pcr检测宫颈病变组织和配偶尿道分泌物hpv的研究

PCR 检测宫颈病变组织和配偶尿道分泌物 HPV 的研究 安徽医科大学学报 1999 年第 3 期第 34 卷 基础医学研究 作者：李京培 王明丽 史百芬 乔慕华 范晓芳 胡 勇 黄升海 陈禹保 单位：李京培 王明丽 史百芬 胡 勇 黄升海 安徽医科大学微生物学教研室，合肥 230032；乔慕华 安徽医科大学附属第一医院妇产科，合肥 230022；范晓芳 合肥市第 二人民医院妇产科，合肥 230011；陈禹保 北京美迪科生物工程公司，北京 100012 关键词：宫颈疾病；聚合酶链反应；乳头状瘤病毒；人；肿瘤病毒感染 摘要 目的 检测宫颈病变组织人乳头瘤病毒(HPV)感染对其配偶泌尿生殖道的受染情 况。方法 应用聚合酶链反应对 43 例女性宫颈病变组织和配偶尿道分泌物进行 HPV 6.11 型和 HPV 16.18 型检测。结果 宫颈病变组织和配偶尿道分泌物 HPV 6.11 型检出率分别为 27.91%和 11.63%；HPV 16.18 型检出率分别为 51.16%和 37.21%。配偶尿道分泌物与宫颈病 变组织 HPV 6.11 同型检出率为 41.67%，HPV 16.18 型同型检出率 72.73%。结论 女性感 染 HPV 的同时，其配偶也有潜伏感染，表明 HPV 可通过尿道传播。 中国图书资料分类法分类号 R711.22 Human papolloma virus infections in urinary genital tract of female patients and their partners by PCR technique Li Jingpei, Wang Mingli, Shi Baifen et al (Dept of Microbiology, Anhui Medical University, Hefei 230032) Abstract Objective To measure the positive rates of human papilloma virus (HPV) type 6.11 and 16.18 in discharges of 43 patients from female lower genital tract and in secretions of 43 their partners.Methods HPV DNA in samples was quantitatively detected by polymerase chain reaction (PCR).Results The positive rate in female pathological specimen and in secretions of their spouses were 27.91% and 11.63% for HPV 6.11 and 51.16% and 37.21% for HPV 16.18 respectively. The coincidence rates for HPV 6.11 and HPV 16.18 in female pathological tissues and in secretions were 41.67% and 72.73% respectively.Conclusion When females suffer from HPV infection, their partners may have high probability to have an insidious infections, indicating the possibility of seminal transmission of HPV. MsSH cervix diseases; polymerase chain reatoion; papilloma virus,human; tumor virus infections 人乳头瘤病毒(human papilloma virus, HPV)除能引起传染性很强的生殖器感染外， 还与生殖道上皮恶性肿瘤及癌前病变密切相关 1，2 ，因此 HPV 的检测对尖锐湿疣、癌前 病变及宫颈癌的早期诊断和防治有重要意义。为了解配偶双方 HPV 相互感染的关系，本研 究采用聚合酶链反应(PCR)检测宫颈病变组织与其配偶的尿道分泌物中 HPV 基因型状况，为 分子流行病研究提供依据。 1 材料和方法 1.1 标本 由安徽医科大学第一附属医院和市二院妇产科门诊提供，共有阴道镜检查 异常病变组织 43 例，其中 度宫颈糜烂的慢性宫颈炎 24 例，尖锐湿疣 16 例，慢性宫 颈炎 3 例；其对应配偶尿道分泌物 43 例。 1.2 标本的采集和处理 用无菌棉拭子取宫颈脱落细胞或配偶尿道分泌物悬浮于无菌 生理盐水中，置-20保存。用时融解，猛烈振荡，10 000 rmin -1离心 5 min。沉淀物 加 50 l 裂解液(含 0.45% NP-40，0.45% Tween-20 蛋白酶 K 0.3 gL-1)经 100 10 min，其上清中即含有待测为 HPV DNA 模板。 1.3 PCR 技术工艺流程 采用北京美迪科生物工程公司研制生产的 HPV 6.11 型及 HPV 16.18 型 DNA 体外诊断试剂盒。各试剂用量参见试剂盒说明。反应条件：在科海 PCR 热循 环仪中 94预变性 5 min 后，按 94 45 s，55 45 s，72 45 s，循环 35 次，72延 伸 5 min。扩增产物经 20 gL-1含 EB 的琼脂糖凝胶电泳，在紫外灯下观察，并与 DNA marker 对比，以 233 bp 处出现扩增带为 HPV 16.18 型阳性，540 bp 处出现扩增带为 HPV 6.11 型阳性，每次试验均设阳性及阴性对照。 2 结果 2.1 引物特异性测定 以标准 HPV 16.18 型和 HPV 6.11 型阳性 DNA、沙眼衣原体 DNA，巨细胞病毒及单纯疱疹毒 DNA 做为模板，在其它条件相同下扩增，除 HPV 阳性 DNA 外， 扩增产物结果均阴性。 2.2 重复性试验 3 例患者 PCR 阳性标本和 3 例 PCR 阴性标本，均每日重复试验连续 3 次，各次所得结果完全一致。 2.3 宫颈标本及其对应配偶尿道分泌物不同型 HPV 检出率 见表 1。43 例宫颈病变标 本中检出 HPV 6.11 型、HPV 16.18 型和 HPV 混合型阳性例数分别是 12、22 和 4 例，总 HPV 阳性 38 例，总阳性率为 88.37%；对应其配偶标本检出 HPV 6.11 型、HPV 16.18 型和 HPV 混合型分别为 5、16 和 2 例，总 HPV 阳性 23 例，总阳性率为 53.49%。43 例宫颈标本有 22 例 HPV 16.18 型阳性，这 22 例配偶尿道分泌物标本阳性 16 例，同型检出率为 72.73%；且 HPV 6.11 型阳性 12 例，其对应配偶标本 HPV 6.11 型阳性 5 例，同型检出率为 41.67%。43 例宫颈标本 HPV 混合阳性 4 例，其配偶尿道分泌物 HPV 混合阳性 2 例，同型检出率为 50%。 表 1 43 例宫颈标本及其对应配偶尿道分泌物不同型 HPV 检出率(%) 宫颈标本 尿道分泌物HPV 型别 例数(检出率) 例数(检出率) 二者同型率 (%) HPV 6.11 12(27.91) 5(11.63) 41.67 HPV 16.18 22(51.16) 16(37.21) 72.73 HPV 混合型 4(9.30) 2(4.65) 50.00 3 讨论 HPV 是宫颈上皮恶变的重要因子，目前尚无合适的体外培养系统，使其常规检测受到 限制， PCR 技术的应用使得 HPV 的临床检测出现了突破性进展。此方法快速，敏感性强， 能检测出低拷贝数的 HPV，但有时会发生假阳性。为了避免假阳性的出现，我们做了引物 特异性试验，结果显示 HPV 6.11 型和 HPV 16.18 型阳性对照均出现特异性扩增带，而其它 非 HPV DNA 及阴性对照均未见扩增带。因此说明该试验有良好的可信性。 女性宫颈与配偶泌尿道生殖道 HPV 感染的相互关系，国内少见报道。本次检测宫颈病 变组织和配偶尿道分泌物标本各 43 例，结果总 HPV 阳性率、HPV 6.11 型阳性率和 HPV 16.18 型阳性率分别为 88.37%、27.91%和 51.16%，表明宫颈病变组织标本检出率高，且以 感染 HPV 16.18 型为主。另外 4 例宫颈病变组织标本是 HPV 6.11 型和 16.18 型混合感染， 其中 3 例是度宫颈糜烂的慢性宫颈炎患者，另 1 例为尖锐湿疣患者。而 HPV DNA 阴性宫 颈组织标本推测可能出现 HPV 其它型别的感染。我们的结果明显高于崔玉兰等 3 HPV 6.11 型阳性率(19.40%)和 HPV 16.18 型阳性率(30.56%)，尤以 HPV 16.18 型较报道的检测 率为高。我们的实验还表明宫颈有 HPV 感染的妇女，其配偶泌尿生殖道中亦存在着 HPV 感 染，且同型感染率 HPV 6.11 型、HPV 16.18 型和 HPV 混合型分别为 41.67%、72.73%和 50.0%，证实了 HPV 在配偶间存在性传播相互感染的关系。 本次仅检测了 HPV 6.11 型和 HPV 16.18 型，且检出率较高，有条件还可测 HPV 31.33 型。凡是检出 HPV DNA 者，不论从传染病、流行病还是从肿瘤的发生等方面来看，都应视 其为高危人群。除定期随访外，还应在配偶间采取措施，阻断传染源，从而达到防止疾病 复发，防癌治癌的目的。 作者简介：李京培，男 37 岁，在职研究生，高级实验师 王明丽，女，44 岁，硕士，副教授，硕士生导师 参考文献 1 Adriaan JC, Eric CJ, Marcdu M et al. Use of anticomtamination primers in the PCR for the detection of human HPV genotypes in cervic