GB 5009.86-2016 食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定

016 前 言本标准代替003蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定(荧光法和2,4、003食品中还原型抗坏血酸的测定和986水果、蔬菜维生素,6。本标准与003相比,主要变化如下:标准名称修改为“食品安全国家标准 食品中抗坏血酸的测定”;扩大了方法的适用范围;增加了高效液相色谱法及相关方法的定量限;删除了2,4增加了2,6按照015对原标准的结构进行了修改。0161 食品安全国家标准食品中抗坏血酸的测定1 范围本标准规定了高效液相色谱法、荧光法、2,6标准第一法适用于乳粉、谷物、蔬菜、水果及其制品、肉制品、维生素类补充剂、果冻、胶基糖果、八宝粥、葡萄酒中的L(+)(+)二法适用于乳粉、蔬菜、水果及其制品中L(+)三法适用于水果、蔬菜及其制品中L(+) 坏血酸:一种具有抗氧化性质的有机化合物。又称为“维生素C”,是人体必需的营养素之一。(+)式右旋光抗坏血酸。具有强还原性,对人体具有生物活性。(+)称异抗坏血酸。具有强还原性,但对人体基本无生物活性。(+)(+)(+)常称为脱氢抗坏血酸。(+)试样中L(+)一法 高效液相色谱法3 原理试样中的抗坏血酸用偏磷酸溶解超声提取后,以离子对试剂为流动相,经反相色谱柱分离,其中L(+)长245定;试样中的L(+)紫外检测器(波长245定L(+)减去原样品中测得的L(+)色谱峰的保留时间定性,外标法定量。4 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为6682规定的一级水。磷酸(n:含量(以38%。酸三钠(2酸二氢钾(0162 酸(85%。3优级纯。六烷基三甲基溴化铵(色谱纯。醇(色谱纯。磷酸溶液(200g/L):称取200g(磷酸(溶于水并稀释至1L,此溶液保存于4的环境下可保存一个月。磷酸溶液(20g/L):量取50偏磷酸溶液,用水稀释至500 磷酸三钠溶液(100g/L):称取100g(酸三钠,溶于水并稀释至1L。0g/L):称取4于水并稀释至100用时配制。(+)6纯度99%。(+)抗坏血酸)标准品(纯度99%。(+)准确称取L(+)用20g/贮备液在28避光条件下可保存一周。(+)准确称取D(+)用20g/贮备液在28避光条件下可保存一周。坏血酸混合标准系列工作液:分别吸取L(+)20g/准系列工作液中L(+)用时配制。5 相色谱仪:配有二极管阵列检测器或紫外检测器。5.2 平:声波清洗器。心机:转速4000r/质机。膜:荡器。6 分析步骤整个检测过程尽可能在避光条件下进行。体或固体粉末样品:混合均匀后,应立即用于检测。0163 果、蔬菜及其制品或其他固体样品:取100的偏磷酸溶液,经均质机均质并混合均匀后,应立即测定。g(合均匀的固体试样或匀浆试样,或吸取20所取试样含L(+)5020g/)将试样转移至50摇溶解并定容。摇匀,全部转移至50声提取54000r/液待测由此试液可同时分别测定试样中L(+)样溶液的还原准确吸取20入10的),用100g/200次/水将试液全部转移至50定容至刻度。此试液可测定试样中包括脱氢型的L(+)若试样含有增稠剂,可准确吸取4准确加入1谱柱:长250径5m,或同等性能的色谱柱。测器:二极管阵列检测器或紫外检测器。动相:A:水溶解并定容至1L(B:100%甲醇。按AB=982混合,声脱气。速: 检测波长:245 柱 温:25。样量:20L。准曲线制作分别对抗坏血酸混合标准系列工作溶液进行测定,以L(+)D(+)准溶液的质量浓度(g/横坐标,L(+)D(+)峰高或峰面积为纵坐标,绘制标准曲线或计算回归方程。L(+)(+)样溶液的测定对试样溶液进行测定,根据标准曲线得到测定液中L(+)D(+)浓度(g/白试验空白试验系指除不加试样外,采用完全相同的分析步骤、试剂和用量,进行平行操作。7 分析结果的表述试样中L(+)D(+)含量和L(+)0164 按式(1)计算:X=(000FK100(1)式中:X 试样中L(+)D(+)(+)含量,单位为毫克每百克(00g);样液中L(+)D(+)质量浓度,单位为微克每毫升(g/样品空白液中L(+)D(+)质量浓度,单位为微克每毫升(g/V试样的最后定容体积,单位为毫升(m实际检测试样质量,单位克(g);1000换算系数(由g/F稀释倍数(K00换算系数(由mg/00计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9 其他固体样品取样量为2(+)00g,00g。液体样品取样量为10g(或10,L(+)00g(0000g(00第二法 荧光法10 原理试样中L(+)邻苯二胺(应生成有荧光的喹唔啉(其荧光强度与L(+)此测定试样中L(+):L(+)此排除试样中荧光杂质产生的干扰。11 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为6682规定的三级水。磷酸(n:含量(以38%。乙酸(浓度约为30%。0165 酸(浓度约为98%。酸钠(酸(苯二胺(里酚蓝(性炭粉。磷酸取15入40温,搅拌,使之逐渐溶解,冷却后加水至5004冰箱可保存7d10d。酸溶液():心加入水中,再加水稀释至1000磷酸取15入40硫酸溶液至溶解,并稀释至500酸钠溶液(500g/L):称取500水至1000酸取3500g/用时配制。苯二胺溶液(200):称取20水溶解并稀释至100用时配制。性活性炭:称取约2005m177m),加入1+9),加热回流1h2h,过滤,用水洗至滤液中无铁离子为止,置于110120烘箱中干燥10h,备用。检验铁离子方法:利用普鲁士蓝反应。将20g/酸等量混合,将上述洗出滤液滴入,如有铁离子则产生蓝色沉淀。里酚蓝指示剂溶液(玻璃研钵中研磨至溶解,用水稀释至250变色范围:准品L(+)6纯度99%。(+)称取L(+)用偏磷酸贮备液在28避光条件下可保存一周。(+)准确吸取L(+)偏磷酸用时配制。12 仪器和设备荧光分光光度计:具有激发波长338有13 分析步骤整个检测过程应在避光条件下进行。液的制备称取约100g(样,加100入捣碎机内打成匀浆,0166 指示剂测试匀浆的酸碱度。如呈红色,即称取适量匀浆用偏磷酸呈黄色或蓝色,则称取适量匀浆用偏磷酸浆的取用量根据试样中抗坏血酸的含量而定。当试样液中抗坏血酸含量在40g/00g/般称取20g(浆,用相应溶液稀释至100滤,滤液备用。化处理:分别准确吸取50入2力振摇1滤,弃去最初数毫升滤液,分别收集其余全部滤液,即为试样氧化液和标准氧化液,待测定。别准确吸取10为“试样液”和“试样空白液”。别准确吸取10为“标准液”和“标准空白液”。“试样空白液”和“标准空白液”中各加5合摇动15水稀释至1004冰箱中放置2h3h,取出待测。“试样液”和“标准液”中各加5乙酸钠溶液,用水稀释至100测。准曲线的制备准确吸取上述“标准液”L(+)别置于10准确吸取“标准空白液”2暗室迅速向各管中加入5摇混合,在室温下反应35激发波长338射波长420“标准液”系列荧光强度分别减去“标准空白液”荧光强度的差值为纵坐标,对应的L(+)制标准曲线或计算直线回归方程。样测定分别准确吸取2样液”和“试样空白液”于10暗室迅速向各管中加入5摇混合,在室温下反应35激发波长338射波长420“试样液”荧光强度减去“试样空白液”的荧光强度的差值于标准曲线上查得或回归方程计算测定试样溶液中L(+)4 结果计算试样中L(+)果以毫克每百克表示,按式(2)计算:X=c1001000(2)式中:X 试样中L(+)位为毫克每百克(00g);c由标准曲线查得或回归方程计算的进样液中L(+)位为微克每毫升(g/V荧光反应所用试样体积,单位为毫升(m实际检测试样质量,单位克(g);F试样溶液的稀释倍数;100换算系数;1000换算系数。计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。0167 15 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。16 样品取样量为10(+)00g。 第三法 2,6理用蓝色的碱性染料2,6),6到达滴定终点时,多余的2,62,6)8 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为6682规定的三级水。磷酸(n:含量(以38%。酸(酸氢钠(,6,612陶土(或高岭土):对抗坏血酸无吸附性。磷酸溶液(20g/L):称取20水溶解并定容至1L。酸溶液(20g/L):称取20水溶解并定容至1L。,6,6液:称取碳酸氢钠52后称取2,6却并用水定容至250滤至棕色瓶内,于48环境中保存。每次使用前,用标准抗坏血酸溶液标定其滴定度。标定方法:准确吸取1入10匀,用2,6持15时另取10,6)计算:T=c(3)式中:T2,6每毫升2,6位为毫克每毫升(mg/0168 c抗坏血酸标准溶液的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/V吸取抗坏血酸标准溶液的体积,单位为毫升(滴定抗坏血酸标准溶液所消耗2,6位为毫升(滴定空白所消耗2,6位为毫升(准品L(+)6纯度99%。准溶液的配制L(+)称取100(+)于偏磷酸溶液或草酸溶液并定容至100贮备液在28避光条件下可保存一周。19 测定整个检测过程应在避光条件下进行。液制备:称取具有代表性样品的可食部分100g,放入粉碎机中,加入100速捣成匀浆。准确称取10g40烧杯中,用偏磷酸溶液或草酸溶液将样品转移至100稀释至刻度,摇匀后过滤。若滤液有颜色,定:准确吸取10标定过的2,6至溶液呈粉红色15时做空白试验。20 结果计算试样中L(+)