1涂片找抗酸杆菌操作规程01

编号：QDFYJY-WS001-1/0-2012青 海 大 学 附 属 医 院 检验科 章节：微生物实验室操作规程 标题：涂片找抗酸杆菌操作规程作业指导书 页 码：第 1 页 共 3 页 涂片找抗酸杆菌操作规程 1、检验目的 检验样本中是否含有抗酸杆菌，为临床提供诊断依据。 2、原理 结核菌、麻疯杆菌、耻垢菌等抗酸性菌，因其菌体表面有一层类脂或脂质之皮膜而不易 着色，但一经着色后，酸性酒精的作用亦是不容易把它脱色。利用这特性并以增强的染色 液予染色，然后再以酸性酒精加以处理，使其脱色后再对比染色，此时抗酸性菌仍是固定 着最初色素的颜色（红色），也就易于鉴别。 3、标本要求 （1）标本类型：病人的痰、穿刺关节液、腹水、胸积液、组织、脑脊液、分泌物、尿液 等。 （2）标本采集：挑取痰标本中、脓样或可疑部分，于玻片正面均匀涂抹成卵圆形痰膜， 自然干燥。染色前加热固定。 4、容器和添加剂类型 痰盒、尿杯、试管等。 5、试剂 （1）试剂名称：染色液。 （2）产品型号：结核菌染色液（又名：抗酸染色液/TBStain）冷染法。 （3）试剂生产厂家：珠海贝索生物技术有限公司。 （4）包装规格：4X250ML。 （5）试剂组成： 主要成份 试剂 1：石碳酸复红液（1250ml） 碱性品红、笨酚 试剂 2：酸性酒精溶液（2250ml） 乙醇、盐酸 试剂 3：亚甲基蓝溶液（1250ml） 亚甲蓝 2 第 2 页 共 3 页 6、仪器设备： OLYMPUS CX31 奥林巴斯双目显微镜。 7、操作步骤 （1）涂片自然干燥后，经火焰固定，加石碳酸复红溶液盖满玻片，染色 5 分钟或更久 （不需加温） 。 （2）水洗,(之后尽可能将水沥干） 。加酸性酒精溶液盖满玻片，脱色 1-2 分钟 （3）水洗（假如标本面还可以看到残存红色时，再加酸性酒精溶液脱掉红色为止） 。 （4）加亚甲基蓝溶液，染色 30 秒。 （5）水洗干燥后，镜检。 8、质量控制： 参加我科质量管理组的质量控制活动。 9、干扰和交叉反应 麻风菌可能对检验结果产生影响。 10、生物参考区间 涂片未见抗酸杆菌。 11、患者检验结果的可报告区间 涂片未见抗酸杆菌/涂片见细长、红色抗酸杆菌。 12、结果判断 抗酸性菌（结核菌）呈红色，其它细菌及细胞呈蓝色。结核菌通常为长 1.33.5u，宽 0.30.5u 多少有点弯曲之杆菌，没有鞭毛和芽孢，属难染性菌，但抗酸性染色可使其显著 被染。菌体有的成点状连着或成群也有，菌少的时候每 23 个菌呈 V、Y 、T 字状的特有 集结。 13、临床意义： 结核分枝杆菌不产生内毒素和外毒素，其毒力主要是在机体中细胞内、外生长与大量繁 殖的能力，细菌成分与其代谢产物引起免疫反应（型）导致一系列组织学上的意义。 3 第 3 页 共 3 页 14、注意事项 （1）脱色液用完后，可自制 3盐酸酒精溶液作为脱色液。 （2）每次试剂用完后，请迅速盖好，以免挥发。 （3）抗酸染色直接用于痰标本时，可以适当增加标本涂片的厚度，以提高检出率。染 厚涂片时，须掌握复染时间。如果背景过深，会影响镜检。 （4）有时同一抗酸菌体上，红色的深浅亦有不同，观察时应予注意。 （5）试剂盒储存时，尽量避免高、低温环境及阳光直射。 （6）病理组织片的抗酸染色，建议使用热染法，但需要注意的是 Carbolfuchsin 的染色 时间不能低于 5 分钟，如此即可得到较好的染色效果。 （7）冬季室温过低时，染色时间要适当延长。 （8）本品应有专业人员使用。 （9）使用前应详细阅读使用说明书，