 大 加 快 。 其 应 用 范 围 不 仅 局 限 于 初级 的 护 肤 保 湿 化 妆 品 、 洗 涤 用 品 、 保 健 食 品 、 饮 料 、 茶 等 范 围 ,而 且 已 涉 入到 医 学 领 域 。 对 人 体 免 疫 力 的 提 高 、 各 种 胃 肠 消 化 道 溃 疡 、 便 秘 、 糖 尿 病 、脑 心 血 管 疾 病 、 妇 科 病 、 皮 肤 病 及 一 些 疑 难 病 症 都 有 明 显 疗 效 。 近 几 年 ,科学 家 又 发 现 其 具 有 抗 癌 作 用 而 且 对 艾 滋 病 有 一 定 的 疗 效 ,国 际 医 学 论 文 已 发表 很 多 。二 、 芦 荟 苷 简 介中 文 名 :芦 荟 苷别 名 ： 芦 荟 素 、 芦 荟 大 黄 素 苷 、 芦 荟 甙化 学 名 ： Aloin； Barbaloin；1,8-Dihydroxy-10-(beta-D-glucopyranosyl)-3-(hydroxymethyl)-9(10H)-anthracenone； 10-beta-D-Glucopyranosyl-1,8-dihydroxy-3-(hydroxymethyl)-9(10H)-anthracenone理 化 性 质 ：芦 荟 苷 为 黄 色 或 淡 黄 色 结 晶 粉 末 。熔 点 :148 149 (乙 醇 )， 一 水 合 物 熔 点 70 80 。 D+21(水 ), D-8.3。略 带 沉 香 气 味 ,味 苦 ,易 溶 于 吡 啶 ,溶 于 冰 醋 酸 ,甲 酸 ,丙 酮 ,醋 酸 甲 酯 ,以及 乙 醇 等 ， 易 溶 于 水 。化 学 式 ： C21H22O9分子量：418.40芦 荟 大 黄 素 甙 是 芦 荟 最 基 本 的 成 分 之 一 ,它在 芦 荟 中 大 量 存 在 ,不 很 苦 ,有 致 泻 作 用 ,但 致泻 性 较 弱 ,只 有 当 芦 荟 大 黄 素 苷 被 氧 化 后 ,即转 化 为 芦 荟 大 黄 素 时 ,不 但 其 苦 味 增 加 ,而 且致 泻 功 能 也 明 显 增 强 。 芦 荟 苷 是 在 人 体 内 寄生 菌 作 用 下 ， 水 解 为 芦 荟 大 黄 素 ， 这 种 芦 荟大 黄 素 ， 刺 激 肠 壁 蠕 动 ， 而 对 小 肠 无 影 响 ,同 时 由于 透 压 改 变 ， 有 利 于 肠 道 内 废 物 排 除 ， 从 而 达 到 刺 激 性 缓 泻 ， 这 种 刺 激 泻 下作 用 对 便 秘 和 痔 疮 有 特 殊 疗 效 。三 、 芦 荟 中 芦 荟 苷 的 提 取常 用 的 提 取 方 法 有 两 相 水 解 法 、 亲 脂 性 有 机 溶 剂 提 取 法 、 超 临 界 萃 取 法 等 。总 体 思 路 如 下 ：芦 荟 风 干 粉 碎 氯 仿 回 流 热 过 滤 残 渣 风 干 95%乙 醇 回 流 洗 涤 成 盐 加 碱 （ 碱 溶 酸 沉 ） 沉 淀 蒽 醌 化 合 物 分 离 芦 荟 苷1、 芦 荟 苷 的 检 验（ 1） Feigl 反 应 ： 取 精 制 芦 荟 苷 的 水 溶 液 1 滴 ,加 入 25%碳 酸 钠 水 溶 液 、 4%甲 醛 溶 液 及 5%邻 二 硝 基 苯 溶 液 各 1 滴 ,混 合 后 置 水 浴 上 加 热 ,于 1-4 min 内 产生 显 著 紫 色 。（ 2） Borntragers 反 应 ： 取 精 制 芦 荟 苷 晶 体 ,加 10%硫 酸 溶 液 5 mL,置 水 浴 上加 热 2-10min,放 冷 后 ,加 乙 醚 2mL 振 摇 ,静 置 后 分 取 醚 层 溶 液 ,加 入 5%氢 氧 化钠 水 溶 液 1mL,振 摇 ,醚 层 由 黄 色 褪 为 无 色 ,水 层 显 红 色 。芦荟苷（ 3） 硼 砂 反 应 ： 取 芦 荟 苷 水 溶 液 5mL,加 硼 砂 0.2g,加 热 溶 解 ,取 溶 液 数 滴 ,加 入 蒸 馏 水 10mL,水 中 可 见 绿 色 荧 光 。（ 4） 薄 层 色 谱 检 验 ： 取 样 品 粉 末 0.5g， 加 甲 醇 20ml， 置 水 浴 加 热 到 沸 ， 振摇 数 分 钟 ， 滤 过 ， 滤 液 作 供 试 液 ； 另 取 芦 荟 苷 加 甲 醇 制 成 每 1ml 含 5mg 的 溶液 ， 作 对 照 品 溶 液 ， 分 别 点 样 于 同 一 硅 胶 G 薄 板 上 ， 以 醋 酸 乙 酯 -甲 醇 -水（ 100： 17： 13） 展 开 ， 取 出 晾 干 ， 喷 以 10%氢 氧 化 钾 醇 溶 液 ， 置 紫 色 光 灯（ 365nm） 下 检 视 ， 供 试 液 色 谱 在 与 对 照 品 色 谱 相 应 的 位 置 上 ， 显 相 同 颜 色 的荧 光 斑 点 。2、 芦 荟 苷 的 提 取本 次 试 验 介 绍 使 用 连 续 回 流 法 提 取 芦 荟 苷 ， 通 过 此 法 提 取 的 产 物 ， 数 量有 限 ， 只 能 在 实 验 室 进 行 小 规 模 的 提 取 ， 虽 然 过 程 稍 显 复 杂 ， 但 提 取 物 含 量高 ， 便 于 研 究 。预 处 理 ： 芦 荟 叶 片 若 干 洗 净 切 片 风 干 粉 碎 粉 末 用 5%醋 酸 酸化 表 面 皿 风 干工 艺 流 程 ：芦 荟 粗 粉 三 氯 甲 烷 回 流 2h震 荡 ， 热 过 滤滤 渣 滤 液挥 发 三 氯 化 铁95%乙 醇 水 浴 回 流 4h， 热 过 滤残 渣 滤 液5%氢 氧 化 钾 溶 液调 节 pH 为 9-10静 置 30min 后 过 滤沉 淀 滤 液95%乙 醇 洗 涤 3 次洗 涤 液减 压 浓 缩蒽 醌 苷 的 钾 盐95%乙 醇 ， 冰 醋 酸 调 节 pH 至 中 性水 浴 加 热 ， 热 抽 虑沉 淀 滤 液浓 缩醋 酸 铅 试 液出 现 沉 淀 ， 过 滤沉 淀 滤 液蒸 馏 水 洗 涤 ， 过 滤残 渣 滤 液1%氢 氧 化 钠 调 pH 至 中 性重 结 晶冰 浴 滤 过粗 芦 荟 苷 晶 体具 体 说 明 ：将 风 干 后 的 芦 荟 粉 末 ， 加 三 氯 甲 烷 回 流 提 取 2h， 振 摇 ， 趁 热 过 滤 ， 残 渣上 三 氯 甲 烷 挥 干 。 将 残 渣 置 于 索 式 提 取 器 中 ， 用 95%乙 醇 水 浴 回 流 提 取 4 h， 趁 热 过 滤 ， 滤 纸 用 95%乙 醇 洗 涤 3 次 ， 弃 去 滤 渣 ， 向 滤 液 中 缓 慢 加 入 5%氢 氧 化 钾 溶 液 ， 用 玻 璃 棒 搅 拌 ， 同 时 调 节 pH 值 至 910,静 置 30 min 后 滤 过 ，沉 淀 以 95%乙 醇 洗 涤 3 次 ， 合 并 洗 液 ， 置 真 空 干 燥 箱 中 ， 以 0. 8MPa、 6070 减 压 浓 缩 至 干 ， 得 总 蒽 醌 苷 的 钾 盐 。再 加 入 95%乙 醇 ， 使 沉 淀 悬 浮 于 乙 醇 中 ， 缓 慢 加 入 冰 醋 酸 ， 调 节 pH 值 至中 性 ， 水 浴 加 热 ,趁 热 抽 滤 ， 滤 液 浓 缩 ， 浓 缩 液 加 醋 酸 铅 试 液 ， 振 摇 混 匀 ， 待沉 淀 不 再 继 续 出 现 ， 滤 过 ， 沉 淀 以 蒸 馏 水 冲 洗 3 次 ， 过 滤 ， 滤 液 用 1%氢 氧 化钠 调 pH 值 至 中 性 ， 重 结 晶 ， 冰 浴 滤 过 ， 所 得 晶 体 为 粗 制 芦 荟 苷 。3、 精 制将 所 得 晶 体 溶 解 于 70%甲 醇 中 ,溶 液 上 Sephadex LH220 凝 胶 柱 层 析 ,以70%甲 醇 洗 脱 ,分 段 收 集 。 所 洗 脱 依 次 得 到 :芦 荟 大 黄 素 双 葡 萄 糖 苷 、 大 黄 酚 葡萄 糖 苷 、 芦 荟 苷 。 后 段 收 集 淡 黄 色 结 晶 ,减 压 浓 缩 至 干 ,即 得 到 精 制 芦 荟 苷 结晶 。四 、 芦 荟 苷 的 结 构 分 析1、 定 性 分 析（ 1） 紫 外 光 谱 检 测从 芦 荟 苷 紫 外 光 谱 图 可 知 样 品 芦 荟 苷 在 297nm、 356nm 处 有 吸 收 峰 与 文 献 【 1】基 本 一 致 。（ 2） 阴 性 干 扰 实 验分 别 取 阴 性 对 照 品 溶 液 、 芦 荟 苷 对 照 品 溶 液 、 芦 荟 苷 样 品 溶 液 各 10 L， 注 入 液 相 色 谱 仪 测 定 。 结 果 阴 性 对 照 品 溶 液 在 乙 醇 芦 荟 苷 色 谱 峰 相 应位 置 上 无 吸 收 峰 出 现 ， 表 明 阴 性 对 照 无 干 扰 。芦荟苷紫外光谱图2、 定 量 分 析采 用 HPLC 法 对 芦 荟 苷 进 行 含 量 测 定 ， 色 谱 条 件 为 ： 流 动 相 甲 醇 水 冰 醋 酸 （ 42:58:0.5） ， 流 速 1mL min， 检 测 波 长 359nm， 样 品 溶 液 过 0.45 L 微 孔 滤 膜 ， 进 样 10 L， 用 HPLC 法 测 定 峰 面 积 ， 外 标 一 点 法 计 算 各个 因 素 条 件 下 的 提 取 芦 荟 苷 的 百 分 含 量 （ 提 取 率 ） 。将 粗 提 取 晶 体 溶 解 于 70%甲 醇 中 ,溶 液 上 Sephadex LH220 凝 胶 柱 层 析 ,以 70%甲 醇 洗 脱 ,分 段 收 集 。 后 段 淡 黄 色 晶 体 即 为 芦 荟 苷 ， 将 该 色 带 刮 下 来 ，阴性对照品溶液芦荟苷对照品溶液芦荟苷样品溶液置 三 角 瓶 中 ， 用 乙 醇 洗 至 硅 胶 粉 无 色 为 止 ， 然 后 将 乙 醇 液 浓 缩 至 一 定 体 积 ，备 用 。3、 单 因 素 对 提 取 率 的 影 响（ 1） 乙 醇 浓 度 对 提 取 率 的 影 响选 择 适 当 的 溶 剂 对 中 药 有 效 成 分 的 提 取 是 很 重 要 的 ， 最 常 用 的 溶 剂 是 水和 乙 醇 。 在 料 液 比 为 1:10， 提 取 1 次 ， 提 取 时 间 60min， 考 察 不 同 乙 醇 浓 度对 芦 荟 苷 的 提 取 率 影 响 ， 结 果 如 图由 此 可 知 ， 芦 荟 苷 的 提 取 率 都 随 乙 醇 浓 度 的 升 高 而 有 所 增 加 。 在 50 乙醇 浓 度 时 达 到 最 高 ， 但 在 40 60 内 变 化 不 大 ， 乙 醇 浓 度 60 70 时提 取 率 下 降 较 快 ， 因 此 选 择 乙 醇 浓 度 为 40 60 。（ 2） 料 液 比 对 提 取 效 果 的 影 响固 定 乙 醇 浓 度 50 ， 提 取 1 次 ， 提 取 时 间 60min， 考 察 不 同 料 液 比 对 芦荟 苷 提 取 率 的 影 响 ， 结 果 如 图随