实验七体外抑菌实验

动物机能学实验 2编者：陈小军实验内容实验一 影响药物作用的因素实验二 药物代谢动力学实验实验三 处方与药物的配伍禁忌实验四 中毒与解救试验实验五 药物对离体肠的影响实验六 抗微生物药物的体外抑菌实验实验七 生物碱的提取及其药敏实验实验八 药物对离体心脏的影响实验六、抗菌药物的体外抑菌实验 【 实验目的 】 掌握药敏试验的方法，了解药物对常见菌的作用。下一张 主 页 退 出 上一张 耐 药 性抗 菌 作 用防治作用与不良反应药 动学 过 程抗 病 力致 病 力【 实验原理 】下一张 主 页 退 出 上一张 【 基本原理 】u 抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物的 能力 。u两种测定方法： 体外与体内（化学治疗实验） ；u评价指标 ：（ 1）最低抑菌浓度（ MIC）： 能够抑制培养基中细菌生长的最低浓度。 （ 2）最低杀菌浓度（ MBC）：能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。意义： 体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。 鉴定新药是否具有抗菌活性。下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 【 试剂与器材 】 细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、平皿等。 下一张 主 页 退 出 上一张 【 实验步骤 】一、试管二倍稀释法 取灭菌小试管 10支，按照 1至 10编号，排列于试管架上。按照无菌操作，从第一管到第 10管，分别加入牛肉膏汤 1ml。 用吸管吸取 256/ml的青霉素溶液 1ml放入第一管，并反复吹匀；接着从第一管吸出 1ml放入第二管同样吹匀后吸出 1ml放入第三管，依次逐管进行稀释到第管，第 10管不加青霉素液，作细菌对照组，第管只加药物，不加菌液，作为药物对照组。下一张 主 页 退 出 上一张 0.500.50.50.50.50.50.50.50.5葡萄球菌液 （ ml）弃 1111111111青霉素（ ml）1111111111牛肉膏汤（ ml） 10987654321试管号 下一张 主 页 退 出 上一张 ，管各加入培养 18 h并用牛肉膏汤稀释至 5X 的金黄色葡萄球菌菌液 ml。放入 37 培养箱内培养 24h后，取出观察细菌生长情况。 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌的最低抑制浓度（ MIC）。 结果记录于下表： 下一张 主 页 退 出 上一张 管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10稀 释 倍数 1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 0稀 释浓 度 (u/ml) 128 64 32 16 8 4 2 1 0.5 金色葡萄球菌 记录实验结果下一张 主 页 退 出 上一张 二、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每ml约含 3亿个细菌），注意不宜蘸取过多，以刚浸湿整个棉签为度，轻轻地从四个不同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方法，也可制作大肠杆菌平板备用。 下一张 主 页 退 出 上一张 二、纸片法 取已经制备好的 6种药敏片：青霉素20000/ml、 链霉素、多西环素、 10磺胺二甲嘧啶钠， 10恩诺沙星，碘酒 2.5 ，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区域。为了位置间隔准确，最好事先在 平皿底用蜡笔作上记号 。 将培养皿置 37 培养 24h， 观察纸片周围有无抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌效力。样例如下图： 下一张 主 页 退 出 上一张 下一张 主 页 退 出 上一张 细 菌 青霉素 链 霉素 磺氨 嘧啶钠 四 环 素金葡菌 链 球菌 大 肠 杆菌 实验结果记录：抑菌直径（ mm）下一张 主 页 退 出 上一张 药物沙门氏杆菌【 注意事项 】1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；2.用试管二倍稀释法测 MIC值，稀释时注意稀释的顺序； 3. 药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈出现交叉。4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，结果记录时将本组结果综合。下一张 主 页 退 出