苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵的敏感性基线

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵的敏感 性基线 摘要：采用菌丝生长速率法测定 了苹果轮纹病菌（Botryosphaeria dothidea）对甲基硫菌灵的敏感性。结 果显示，EC50 处于 0.206 79.066 5 mg/L 之间，平均为 3.883 62.097 9 mg/L，与甲基硫菌灵对 5 个野生海棠菌 株的 EC50 平均值 3.041 30.296 5 mg/L 无明显差异。正态检验表明，76 个苹果 轮纹病菌菌株对甲基硫菌灵的敏感性符 合近似正态分布，山东省未出现产生抗 药性的苹果轮纹病菌菌株，EC50 平均 值 3.883 62.097 9 mg/L 可作为苹果轮 纹病菌对甲基硫菌灵的敏感性基线。 中国论文网 /8/view-12895554.htm -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 关键词：苹果轮纹病菌 （Botryosphaeria dothidea） ；甲基硫菌灵； 敏感性基线 中图分类号：S482.28 文献标识 码：A 文章编号：0439-8114（2016） 22-5825-03 DOI：10.14088/ki.issn0439- 8114.2016.22.024 Sensitivity Baseline of Botryosphaeria dothidea from Apple to Thiophanate-methyl LIU Bao-you， ZHANG Wei， LUAN Bing-hui， WANG Ying-zi （Institute of Plant Protection， Yantai Academy of Agricultural Sciences of Shandong Province， Yantai 265500，Shandong， China） Abstract： Sensitivity in Botryosphaeria dothidea to thiophanate- methyl was determined by mycelium growth rate method in fungicide-amended media. 50% effective -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 concentration（EC50） of thiophanate- methyl were between 0.206 7 mg/L and 9.066 5 mg/L and the mean EC50 was 3.883 62.097 9 mg/L. The mean EC50 for 5 white rot isolates of Chinese flowering crabapple without a previous history of fungicide exposure to thiophanate-methyl was 3.041 30.296 5 mg/L，which was not distinct from 3.883 62.097 9 mg/L. Normal distribution analysis showed that the sensitivity of isolates to thiophanate-methyl was fitted well with a normal distribution function. So far， resistance to thiophanate-methyl was not found in 76 isolates collected in Shandong province. The mean EC50 of 3.883 62.097 9 mg/L was made as sensitivity baseline of B. dothidea from apple to thiophanate-methyl. Key words： Botryosphaeria dothidea； thiophanate-methyl； sensitivity baseline -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 由O 果轮纹病菌 Botryosphaeria dothidea（Moug.）Ces.& De Not引起的苹果轮纹病主要分布于中 国、韩国、日本。中国苹果主产区均有 不同程度发生，山东各地苹果园普遍发 生。该病在山东省具有加重的趋势，严 重发病园发病率达 40%以上，主要为害 果实和枝干，且在果实储藏期仍可发病， 危害严重1。在防治病害方面，化学杀 菌剂仍是当前防治苹果轮纹病的主要手 段。甲基硫菌灵为防治苹果轮纹病的重 要药剂，该药剂具有保护、治疗、内吸 三大功效，因其杀菌谱广、防治效果好 而被广泛使用。但由于其作用位点单一， 长期连续使用，加速了不同病原菌对甲 基硫菌灵的抗药性。据报道，苹果褐斑 病菌（Diplocarpon mali） 2、冬麦雪腐 病菌（Gerlachia nivalis） 3、麦赤霉病 菌（Fusarium culmorum ） 4、梨黑星病 菌（Venturia nashicola）5 ，6 、草坪菌 核币斑病菌（Sclerotinia homoeocarpa） 7、西瓜蔓枯病菌（Didymella -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 bryoniae）8 等病原菌已对甲基硫菌灵 产生了抗药性。目前，苹果轮纹病菌已 对苯醚甲环唑、氟硅唑9、戊唑醇10 等杀菌剂产生低水平抗药性，但未见有 苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵敏感性的研 究报道。本研究旨在通过采集山东省不 同地区的苹果轮纹病菌，了解苹果轮纹 菌株对甲基硫菌灵的抗药性现状，为病 害的综合治理提供基本理论依据。 1 材料与方法 1.1 供试菌株 20072008 年分别从山东省济南、 烟台、威海、淄博等 17 个地区苹果园 采集典型轮纹病样本 300 余份。经组织 分离、纯化及鉴定，保存菌株 272 个。 挑选 76 个典型菌株，评价病菌对甲基 硫菌灵的敏感性。2009 年从未施过甲基 硫菌灵的海棠上获取 5 个野生轮纹菌株， 作为参照菌株。 1.2 供试药剂 98% 甲基硫 菌灵（Thiophanate-methyl）原药，新加 坡生达有限公司生产。用少量丙酮溶解 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 后加入 0.1%的吐温-80 水溶液，配成浓 度为 10 000 mg/L 的母液。 1.3 试验方法 1.3.1 含甲基硫菌灵的 PDA 培养 基 用 Eppendorf 微量移液器吸取 1 mL 的甲基硫菌灵母液，用灭菌水配成系列 稀释液。将溶化的 PDA 培养基冷却至 4050 ，用微量移液器分别将上述稀 释液加入到 49 mL PDA 培养基中，配 成终浓度分别为 50.000、25.000、12.500、6.250、3.125 、1.563、0.781、0.391 mg/L 的含药培 养基平板。 1.3.2 生长速率法11 在 PDA 培 养基上将病原菌培养 5 d，自菌落边缘 取 6 mm 的菌饼，用接种针将菌饼接种 于含药平板中央，置于 26 培养箱中 进行培养，5 d 后测定菌落生长量。设 不含药剂的处理为空白对照，每处理重 复 3 次。 1.4 数据统计与分析 用卡尺准确测量菌落直径（mm） ， -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 采用十字交叉法垂直测量直径各一次， 求其平均值，减去 6 mm 菌饼直径，即 为菌落生长直径。再根据 3 次重复试验 结果，求出各浓度梯度的平均直径，计 算不同浓度梯度的菌丝生长抑制率。 菌丝生长抑制率= 100% 用各浓度梯度对数值及相应的菌 丝生长抑制率作回归分析，计算甲基硫 菌灵对不同苹果轮纹菌株的 EC50、EC90 和相关系数，并应用 SPSS 软件对数据进行分析。 2 结果与分析 采用菌丝生长速率法测定了 76 个苹果轮纹菌株对甲基硫菌灵的敏感性。 结果表明，甲基硫菌灵对苹果轮纹病菌 的菌丝生长具有明显的抑制效果。 EC50于 0.206 79.066 5 mg/L 范围之 内，平均为 3.883 62.097 9 mg/L，EC90 平均为 25.218 411.660 6 mg/L。根据 EC50 极差 R=maxx- minx=9.066 8-0.206 7=8.860 1 mg/L，将 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 处于 010 之间的 EC50 数据分成 10 组， 具体分组中值、频数见图 1。 图 1 中的曲线代表了苹果轮纹病 菌对甲基硫菌灵的敏感性状况，呈单峰 曲线分布；通过 K-S 正态性检验，得 Z=0.523，双侧检验 P=0.9470.05，EC50 频数分布表现连续 性。结果表明，甲基硫菌灵对 76 个苹 果轮纹菌株的 EC50 频数分布曲线符合 近似正态分布。 为了确定多年来甲基硫菌灵对苹 果轮纹病菌的影响，将 5 个野生海棠轮 纹病菌菌株作为参照菌株。结果表明， 甲基硫菌灵对其的 EC50（表 1）与苹果 轮纹病菌的 EC50（表 2）无明显差异。 苹果轮纹病菌自然种群中不存在抗药性 的菌株，病原菌仍处于原始种群。本研 究测定的 76 个菌株对甲基硫菌灵的 EC50 平均值为 3.883 62.097 9 mg/L， 可作为苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵的敏 感性基线。 3 小结与讨论 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 甲基硫菌灵自应用于防治苹果轮 纹病等多种病害以来，对促进农业的安 全生产起到了十分重要的作用。但因其 作用位点单一，许多作物病害对甲基硫 菌灵已产生了抗药性2-10。本研究结 果表明，甲基硫菌灵对 76 个苹果轮纹 病菌 EC50 的频数呈近似正态分布，可 将 EC