丁酸梭菌抑菌实验

丁酸梭菌抑菌实验丁酸梭菌，又名酪酸梭菌，丁酸梭状芽孢杆菌，是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌。丁酸梭菌代谢产物的突出特点就是丁酸、B 族维生素以及叶酸含量高。大量研究表明，丁酸梭菌具有极强的整肠作用，它能够通过抑制致病菌的生长繁殖从而调节肠道的微生态平衡，预防和治疗腹泻、肠炎等疾病。1 实验材料共培养用液体培养基;LB 培养基2 实验方法2.1 丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌的抑制作用霍乱沙门氏菌种子培养：取平板活化好的菌种转接到 LB 液体三角瓶中，装液量 25 mL/100 mL， 37，150 r/min 培养 12-24h，取培养菌液测活菌数和 pH 值。丁酸梭菌单独培养：取丁酸梭菌菌粉 0.1 g 接种到装量为 25 mL/30mL 的细菌培养瓶中，置于 37静止恒温培养 24 h 左右。(可按此比例扩大培养体积，最低比例为 0.1 g：25 mL)丁酸梭菌和霍乱沙门氏菌混合培养：活化好的丁酸梭菌培养液 5 mL 接种到装液量为 20 mL/30mL 的细菌培养瓶中，再把培养好的霍乱沙门氏菌菌液 1 mL 同时接入该共培养液中，37恒温静止培养。对照组为向同样的共培养液体培养基中(装液量为 20 mL/30 mL)接种霍乱沙门氏菌菌液 1 mL，37恒温静止培养。分别在 16 和24 h 测 pH 值及沙门氏菌活菌数。计数采用平板涂布法。选择 23 个适宜梯度稀释液，吸取 100 L 涂布平板，倒置于严格厌氧培养箱或严格厌氧培养袋中，37培养 1836 h 后计数。每个梯度做两个平行，每个平板的菌落数在 30300 范围内有效。2.2 丁酸梭菌对肠出血性大肠杆菌、魏氏梭菌的抑制作用实验方法同上，魏氏梭菌种子液为严格厌氧，应采用共培养液体培养基。3 实验结果3.1 对霍乱沙门氏菌的抑制结果丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌表现出非常强的抑制作用，24h 活菌数从单独培养时2.0108CFUmL-1 减少到 1.2103CFUmL-1。3.2 对肠出血性大肠杆菌的抑制结果混合培养 16h，肠出血性大肠杆菌活菌数从单独培养时 3.5108CFUmL-1 减少到 7106CFUmL-1，24 h 活菌数减少到 0.4106CFUmL-1，pH 从 6.8 下降至4.6，呈现良好抑制作用。3.3 对魏氏梭菌的抑制作用混合培养后，魏氏梭菌活菌数从单独培养时的 1108 CFUmL-1 减少到1105CFUmL-1， pH 值从 6.8 下降到 4.5，表现出良好的抑制作用。4 小结(1)丁酸梭菌为严格厌氧菌，产氢气。液体培养基中加入厌氧指示剂，粉红色表明培养基上层有氧;培养一段时候后液体表面有气泡，为正常现象。(2)丁酸梭菌平板形态如下。(3)丁酸梭菌对霍乱沙门氏菌、肠出血性大肠杆菌和魏氏梭菌均有显著的抑制作用，可将肠出血性大肠杆菌和魏氏梭菌细菌含量控制在发病浓度之下，防止发病。尤其是对霍乱沙门氏菌抑制作用更强，可以达到净化霍乱沙门氏菌的作用。丁酸梭菌在体内的定植产生大量的丁酸、乙酸、乳酸等短链脂肪酸，以及 B 族维生素、叶酸和一些消化酶类，促进肠道内有益菌群如双歧杆菌等乳酸菌的增殖，抑制魏氏梭菌、肠出血性大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的繁殖，减少氨、胺、吲哚等肠道毒素的产生及对肠粘膜的毒害，使肠道内水分潴留