柱色谱分离实验

柱 色 谱Column Chromatography了 解：1. 柱色谱法分离有机物的原理。2固定相和流动相的选择原则。掌 握：1. 色谱柱的填充方法。2柱色谱分离的基本操作。一、实 验 目 的色 谱 法 简 介色谱法亦称色层法，层析法等，是 分离，纯化和鉴定 有机化合物的重要方法之一，还可 定量分析。 色谱法分类固定相、流动相的物理状态操作形式分离原理液 固色谱法气 固色谱法气 液色谱法液 液色谱法柱色谱法（ column chromatography）薄层色谱法（ TLC）纸色谱法（ paper chromatography）气相色谱（ GC）高效液相色谱（ HPLC）吸附色谱法分配色谱法离子交换色谱法排阻色谱操作形式柱色谱法（ ）二、实 验 原 理柱色谱分离示意图混合物吸附剂 (固定相 )洗脱剂 (流动相 )二、实 验 原 理二、实 验 原 理吸附剂的 性质： 均匀、表面积大、不反应、吸附能力不同化合物的结构 ： 化合物的吸附性和它们的极性成正比洗脱剂的极性 ： 溶解度适中、不反应、易获取回收影响分离效果主要因素和和在氧化铝柱子上若分离下列各组混合物，哪一个组分先被洗脱下来？三、实 验 内 容装柱 加样 洗脱 收集 鉴定干法： 10g 硅胶+乙醇先用乙醇后用水操作组分颜色组分颜色1mL样品加样操作0.5mL2乙醇洗涤柱色谱操作 ：实 验 步 骤 :吸附剂装填紧密，排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面，无断层。u 干法装柱u 湿法装柱装 柱三、实 验 内 容 装柱时应该注意 均匀 ，不能有 气泡，裂缝， 否则样品可能顺缝隙流动而不吸附，影响样品的分离，应用质软的物体如 吸耳球等轻轻敲击柱身，促使吸附剂装填紧密，排除气泡。最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面样品为液体，可直接加样；样品为固体，可选择合适溶剂溶解为液体再加样。加样时，要沿管壁慢慢加入至柱顶部，勿使 样品搅动吸附剂表面。 加 样三、实 验 内 容洗 脱在柱顶不断加入洗脱剂，使洗脱剂 永远保持有适当的量，不要让洗脱剂表面流干 ，使流动相流速适当。三、实 验 内 容洗脱 时应注意：（ 1）向柱内加入 95%乙醇 溶液洗脱（可以通过注射器沿管壁或安装滴液漏斗）在恒压或加压条件下进行洗脱。控制流出速度 1滴 /秒。逐渐出现色层带分离。（ 2）第一色层带到达色谱柱底部时，立即用锥形瓶收集第一色层的溶液，直到其完全被洗出。 【注意】洗脱时切勿使溶剂流干！（ 3）然后，改用 水 溶液作为洗脱剂，当第二色层带到达色谱柱底部时，立即收集第二色层的的溶液，直到其完全被洗出。（ 4）用量筒分别量取所分离出来的两种溶液的体积后，倒入指定的回收瓶中。（ 5）分离结束后，应先让溶剂尽量流干，然后倒置，用吸耳球从活塞 向管内挤压空气，将吸附剂从柱顶挤压出。使用过的吸附剂倒入垃圾桶里。试样有色 ，在层析柱上可直接观察。洗脱后分别收集各个组分。收 集试样无色， 收集洗脱液时，多采用等份收集，每份洗脱剂的体积随所用吸附剂的量及试样的分离情况而定。收集的每份洗脱剂的体积越小，分离效果越好。三、实 验 内 容三、