医学精品课件非发酵菌及检验

非发酵菌 及检验 非发酵菌及检验 非发酵菌 （ nonfermenters） 是指一群 不能利用或仅以氧化形式利用糖类 , 生化 特性十分相近的革兰阴性无芽胞杆菌。 括多个菌属，主要有：假单胞菌属 不动杆菌属 产碱杆菌属 莫拉菌属 黄杆菌属 分群依据： 1. 氧化酶试验阳性 （不动杆菌及个别假 单胞菌为阴性） 2. 葡萄糖氧化 /发酵（ O/F） ： 应开管产 酸，闭管不变。 3. 动力： 大多为专性需氧菌，半固体上 动力不明显（动力观察应在 30 或室温 12 24小时培养物悬滴法为准或以鞭毛染色鉴别 ） 4. 麦康凯培养基上生长 ：可分群 见表 菌 属 氧化酶 葡萄糖 O/F 悬滴动力 触媒 硝酸盐还原 麦康凯上生长 假单胞菌属 + O / - + + + / - + 不动杆菌属 - O / - - + - + 产碱杆菌属 + - + + + / - + 莫拉菌属 + - - + + / - + 黄杆菌属 + O / F - + - + / - 非发酵菌主要菌属的生化反应 广泛存在于自然界的空气、水 和土壤中。种类多达 200余种，大 多数为条件致病菌。 革兰阴性，直或微弯曲，大多 有鞭毛（单鞭毛或单端丛毛），无 芽胞，专性需氧。 第二节 假单胞菌属 （ Pseudomonas） 为假单胞菌的代表，为条件致病菌，也是医院感 染的常见病菌之一。 （一）生物性状 1、形态染色性 ：革兰阴性菌杆，呈球杆 状或长丝状，长短不一，单个或短链排列。无 芽胞，无荚膜， 单端有鞭毛 1 3根，运动活泼 。 铜绿假单胞菌 （ P.aeruginosa） 培养特性： 专性需氧， 4 不长， 42 可生长。 血平板 ： 常见透明溶血环 普通平板 ： 可产多种色素，主要有： 绿脓素（兰绿色，可溶于水 ）和 荧光素（ 只溶于水） 。从临床标本中分离的菌株大 多产生此色素 麦康凯上可形成 5种不同形态的菌落 ： 典型型 ：灰绿色，大小不一，扁平湿润 ，边缘不齐，表面可见金属光泽。 大肠菌群型 ：圆形凸起，灰白色半透明 。 粗糙型： 菌落中央凸起，边缘扁平，表 面粗糙。 侏儒型： 细小无光泽，半透明菌落 粘液型 ：光滑凸起呈粘液状 生化反应 ： 氧化酶， O/F 上能氧化分解葡萄糖、木糖产酸、精 氨酸双水解酶，枸橼酸盐，硝酸 盐。 抵抗力： 较强，临床分离株对 多种抗生素耐药 （二） 致病性： 可产生多种致病物质： 内毒素 、 外毒 素 、 菌毛 、 荚膜 、 胞外酶 和 溶血物质 除自然界外，也存在于人体皮肤上及 与外界相通的腔道中。 多为 继发感染 ，如烧伤后的创面感染 ，也可引起肺炎、脑膜炎、尿道感染，严 重时可引起败血症，死亡率甚高。 （三）微生物学检验 1、标本采集： 血液、脑脊液、胸腹水、尿 液、痰液、脓汁等。医院环境监控：可采空气 、水、物体表面等。 2、检验程序 3、检验方法： （ 1）直接镜检： （ 2）分离培养： 血液和体液 可先 增菌 ，再转 种血平板和麦康凯平板分离； 脓汁、分泌物、 尿 可直接种于上述培养基分离培养。 （ 3）鉴定：根据 菌落特征 、 色素 、 生姜气味 、 菌体形态 、 氧化酶试验 等作出鉴定。对 无色素的菌株应与其 他假单胞菌鉴别 。 脑脊液、胸腹水、脓汁、痰、尿液 分 离 培 养 血、麦康凯 直接涂片染色 血液 体液 粪 便 分 离 培 养 SS、 麦康凯 初步鉴定 菌落特征，色 素 菌体形态、 氧化酶 最后鉴定 生化反应 血清学噬菌体分型： 增 菌 营养肉汤 铜绿假单胞菌的检验程序 ： 铜绿假单胞菌的鉴定要点及与其他假单胞菌的区别 试 验 铜绿假单胞菌 荧光假单胞菌 恶臭假单胞菌 斯氏假单胞菌 嗜麦芽假单胞 鼻疽假单胞菌 类鼻疽假单胞 氧化酶 / 荧光素 / / 青脓素 / / / 动力 葡糖氧化 乳糖氧化 蔗糖氧化 木糖氧化 赖氨酸脱羧酶 精氨酸水解酶 硝酸盐还原 / / 明胶液化 / 42 生长 / / 第三节 不动杆菌 不动杆菌 （ Acinetobacter） 为一群氧化酶 阴性，不发酵糖类、无动力的革兰阴性菌。 含 6个种：醋酸钙不动杆菌 洛菲不动杆菌 溶血不动杆菌 鲍曼不动杆菌 琼氏不动杆菌 约翰逊不动杆菌 一、生物学性状 形态与染色 革兰阴性球杆菌，常成双排列 ，不易退色，多数有荚膜、无芽孢、无鞭毛。 培养特性 专性需养，营养要求不高。 最适温度 35 ，鲍曼不动杆菌 42 可生长。 血平板上 圆形凸起、 23 mm ， 光滑、边 缘整齐、灰白色的菌落，部分菌落呈黏液状（溶 血不动杆菌可形成 -溶血环）； 不产生色素。 麦康凯平板 形成粉红色菌落。 生化反应 氧化酶阴性，触酶阳性， 葡萄糖 O/F为氧化型。 不动杆菌属主要菌种生化反应特征： 二、致病性 该菌广泛存在于自然界，属条件致病 菌，也是医院感染的常见病菌之一，常引 起呼吸道、消化道和泌尿生殖道感染。 三、微生物学检查 标本采集： 血液、脑脊液、痰液、尿液、脓 汁等。 检验程序： 检验方法： （ 1）直接镜检： 脑脊液、尿液 离心取沉淀物 涂片， 脓汁和痰液 直接涂片染色镜检可见革兰阴性 球杆菌 成双排列，细胞内外可见，常染成革兰假阳 性 。 （ 2）分离培养： （ 3）初步鉴定： 染色为革 兰阴性球菌或球杆菌，成双排 列 。 氧化酶（） ， 硝酸盐还 原（） 。 动力（） ， 不发 酵葡萄糖 。 符合上述五项即可判定为 不动杆菌属的细菌 。 脓汁、痰液、尿液 脑脊液、血液 分 离 培 养 （血液琼脂、麦康凯琼脂 ） 增菌培养 直接 涂片 革兰染色 挑选可疑菌落 生化反应 初步鉴定 KIA： 底层、斜面不变 硝酸盐还原、氧化酶、 动力 最后鉴定 35 1824h 不动 杆菌属及产碱杆菌属检验程序 醋酸钙不 动杆菌 鲍曼不 动杆菌 溶血不 动杆菌 约 翰 逊 不动杆菌 琼氏不 动杆菌 洛菲不 动杆菌 葡萄糖氧化 +/_ 木糖氧化 +/_ 乳糖氧化 精氨酸双水解酶 _ /+ 鸟氨酸脱羧酶 苯丙氨酸脱氨酶 丙二酸盐利用 _/+ 柠檬酸盐利用 +/_ 明胶液化 生长温度 37 41 42 不动杆菌属主要菌种生化反应特征 产碱杆菌属 （ Alcaligenes） 为一群有动 力，专性需氧，不分解糖类的革兰阴性菌 杆 。 括 2个种，即 粪产碱杆菌 ， 去硝化产碱杆菌 。后者又分为 去硝化亚种 和 木糖氧化亚种 。 广泛存在于自然界，水和土壤中及人体皮肤 粘膜有其存在。常从临床标本中分离出 。 第四节 产碱杆菌属 一、生物学性状 形态与染色 ：为革兰阴性短杆菌，成对或链 状排列，有周鞭毛，有动力，无芽胞，多数无荚 膜。 培养特性 ：需氧，最适温度 25 37 ，营养 要求不高。 血平板： 形成较大灰白、扁平、边缘菲薄 的菌落。 麦康凯和 SS： 形成透明无色菌落（少数菌 株在 SS上不长）。 液体培养： 均匀混浊生长， 表面形成 菌膜，管底有粘性沉淀 。 在含蛋白胨的肉 汤中产氨，使 PH达 8.6，为本菌鉴别特征 。 生化反应： 氧化酶，触酶，硝酸 盐还原，枸橼酸盐利用； 不产生靛基质和硫化氢，不液化明胶 ，无苯丙氨酸脱氨酶和精氨酸双水解酶。 大多数不能氧化分解各种糖类。 二、微生物检验 标本采集： 脓汁、分泌物、尿液 、血液等。 检验程序： 同前 鉴 定： 根据菌落形态、染色性 、氧化酶试验，再根据生化反应作进 一步鉴定。 硝酸盐还原 枸橼酸盐利用 氧化酶 尿素酶 / 丙二酸盐 / O/F试验 葡萄糖 O/ 木糖 O/ DNA中 G C（ mol%） 55.959.4 66.069.8 63.968.9 O： 氧化； F： 发酵； 粪产碱杆菌 木糖氧化亚种 去硝化亚种 产碱杆菌的鉴别 铜绿假单胞菌纯培养的 镜下形态（革兰染色） 铜绿假单胞菌在血琼脂平 板上的菌落特征（ 18-24h ） 绿 脓 杆 菌 铜绿假单胞菌绿脓素 铜