gy001人血白蛋白生产工艺规程

广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 制订人： 审核人： 审阅人： 批准人： 制订日期： 审核日期： 审阅日期： 批准日期： 颁发部门：质量保证 执行日期：2006 年 9 月 15 日 发往部门：制品室 包装室 版次： 新增 替代 第 1 页，共 58 页 目 录 一、人血白蛋白产品概述2页 二、人血白蛋白分离分装工艺流程图及环境区域划分5页 三、人血白蛋白生产操作过程及工艺条件7页 四、主要设备一览表及设备生产能力29 页 五、原 辅 料 、 包 装 材 料 、 中 间 品 、 原 液 、 半 成 品 、 成 品 质 量 标 准 和 技 术 参 数30 页 六、包 装 要 求 、 标 签 、 说 明 书 的 使 用 与 贮 存 方 法 47页 七、工艺卫生 48页 八、安 全 和 劳 动 保 护 52页 九、劳动组织与岗位定员54 页 十、三废处理56 页 十一、附录(常用生物制品术语和名词解释) 57页 十二、附录(常用理化常数、换算表)59 页 十三、附页(供修改时登记批准日期、文号和内容用)60 页 一、产品概述 本品系由乙型肝炎疫苗免疫健康人的血浆经低温乙醇蛋白分离法提取的组分V，经 纯化、脱醇、6010小时加温灭活病毒后，除菌分装而成的液体制剂。白蛋白含量97% 以上，用适量辛酸钠作稳定剂，不含防腐剂和抗生素，专供静脉输注。主要用于治疗 创伤性、出血性休克、严重烧伤以及低蛋白血症等。 1 药品名称 通用名：人血白蛋白 英文名：Human Albumin 汉语拼音： Renxue Baidanbai 主要组成成份：人血白蛋白 2 性状 本品为略黏稠，黄色或绿色至棕色澄明液体。不应出现混浊。 3 药理作用 3.1 .增加血容量和维持血浆胶体渗透压：白蛋白占血浆胶体渗透压的80%，主要 调节组织与血管之间水分的动态平衡。由于白蛋白分子量较高，与盐类及水分相比， 透过膜内速度较慢，使白蛋白的胶体渗透压与毛细管的静力压抗衡，以此维持正常与 恒定的血容量；同时在血循环中，1g白蛋白可保留18ml水，每5g白蛋白保留循环内水 分的能力约相当于100ml血浆或200ml全血的功能，从而起到增加循环血容量和维持血 浆胶体渗透压的作用。 3.2 运输及解毒：白蛋白能结合阴离子也能结合阳离子，可以输送不同的物质， 也可以将有毒物质输送到解毒器官。 3.3 营养供给：组织蛋白和血浆蛋白可互相转化，在氮代谢障碍时，白蛋白可作 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 3 页，共 58 页 为氮源为组织提供营养。 4 适应症 4.1 失血创伤、烧伤引起的休克。 4.2 脑水肿及损伤引起的颅压升高。 4.3 肝硬化及肾病引起的水肿或腹水。 4.4 低蛋白血症的防治。 4.5 新生儿高胆红素血症。 4.6 用于心肺分流术、烧伤的辅助治疗、血液透析的辅助治疗和成人呼吸窘迫综 合症。 5 用法用量 5.1 用法：一般采用静脉滴注或静脉推注。为防止大量注射时机体组织脱水，可 采用5%葡萄糖注射液或氯化钠注射液适当稀释作静脉滴注（宜用备有滤网装置的输血 器） 。滴注速度应以每分钟不超过2ml为宜，但在开始15分钟内，应特别注意速度缓慢， 逐渐加速至上述速度。 5.2 用量：使用剂量由医师酌情考虑，一般因严重烧伤或失血等所致休克，可直 接注射本品5-10g，隔4-6小时重复注射1次。在治疗肾病及肝硬化等慢性白蛋白缺乏症 时，可每日注射本品5-10g，直至水肿消失，血清白蛋白含量恢复正常为止。 6 不良反应 使用本品一般不会产生不良反应，偶可出现寒颤、发热、颜面潮红、皮疹、恶心 呕吐等症状，快速输注可引起血管超负荷导致肺水肿，偶有过敏反应。 7 禁忌 7.1 对白蛋白有严重过敏者。 7.2 高血压患者，急性心脏病者、正常血容量及高血容量的心力衰竭患者。 7.3 严重贫血患者。 7.4 肾功能不全者。 8注意事项 8.1 药液呈现混浊、沉淀、异物或瓶子有裂纹、瓶盖松动、过期失效等情况不可 使用。 8.2 本品开启后，应一次输注完毕，不得分次或给第二人输用。 8.3 输注过程中如发现病人有不适反应，应立即停止输用。 8.4 有明显脱水者应同时补液。 8.5 运输及贮存过程中严禁冻结。 9 孕妇及哺乳期妇女用药 对孕妇或可能怀孕妇女的用药应慎重，如有必要应用时，应在医师指导和严密观 察下使用。 10 药物相互作用 本品不宜与血管收缩药，蛋白水解酶或含酒精溶剂的注射液混合使用。 11 药物过量 因本品有高渗作用，过量注射时，可造成脱水、机体循环负荷增加、充血性心力 衰竭和肺水肿。 12 规格 蛋白浓度20%，根据蛋白量分为10g/瓶（2050ml/瓶） 、5g/瓶（2025ml/瓶） 、2g/瓶（2010ml/瓶） 。 13 贮藏 28，避光保存。 14 包装 1瓶/盒、100瓶/箱。 15 有效期：五年。 16 批准文号 国药准字S10960075(10g/瓶)； 国药准字S10960076（5g/瓶） ； 国药准字S10960077 （2g/瓶） 。 17 制造及检定依据 中国药典三部2005年版。 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 5 页，共 58 页 二、人血白蛋白分离分装工艺流程图及环境区域划分 1 人血白蛋白分离 血浆 E： 8% pH：7.20.2 T： -2-3 P：4.06.0% 离心 沉淀(FI) 上清 E： 19% pH： 5.850.05 T： -5-6 P：3.55.5% 离心 沉淀(FII +III) 上清 E：40% pH：5.85.9 T：-7-8 P：1.53.5% 离心 沉淀(FIV) 上清 过滤（加0.2%0.5%硅藻土） E： 40% pH：474.8 T： -7-8 P：1.03.0% 离心 沉淀(FV) 溶解 上清( 供回收酒精) 4倍体积注射用水(01)溶解 E：10% pH：4.6 4.7 P： 3.0%7.0% ：-2 -3 过滤（加0.20.5%硅藻土） 超滤脱醇配制 十万级注： E：乙醇浓度 T：温度 P：蛋白含量 模制瓶 胶 塞 铝 盖 * 灯 检 包 装 入 库 60 10h灭活病毒 万级区 2. 人血白蛋白分装 60 10h灭活病毒后蛋白 超声波震荡 洗瓶机精洗 精洗 精洗 0.2微米除菌过滤 180 3小时烘干 132 7分钟 132 7分钟 湿热灭菌 湿热灭菌 303214天孵育 万级 百级 非控制区 分装 * * 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 7 页，共 58 页 三、人血白蛋白生产操作过程及工艺条件 采用低温乙醇蛋白分离法。参照Kistler-Nitchmann法适当改进。 1 原料血浆领用 1.1 生产操作 根据生产指令，领取该批生产的足量合格人份的原料血浆，对原料血浆纸箱脱皮 后置于已经清洁消毒的塑料筐中，经缓冲走廊送入融浆间，并按照产地批号进行分隔 放置，用注射用水对血浆袋表面进行冲洗后，让原料血浆进行自然融化。 领取原料血浆时注意核对产地、批号、人份数、外观、检验报告，对红浆、脂肪 浆等外观不合格血浆用经清洁的不锈钢桶收集放置融浆间融化并记录。 1.2 清场 把原料血浆脱皮后的外包装纸箱折叠整齐送锅炉房焚烧，血浆脱皮间用0.5的84 消毒液消毒，并对场地及器具进行清洁消毒处理。 1.3 质量控制项目及标准 每一人份血浆均经检验并合格。外观应无溶血、脂血,无肉眼可见的红细胞及其他 异物；HBsAg：阴性；抗-HCV：阴性；抗-HIV1+2：阴性；ALT：25卡门氏单位(赖氏法)； 梅毒血清学反应：阴性；血浆蛋白含量：5.5%。 血浆在常温下自然融化距离投料时间不超过72小时。 1.4异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 1.5 物料平衡 血浆人份数的平衡限度为100。 2 血浆合并 2.1 生产操作 2.1.1 将投料过程中所专用的不锈钢桶、胶管、筛网、剪刀等用具清洗干净备用， 并准备好泵、电子称等器具。 2.1.2将塑料框中把融化完全的血浆倒入装好75乙醇溶液的塑料盒中浸泡23分 钟，每袋血浆用注射用水冲洗表面，洗净血浆袋表面后用洁净纱布将血浆袋表面擦干 置于洁净的塑料框中，用剪刀把血浆袋一端袋口剪开，将血浆倒至不锈钢筛网上，过 滤至不锈钢桶中，装满称重后用泵将血浆抽入反应罐中，并及时记录。 2.1.3 投浆完毕，测量反应罐混合血浆体积，核对血浆总量。待反应罐中血浆搅 拌均匀后取样送检。 2.2 清场 对不锈钢桶、胶管、筛网、剪刀等用具清洁消毒后置于2NaOH溶液中；血浆袋用 0.584消毒液消毒后送锅炉房焚烧；对血浆合并间、塑料筐等进行清洁，清场完毕后 开启紫外灯对血浆合并间照射30分钟以上。 2.3质量控制项目及标准 反应罐中血浆经搅拌均匀后取样,供测总蛋白含量、白蛋白纯度及抗HBs。血浆 总蛋白含量应在5.56.0之间，白蛋白纯度不低于65.0，抗HBs呈阳性。 2.4异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 2.5物料平衡 90投料后血浆净重与血浆发放重量的比值100 3 组分I(FI)的分离 3.1 生产操作 3.1.1 组分I(FI)的制作 3.1.1.1 准备95的乙醇，启动冷媒系统，预冷降温至20以下；配制AB缓冲 液，AB缓冲液配制比例为醋酸钠1197克，冰醋酸2530ml，两者混合加注射用水定容至 11升；准备并清洗各种生产用具，准备PH计。 3.1.1.2 启动冷媒系统及搅拌系统，将血浆冷却至00.5,用pH4.0的AB缓冲液 调pH至7.20.2，控制流速1L/分钟；缓慢滴加已预冷至-20以下的95%乙醇使反应 液乙醇终浓度为8%；乙醇加入速度不能超过60L/小时，滴加乙醇过程中反应液温度应 随之下降,并使最终反应液温度达-2.50.5,滴加乙醇完毕后,继续搅拌13小时，静 置1小时以上。 3.1.1.3 制作完成后，对反应间进行清场，清洁天面、墙面、清洗地面、地漏。 将制作用具清洗干净后置于2NaOH溶液中浸泡。 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 9 页，共 58 页 3.1.2 组分I(FI纤原)的离心 3.1.2.1 将进液管道，凸轮泵、硅胶管、离心机、不锈钢桶、收集离心上清的反 应罐等清洁后，通过管道连接待离心反应罐、离心机、不锈钢桶、凸轮泵、收集离心 上清的反应罐。 3.1.2.2 启动冷媒系统，启动离心机，对反应液进行离心, 离心机开始出液后,用 止血钳来控制进液速度,离心机出液流量应控制在50-72L/h/台,经离心分离,上清液须 澄清,透明,用温度计检测出液温度, FI离心上清液温度控制在-1-3；上清液收集 到洁净的10万ml不锈钢桶内,并用凸轮泵将桶里收集的上清液抽到应罐内，现场必须有 两位工作人员值班,对离心原液,离心出液速度、温度,澄明度等各项参数进行检测,保 证离心效果,并随时观察离心机,进液泵是否正常工作,管道有无漏液等。 3.1.2.3 根据投浆量计算理论分离沉淀量（每吨血浆产出FI沉淀123kg，要求每 台离心机盛装沉淀最大量为7kg） ，根据投浆量计算理论分离产出沉淀重量确定停机次 数，每次停机挖取沉淀每台离心机盛装沉淀应不多于7kg；离心完成后用已配制好并降 温至-2-3的8的乙醇冲洗残留在反应罐、管道的蛋白液，冲洗完成后停机并收集 沉淀(FI)，用专用塑料袋包装好称重后送焚烧,上清液注入另一反应罐,并取样供蛋白 含量和白蛋白纯度测定。 3.1.2.4 离心完后对离心间进行清场，清洁墙面、桌面、清洗地面、地漏。将离 心用具清洗干净后待用或置于2NaOH溶液中。 3.2 计算公式 3.2.1 加入AB缓冲液体积的理论值：AB（ml）0.00321000血浆体积（L） 3.2.2 加入95乙醇体积的理论值：乙醇（ L）(VAB(L)V血浆(L) 8%/（95%- 8） 3.3 质量控制项目及标准 反应罐中组分I(FI) 离心上清液经搅拌均匀后取样,供测总蛋白含量、白蛋白纯度。 白蛋白含量为3.55.5，白蛋白纯度不低于70.0。 3.4 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 3.5 物料平衡 90AB缓冲液实际加入量与理论加入量的比值 110； 乙醇实际加入量与理论加入量应不大于1L； F沉淀提取量 123kg/吨血浆。 4 组分II+III (FII+III)的分离 4.1 生产操作 4.1.1 组分 II+III (FII+III)的制作 4.1.1.1 准备95的乙醇，启动冷媒系统，预冷降温至20以下；配制AB缓冲 液，AB缓冲液配制比例为醋酸钠1197克，冰醋酸2530ml，两者混合加注射用水定容至 11升；准备并清洗各种生产用具，准备PH计。 4.1.1.2 启动搅拌系统，组分I(FI)离心上清液用pH4.0的AB缓冲液调pH至 5.850.05，控制流速1L/分钟；启动冷媒系统，缓慢滴加已预冷至-20以下的95% 乙醇使反应液乙醇终浓度为19%；乙醇加入速度不能超过60L/小时，滴加乙醇过程中反 应液温度应随之下降,并使最终反应液温度达-5.5 0.5,滴加乙醇完毕后,继续搅拌 13小时，静置6小时以上。 4.1.1.3 制作完成后，对反应间进行清场，清洁天面、墙面、清洗地面、地漏。 将制作用具清洗干净后置于2NaOH溶液中浸泡。 4.1.2 组分II+III (FII+III)的离心 4.1.2.1 将进液管道，凸轮泵、硅胶管、离心机、不锈钢桶、收集离心上清的反 应罐等清洁后，通过管道连接待离心反应罐、离心机、不锈钢桶、凸轮泵、收集离心 上清的反应罐。 4.1.2.2 启动冷媒系统，启动离心机，对反应液进行离心, 离心机开始出液后,用 止血钳来控制进液速度,离心机出液流量应控制在50-70L/h/台,经离心分离,上清液须 澄清,透明,用温度计检测出液温度, FII+III离心上清液温度控制在-1-6；上清液收 集到洁净的10万ml不锈钢桶内,并用凸轮泵将桶里收集的上清液抽到挂有绿色准用状态 标志的反应罐内，现场必须有两位工作人员值班,对离心原液,离心出液速度、温度,澄 明度等各项参数进行检测,保证离心效果,并随时观察离心机,进液泵是否正常工作,管 道有无漏液等。 4.1.2.3 根据投浆量计算理论分离沉淀量（每吨血浆产出F II+III沉淀455kg，每台 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 11 页，共 58 页 离心机盛装沉淀最大量为7kg） ，根据投浆量计算理论分离产出沉淀重量确定停机次数， 每次停机挖取沉淀每台离心机盛装沉淀应不多于7kg；离心完成后用已配制好并降温至 -5-6的19的乙醇冲洗残留在反应罐、管道的蛋白液，冲洗完成后停机并收集组 分II+III沉淀，组分II+III 沉淀 用专用塑料袋包装，称重后将包装袋里空气排尽，用包 装绳捆绑好，放至塑料筐或铝筐，-30以下保存，贮存期应不超过2年。组分II+III离 心上清液注入另一反应罐,并取样供蛋白含量和白蛋白纯度测定。 4.1.2.4 离心完后对离心间进行清场，清洁墙面、桌面、清洗地面、地漏。将离 心用具清洗干净后待用或置于2NaOH溶液中。 4.2 计算公式 4.2.1 加入AB缓冲液体积的理论值：AB（ml）0.00841000组分I离心上清体 积（L） ； 4.2.2 加入95乙醇体积的理论值：乙醇（L） V组分I离心上清体积（L）（19%- 8）/（95%-19）VAB体积(L)19/（95-19） 。 4.3 质量控制项目及标准 反应罐中组分 II+III 离心上清液经搅拌均匀后取样,供测总蛋白含量、白蛋白纯 度。白蛋白含量为1.53.5，白蛋白纯度不低于85。 4.4 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 4.5 物料平衡 90AB缓冲液实际加入量与理论加入量的比值 110； 乙醇实际加入量与理论加入量应不大于1L； 组分II+III沉淀提取量455kg/吨血浆。 5 组分IV(FIV)的分离 5.1 生产操作 5.1.1 组分 IV(FIV)的制作 5.1.1.1 准备95的乙醇，启动冷媒系统，预冷降温至20以下；配制AB缓冲 液，AB缓冲液配制比例为醋酸钠1197克，冰醋酸2530ml，两者混合加注射用水定容至 11升；准备并清洗各种生产用具，准备PH计。 5.1.1.2 启动搅拌系统，组分II+III离心上清液用pH4.0的AB缓冲液调pH至 5.850.05，控制流速1L/分钟；启动冷媒系统，缓慢滴加已预冷至-20以下的95% 乙醇使反应液乙醇终浓度为40%；乙醇加入速度不能超过60L/小时，滴加乙醇过程中反 应液温度应随之下降,并使最终反应液温度达-7.5 0.5,滴加乙醇完毕后,继续搅拌 13小时，静置8小时以上。 5.1.1.3 制作完成后，对反应间进行清场，清洁天面、墙面、清洗地面、地漏。 将制作用具清洗干净后置于2NaOH溶液中。 5.1.2 组分IV(FIV) 的离心 5.1.2.1 将进液管道，凸轮泵、硅胶管、离心机、不锈钢桶、收集离心上清的反 应罐等清洁后，通过管道连接待离心反应罐、离心机、不锈钢桶、凸轮泵、收集离心 上清的反应罐。 5.1.2.2 启动冷媒系统，启动离心机，对反应液进行离心分离, 离心机开始出液 后,用止血钳来控制离心速度,离心机出液流量应控制在50-65L/h/台,经离心分离,上清 液须澄清,透明,用温度计检测出液温度, FIV离心上清液温度控制在-2-8；上清液 收集到洁净的10万ml不锈钢桶内,并用凸轮泵将桶里收集的上清液抽到挂有绿色准用状 态标志的反应罐内，现场必须有两位工作人员值班,对离心原液,离心出液速度、温度, 澄明度等各项参数进行检测,保证离心效果,并随时观察离心机,进液泵是否正常工作, 管道有无漏液等。 5.1.2.3 根据投浆量计算理论分离沉淀量（每吨血浆产出F IV沉淀275kg，每台 离心机盛装沉淀最大量为7kg） ，根据投浆量计算理论分离产出沉淀重量确定停机次数， 每次停机挖取沉淀每台离心机盛装沉淀应不多于7kg；离心完成后用已配制好并降温至 -7-8的40的乙醇冲洗残留在反应罐、管道的蛋白液，冲洗完成后停机并收集组 分IV 沉淀，用专用塑料袋包装好称重后送焚烧,，上清液注入另一反应罐,并取样供蛋 白含量和白蛋白纯度测定。 5.1.2.4 离心完后对离心间进行清场，清洁墙面、桌面、清洗地面、地漏。将离 心用具清洗干净后待用或置于2NaOH溶液中。 5.2 计算公式 5.2.1 加入AB缓冲液体积的理论值：AB（ml）0.00231000组分II+III离心上 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 13 页，共 58 页 清体积（L） ； 5.2.2 加入95 乙醇体积的理论值：乙醇（ L）V 组分II+III离心上清体积（L）（40%- 19）/（95%-40）VAB体积(L)40/（95-40） 。 5.3 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 5.4 物料平衡 90AB缓冲液实际加入量与理论加入量的比值 110； 乙醇实际加入量与理论加入量应不大于1L； 组分IV沉淀提取量275kg/吨血浆。 6 组分IV(FIV)离心上清过滤 6.1 生产操作 6.1.1 组分 IV(FIV)离心上清过滤 6.1.1.1 配制40的乙醇，启动冷媒系统，预冷降温至-7-8；清洗适量的硅 藻土，其水样内毒素检测合格后，用配制好40的乙醇润湿，沥干放冷操作间备用； 装配滤板并冲洗板框过滤系统40分钟，其水样内毒素检测合格后，用已经预冷好的 40的乙醇将板框过滤器预冷至-7-8；准备并清洗各种生产用具。 6.1.1.2 启动冷媒系统和搅拌系统，组分 IV离心上清液温度降至-7-8；按组 分 IV离心上清体积的0.20.5kg/100L加入硅藻土；搅拌0.51小时，静置0.51小 时。 6.1.1.3 用硅胶管将过滤液反应罐、蠕动泵、预冷好的板框过滤器和过滤上清盛 装罐连接好，启动蠕动泵过滤，过滤上清温度控制在-2-8；用量筒取适量过滤上 清液，对光目测应清晰看到量筒上的刻度，滤液澄清透明、无乳光；过滤速度应不能 超过800L/小时/台，过滤压力应不高于无石棉过滤材质标识的压力。 6.1.1.4 当过滤压力达到无石棉过滤材质标识的压力时，应及时停止过滤，停止 过滤或过滤完毕，用预先预冷好的-7-8的40的乙醇顶冲洗残留在管道、板框滤 器的蛋白液至过滤上清反应罐。如果过滤上清液目测出现乳光时，应立即停止过滤， 用预先预冷好的-7-8的40的乙醇顶冲洗残留在管道、板框滤器的蛋白液至待过 滤上清反应罐，等待下次重新过滤。 6.1.1.5 过滤完成后，拆除无石棉过滤材质，对反应间进行清场，清洁天面、墙 面、清洗地面、地漏。将板框过滤器清洗并用2NaOH溶液均匀淋洒处理；过滤用具清 洗干净后置于2NaOH溶液中。 6.2 质量控制项目及标准 反应罐中组分 IV 离心过滤上清液经搅拌均匀后取样,供测总蛋白含量、白蛋白纯 度。白蛋白含量为1.03.0，白蛋白纯度不低于90。 6.3 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 7 组分V(FV)的分离 7.1 生产操作 7.1.1 组分 V(FV)的制作 7.1.1.1 准备95的乙醇，启动冷媒系统，预冷降温至20以下；配制2M HAc 溶液，冰醋酸1120ml，加注射用水定容至10升；准备并清洗各种生产用具，准备PH计。 7.1.1.2 启动搅拌系统，组分IV 离心上清过滤液用2M HAc醋酸溶液调pH至 4.750.05，控制流速1L/分钟；启动冷媒系统，缓慢滴加已预冷至-20以下的95% 乙醇使反应液乙醇终浓度为40%， ；乙醇加入速度控制在（2030L）/小时，滴加乙醇 过程中反应液温度应随之下降,并使最终反应液温度达-7.50.5,滴加乙醇完毕后,继 续搅拌13小时，静置8小时以上。 7.1.1.3 制作完成后，对反应间进行清场，清洁天面、墙面、清洗地面、地漏。 将制作用具清洗干净后浸泡于2NaOH溶液中。 7.1.2 组分V(FV)的离心 7.1.2.1 将进液管道，凸轮泵、硅胶管、离心机、不锈钢桶、收集离心上清的反 应罐等清洁后，通过管道连接待离心反应罐、离心机、不锈钢桶、凸轮泵、收集离心 上清的反应罐。 7.1.2.2 启动冷媒系统，启动离心机，对反应液进行离心, 离心机开始出液后,用 止血钳来控制进液速度,离心机出液流量应控制在50-60L/h/台,经离心分离,上清液须 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 15 页，共 58 页 澄清,透明,用温度计检测出液温度, FV离心上清液温度控制在-2-8；上清液收集 到洁净的10万ml不锈钢桶内,并用凸轮泵将桶里收集的上清液抽到酒精回收罐内，现场 必须有两位工作人员值班,对离心原液,离心出液速度、温度,澄明度等各项参数进行检 测,保证离心效果、无蛋白泄漏，用10%三氯乙酸检测混浊现象,并随时观察离心机,进 液泵是否正常工作,管道有无漏液等。 7.1.2.3 根据投浆量计算理论分离沉淀量（每吨血浆产出FV沉淀905kg，每台离 心机盛装沉淀最大量为7kg） ，根据投浆量计算理论分离产出沉淀重量确定停机次数， 每次停机挖取沉淀每台离心机盛装沉淀应不多于7kg；离心完成后用已配制好并降温至 -7-8的浓度为40的乙醇冲洗残留在反应罐、管道的蛋白液，冲洗完成后停机并 收集组分V沉淀，用冲洗干净的不锈钢桶装好称重后盖上桶盖 ,用玻璃纸封好。沉淀溶 解纯化或放-30以下沉淀库暂存待纯化，暂存期应超出1个月，并注明品名、批号、 重量、日期。 7.1.2.4 离心完后对离心间进行清场，清洁墙面、桌面、清洗地面、地漏。将离 心用具清洗干净后待用或浸泡于2NaOH溶液中。 7.2 计算公式 7.2.1 加入2M HAc醋酸溶液体积的理论值：HAc（L）0.0173组分 IV离心过滤 上清体积（L） ； 7.2.2 加入95乙醇体积的理论值：乙醇（L）HAc（L）40%/（95%-40） 。 7.3 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 7.4 物料平衡 902M HAc溶液实际加入量与理论加入量的比值110； 乙醇实际加入量与理论加入量应不大于1L； 组分V 沉淀提取量905kg/吨血浆。 8 蛋白纯化 8.1 生产操作 8.1.1 组分V沉淀溶解 8.1.1.1 按组分V沉淀重量（ kg）的4倍体积(L) 准备溶解水，启动冷媒系统，降 温至01；准备并清洗各种生产用具。 8.1.1.2 启动搅拌系统，将组分V沉淀倒入经内毒素检测合格的溶解水，沉淀倒入 完后，温度降至0-1；继续搅拌4小时以上，让沉淀完全溶解。 8.1.2 纯化制作 8.1.2.1 配制50的乙醇，启动冷媒系统，预冷降温至10以下；配制2M HAc 溶液，冰醋酸560ml，加注射用水定容至5升；准备并清洗各种生产用具，准备pH计。 8.1.2.2 启动搅拌系统，组分 V沉淀溶解液用2M HAc醋酸溶液调pH至4.650.05， 控制流速0.5L/分钟；启动冷媒系统，缓慢滴加已预冷至-10以下的50%乙醇使反应 液乙醇终浓度为10%；乙醇加入速度不能超过60L/小时，滴加乙醇过程中反应液温度应 随之下降,并使最终反应液温度达-2.50.5,滴加乙醇完毕后,继续搅拌0.51小时， 静置0.5小时以上。 8.1.3 精制过滤 8.1.3.1 配制10的乙醇，启动冷媒系统，预冷降温至-2-3；清洗适量的硅 藻土，其水样内毒素检测合格后，用配制好10的乙醇润湿，沥干放冷操作间备用； 装配滤板并冲洗板框过滤系统40分钟，其水样内毒素检测合格后，用已经预冷好的 10的乙醇将板框过滤器预冷至-2-3；准备并清洗各种生产用具。 8.1.3.2 按纯化制作液体积的0.20.5kg/100L加入硅藻土；搅拌0.51小时，静 置0.51小时。 8.1.3.3 用硅胶管将过滤液反应罐、蠕动泵、预冷好的板框过滤器和过滤上清盛 装罐或蛋白超虑系统连接好，启动蠕动泵过滤，过滤上清温度控制在-1-3；用量 筒取适量过滤上清液，对光目测应清晰看到量筒上的刻度，滤液澄清透明、无乳光； 过滤速度应不能超过800L/小时/台，过滤压力应不高于无石棉过滤材质标识的压力。 8.1.3.4 当过滤压力达到无石棉过滤材质标识的压力时，应及时停止过滤，停止 过滤或过滤完毕，用预先预冷好的-2-3的40的乙醇顶冲洗残留在管道、板框滤 器的蛋白液至过滤上清反应罐或超虑系统。如果过滤上清液目测出现乳光时，应立即 停止过滤，用预先预冷好的-2-3的10的乙醇顶冲洗残留在管道、板框滤器的蛋 白液至待过滤上清反应罐，等待下次重新过滤。 8.1.3.5 过滤完成后，拆除无石棉过滤材质，对纯化间进行清场，清洁天面、墙 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 17 页，共 58 页 面、清洗地面、地漏。将板框过滤器用2NaOH溶液均匀淋洒处理；过滤用具清洗干净 后置于2NaOH溶液中。 8.2 计算公式 8.2.1 加入2M HAc溶液体积的理论值：HAc（ml） 0.00121000组分V沉淀溶 解液体积（L） ； 8.2.2 加入50乙醇体积的理论值：乙醇（L） 10（组分V沉淀溶解液体 积（L）2M HAc醋酸溶液加入体积（L） ）组分 V沉淀重量（kg）28/（50- 10） 。 8.3 质量控制项目及标准 精制过滤上清液取样,供检测总蛋白含量、白蛋白纯度及内毒素检查。白蛋白含量 为3.07.0，白蛋白纯度不低于96，内毒素检测合格。 8.4 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 8.5 物料平衡 902M HAc溶液实际加入量与理论加入量的比值110； 乙醇实际加入量与理论加入量应不大于1L； 9 超滤浓缩脱醇 9.1 生产操作 9.1.1 配制适量的1M NaHCO3溶液；准备注射用水超滤器和蛋白超滤器；注射用水 超滤器经水样内毒素检测合格后，用于准备透析水于洁净反应罐，启动搅拌系统，将 透析温度降至04；准备并清洗各种生产用具。 9.1.2 精制过滤液反应罐、蠕动泵或精制过滤液和超滤系统连接；启动超滤系统， 浓缩蛋白精制过滤液含量至1520；整个浓缩过程中缓慢加入1M NaHCO3溶液，使浓 缩液pH至保持在7.00.2；用硅胶管连接透析水反应罐、蠕动泵和超滤系统，蛋白浓 缩液体积的9倍体积透析水透析脱醇蛋白液；透析速度不应超过600L/小时，保持工作 压力不应高于超滤机标识的工作压力；9倍体积透析完后，浓缩蛋白液浓度至23以上； 整个超滤过程用10三氯乙酸检测超滤系统是否泄漏蛋白；收集蛋白原液、洗液，并 称重记录；将原液、洗液搅拌均匀，原液取样检测含量、纯度、内毒素、 Na浓度、 残余乙醇含量、pH值，洗液取样检测含量、内毒素、残余乙醇含量。 9.1.3 超滤完成后，清洗超滤系统，对超滤间进行清场，清洁消毒天面、墙面、 清洗地面、地漏；生产用具清洗干净后置于2NaOH溶液中。 9.2 质量控制项目及标准 放液后蛋白液取样,供检定室检测，蛋白液检测内毒素检测应合格；残余乙含醇量 不高于0.025；其中原液白蛋白含量应不低于23、白蛋白纯度不低于96、 Na 浓度应在3050mmol/L、pH值在为6.57.3。 9.3 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 10 配液 10.1 生产操作 10.1.1 根据原液pH值，配制适量的1M NaOH或1M HCl溶液；准备好pH计、电子秤 等配液用具；配制用辅料，包括：辛酸钠、氯化钠等。 10.1.2 根据检测结果,加入NaCl、辛酸钠等将白蛋白参数调整为蛋白含量 20.2%,pH6.57.3,Na +160mmol/L,辛酸钠含量为0.1400.180mmol/g白蛋白。 10.1.2.1 根据各原液、洗液重量和蛋白含量计算出各原液、洗液密度和体积；根 据体积计算出净蛋白总量；根据净蛋白总量计算出辛酸钠加量、最终配液体积；根据 最终配液体积和放液后总体积、原液Na +平均浓度值计算氯化钠加量；根据最终配液 体积和放液后总体积值计算加入注射用水和1M NaOH溶液（ 或1M HCl溶液）的体积值。 10.1.2.2 根据上述计算值，分别加入辛酸钠、氯化钠；并最终加入适量的1M NaOH溶液（或1M HCl溶液）和注射用水至理论配液总体积。将配制好的原液搅拌均匀， 送样检测蛋白含量、白蛋白纯度、内毒素、pH值等。 10.1.3 配液完成后，对配液间进行清场，清洁消毒天面、墙面、清洗地面、地 漏；生产用具清洗干净后置于2NaOH溶液中；并将剩余辅料密封。 10.2 计算公式 原液、洗液密度计算公式：密度(g/ml)0.2114对应含量0.0045 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 19 页，共 58 页 原液、洗液体积计算公式：V体积（ml）对应重量(g) 对应密度(g/ml) 净蛋白重量计算公式：D净蛋白(g)各对应V体积(ml)对应含量乘积的总和 最终配液体积计算公式：F终体积（ml）D净蛋白(g) 20.2% 辛酸钠加量计算公式：Z(g)D净蛋白16016610 6 氯化钠加量计算公式：Y（g）F终体积（ml）110V 体积（ml）的总和原液Na +平 均浓度值10 6 58.5 注射用水和1M NaOH溶液（ 或1M HCl溶液）的体积计算公式：X(ml)=F 终体积（ml） V体积（ml）的总和 10.3 质量控制项目及标准 蛋白配制后原液,启动搅拌系统，经搅拌均匀取样供检测蛋白含量、白蛋白纯度、 内毒素及pH值。白蛋白含量为20.20.5，白蛋白纯度应大于96，pH值应为 6.57.3，内毒素检测合格。原液从配制到除菌过滤分装的间隔时间应不超过48小时。 10.4 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 10.5 物料平衡 白蛋白收率为242kg/吨血浆 11 巴氏病毒灭活 巴氏灭活为人血白蛋白法定灭活工艺，灭活工艺参数为连续10小时加热灭活可能 残存在蛋白中的病毒，要求恒温在600.5范围内。 11.1 生产操作 11.1.1 清洗巴氏灭活灌，并送水样检测内毒素；试运行巴氏灭活系统，运行结果 应符合要求。准备并清洗各种生产用具。 11.1.2 预先向恒温水浴槽加满注射用水，调节温度控制仪将温度设定为 60.50.5，根据生产安排，提前开启加热装置，使水浴箱水温在60.50.5；开 启巴氏灭活罐搅拌，抽取配液后的原液至已经合格的巴氏罐中，打开电脑控制系统， 让恒温热水在巴氏灭活罐夹层和水槽间循环升温；缓慢开启蒸气加热，使水浴箱温度 维持在60.50.5，使蛋白温度缓慢升至59.5；制品温度达到59.5后，开始计时， 进行10小时保温，在10个小时中每半小时进行一次制品温度和水浴箱温度记录，并且 现场记录温度与电脑控制温度一致，制品温度必须控制在600.5。 11.1.3 保温结束以后，电脑控制系统自动停止循环水泵，使得水浴箱热水与巴氏 灭活罐夹层断开。在巴氏灭活罐头夹层由下而上注入饮用水，使蛋白液降温至30以 下，排出巴氏灭活罐夹层水，停止搅拌。 11.2 质量控制项目及标准 确认巴氏灭活系统运行正常，保证制品灭活温度在工艺要求范围内、灭活时间符 合工艺要求。 11.3 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 12 内包材、分装用具清洗准备 12.1 生产操作 12.1.1 理瓶操作 12.1.1.1 在粗洗间去掉模制瓶外包装，目检挑出破瓶，将待洗模制瓶排满不锈钢 瓶盘，经传递窗传入洗瓶间。 12.1.1.2 清洁XCQ型超声波洗瓶机，打开注射用水和净化压缩空气管路阀门， 冲洗管路；检查用水压力，确认大于0.35Mpa，检查用气压力，确认大于0.30Mpa ；把 手动/自动切换开关换至自动位置，启动程控电源，将欲清洗瓶盘由人工按清洗周期洗 瓶轨道至升降架内，瓶盘按自动洗瓶程序进行清洗；生产能力 18002500瓶/小时 (50ml),25003000瓶/小时(30ml)；操作过程中，每盘抽洗好的2只瓶注入经过0.2m 过滤的注射用水，供目检；每半小时检查1次注射用水和净化压缩空的压力，确认正常。 12.1.1.3 洗瓶结束，关电源、新水源和净化压缩空气阀门，排去洗瓶机水槽所有 的水，清洁水槽及执行装置。 12.1.2 胶塞清洗 12.1.2.1 经脱去外包装后，从传递窗传入，反复以注射用水冲洗5遍以上，用洁 净试管取水样，供内毒素检测，沥干装盒，60烘干1小时以上。 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 21 页，共 58 页 12.1.3 铝盖清洗 12.1.3.1 经脱去外包装后，从传递窗传入，反复以注射用水冲洗5遍以上，沥干 装盒，60烘干2小时以上。 12.1.4 除菌系统清洗 12.1.4.1 除菌过滤器的清洗 冲洗除菌过滤器，取水样检测内毒素，应合格。 12.1.4.2 滤芯检漏 将压缩空气、过滤器和注射用水连接好；过滤器用注射用水冲洗15分钟使滤洗芯 完全润湿；打开压缩空气阀,通压缩空气加压, 逐渐增大压力，观察并记录出气管冒出 气泡时的压力；要求0.2um滤芯压泡点应大于0.32Mpa、0.45um滤芯压泡点应大于0. 2Mpa、0.65um滤芯压泡点应大于0.1Mpa。 12.1.4.3 除菌系统的清洗 把滤芯装入滤器，按滤芯孔径由大到小规格串连连接好，用注射用水冲洗30分钟 以上，取尾部水样出水送检细菌内毒素。 12.1.5 分装用具清洁 将分装机系统接触制品部分进行清洗。 12.1.6 清洗完成后，清除生产遗留物，清洁墙面、设备、桌面、清洗地面、地漏。 12.2 质量控制项目及标准 模制瓶清洗后抽样供目检，目检50ml或30ml注射用水应无可见异物，合格率 98。 12.3 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 13 灭菌 13.1 生产操作 13.1.1 干热灭菌 13.1.1.1单项开门清洁消毒干热灭菌柜，消毒剂采用0.584消毒剂和0.1新洁 而灭按月轮换使用。 13.1.1.2 检查灭菌柜，确认灭菌设备运行正常、监控系统正常，检查排气是否畅 通；将清洗好的模制瓶瓶口朝下瓶底向上，由下至上摆放在干烤箱物品架上，盒与盒 之间放一个工字架隔开，盒与干烤箱之间均留有空隙，以免妨碍空气流通。灭菌能力 达9145只玻璃瓶/台(50ml)、12245只玻璃瓶/台(30ml)。 13.1.1.3 检查确认两面门关闭好，打开电源。 13.1.1.3.1 本地控制操作法： 设定下限点温度设定为180、再设定上限点温度为183、将温度计时点设为 180，调整计时器2小时以上，将排风口打开，开始加热，当温度升至100时，将排 风口关闭防止热量流失，当温度已达到要求，恒温自动计时；灭菌时间到后灭菌柜自 动断电，自行降温。 13.1.1.3.2 远程控制操作程序： 再在电脑上将计时温度设定为180，再将下限报警温度设定为180，上限报警 温度设定为183；当下限温度低于下限设定报警温度时，系统自动报警，并加热。当 上限温度高于上限设定报警温度时，系统自动报警，并停止加热。然后再将时间设定 为180分钟。加热开始，电脑开始自动记录。当温度达到设定计时温度时，时间记录开 始计时。灭菌时间结束以后，电脑自动断开干烤箱电源，自行降温。 13.1.2 湿热灭菌 13.1.2.1 单项开门清洁消毒干热灭菌柜，消毒剂采用75乙醇消毒灭菌柜内表面。 13.1.2.2 检查灭菌柜，确认灭菌设备运行正常、监控系统正常，检查炉内排气孔 是否畅通；将烘干好的胶塞、铝盖放入灭菌器内，其他不耐高热的干热灭菌分装生产 用具各依次放入灭菌器内,注意保持蒸汽流通。将门关闭，顺时针旋转手轮，至门完全 密封。 13.1.2.3 检查确认两面门关闭好，打开电源。 13.1.2.3.1 灭菌温度的预置：将记录仪选择开关拨到下限设定，调整下限设定电 位器旋扭，显示器显示132.0，然后将选择开关拨到上限设定， 调整上限设定电位 器，至显示器显示134.01。 13.1.2.3.2 灭菌时间的预置：预置灭菌时间420秒。 广西北生药业股份有限公司柳州生物制品分公司 BZGY00100 人血白蛋白生产工艺规程 第 23 页，共 58 页 13.1.2.3.3 干燥时间的预置：调整干燥时间480秒。 13.1.2.3.4 脉动次数的预置：调整脉动次数3次。 13.1.2.4 开水源阀门，水压应在0.1Mpa以上；开汽源，汽源压力应在0.3Mpa以上， 开排冷凝水阀至排水管烫为止，关闭排冷凝水阀。启动真空程序，启动液体程序，灭 菌结束，逆时针旋转手轮，缓缓打开框门。关闭电源键，切断动力和控制电源。关闭 水源，蒸汽源。 13.1.2.5 注意：灭菌完成后，内柜压力下降到0.027MPa以下时， 将柜门打开约 10mm的缝隙，等待约10分钟，再开大柜门。 13.2 异常情况处理 发生异常情况影响正常工作，应填写异常情况处理报告并及时告知科室负责 人及QA进行处理。 14 分装 14.1 生产操作 14.1.1 配制适量的消毒剂，对分装区域操作台面、设备表面、天面、墙面、传递 窗、地面进行消毒，表面消毒完后，进行空气消毒，空气消毒采用空气熏蒸；紫外灯 照射1小时以上。 14.1.2 分装前检查 14.1.2.1 分装间、灭菌后区 (1)温度: 2024 (2)压差: 5Pa (3)相对湿度:4560% (4)沉降菌落数:1个 (5)尘埃粒子数:5m，0个/L；0.5m，3.5个/L 14.1.2.2 分装区走道 (1)温度: 2024 (2)压差: 5Pa (3)相对湿度:4560% (4)沉降菌落数: 3个 (5)尘埃粒子数:：5m，2个/L；0.5m，350个/L) 14.1.3 灭菌后的滤芯，做滤芯安全性检查，将压缩空气、滤器连接好；用经终 端过滤器的注射用水冲洗15分钟使滤洗芯完全润湿；打开压缩空气阀,通压缩空气加压, 逐渐增大压力，观察并记录出气管冒出气泡时的压