分子生物学期末复习试题及答案_第1页
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文档简介

1、名词解释 分子生物学:包括对蛋白质和核酸等生物大分子的结构 与功能,以及从分子水平研究生命活动 RNA 组学:RNA 组学研究细胞中 snmRNAs 的种类、结构和 功能。同一生物体内不同种类的细胞、同一细胞在不同 时间、不同状态下 snmRNAs 的表达具有时间和空间特异 性。 增色效应: DNA 变性时其溶液 OD260增高的现象。 减色效应: DNA 复性时其溶液 OD260降低的现象。 Tm:变性是在一个相当窄的温度范围内完成,在这一范围 内,紫外光吸收值达到最大值的50%时的温度称为 DNA 的 解链温度,又称融解温度(melting temperature, Tm)。 其大小与 G+C 含量成正比。 解链曲线:如果在连续加热 DNA 的过程中以温度对 A260(absorbance,A,A260代表溶液在260nm 处的吸光 率)值作图,所得的曲线称为解链曲线。 DNA 复性:在适当条件下,变性 DNA 的两条互补链可恢 复天然的双螺旋构象,这一现象称为复性。 核酸分子杂交:在 DNA 变性后的复性过程中,如果将不 同种类的 DNA 单链分子或 RNA 分子放在同一溶液中,只 要两种单链分子之间存在着一定程度的碱基配对关系, 在适宜的条件(温度及离子强度)下,就可以在不同的 分子间形成杂化双链,这种现象称为核酸分子杂交。 基因:广义是指原核生物、真核生物以及病毒的 DNA 和 RNA 分子中具有遗传效应的核苷酸序列,是遗传的基本 单位。狭义指能产生一个特定蛋白质的 DNA 序列。 断裂基因:不连续的基因称为断裂基因,指基因的编码 序列在 DNA 上不连续排列而被不编码的序列所隔开。 重叠基因:核苷酸序列彼此重叠的2个基因为重叠基因, 或称嵌套基因。 致死基因:删除后可导致机体死亡的基因。 基因冗余:由于一基因在个体中有若干份拷贝,当删除 其中一个时,个体的表型不发生明显变化。 DNA 重组:DNA 分子内或分子间发生遗传信息的重新组合, 又称为遗传重组或基因重排。 同源重组:发生在同源序列间的重组称为同源重组,又 称基本重组。 接合作用:当细胞与细胞、或细菌通过菌毛相互接触时, 质粒 DNA 从一个细胞(细菌)转移至另一细胞(细菌) 的 DNA 转移称为接合作用(conjugation)。 转化作用:通过自动获取或人为地供给外源 DNA,使细 胞或培养的受体细胞获得新的遗传表型,称为转化作用 (transformation)。 转导作用:当病毒从被感染的(供体)细胞释放出来、 再次感染另一(供体)细胞时,发生在供体细胞与受体 细胞之间的 DNA 转移及基因重组即为转导作用 位点特异重组:位点特异重组(site-specific recombination) 是由整合酶催化,在两个 DNA 序列的特 异位点间发生的整合。 12-23规则:重组发生在间隔为12bp 到23bp 的不同信号 序列之间,称为12-23规则。 转座子:(transposon)在基因中可以移动的一段 DNA 序列。 转座:由插入序列和转座子介导的基因移位或重排称为 转座(transposition)。 克隆:来自同一始祖的相同副本或拷贝的集合。 DNA 克隆:应用酶学的方法,在体外将各种来源的遗传 物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人 工的 DNA)与载体 DNA 接合成一具有自我复制能力的 DNA 分子复制子(replicon),继而通过转化或转染宿主 细胞,筛选出含有目的基因的转化子细胞,再进行扩增 提取获得大量同一 DNA 分子,也称基因克隆或重组 DNA (recombinant DNA)。 基因工程:(genetic engineering)实现基因克隆所用的 方法及相关的工作称基因工程,又称重组 DNA 工艺学。 限制性核酸内切酶:(restriction endonuclease, RE) 是识别 DNA 的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双 链 DNA 的一类内切酶。 同功异源酶:来源不同的限制酶,但能识别和切割同一 位点,这些酶称同功异源酶。 同尾酶:有些限制性内切酶虽然识别序列不完全相同, 但切割 DNA 后,产生相同的粘性末端,称为同尾酶。 载体:为携带目的基因,实现其无性繁殖或表达有意义 的蛋白质所采用的一些 DNA 分子。 复制:(replication)是指遗传物质的传代,以母链 DNA 为模板合成子链 DNA 的过程。 半保留复制:(semi-conservative replication)DNA 生物合成时,母链 DNA 解开为两股单链,各自作为模板 (template)按碱基配对规律,合成与模板互补的子链。 子代细胞的 DNA,一股单链从亲代完整地接受过来,另 一股单链则完全从新合成。两个子细胞的 DNA 都和亲代 DNA 碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 复制子:(replicon)DNA 分子中能独立进行复制的单 位称为复制子。习惯上把两个相邻起始点之间的距离定 为一个复制子。 复制眼:(replication eye)DAN 正在复制的部分在电 镜下观察起来犹如一只眼睛,称为复制眼。 复制叉:(replication fork)复制一开始,复制起始 点要形成一个特殊的叉型结构,是复制有关的酶和蛋白 质组装成复合物和新链合成的部位,这种结构称为复制 叉。 端粒:(telomere)指真核生物染色体线性 DNA 分子末端 的结构。 转录:(transcription) 生物体以 DNA 为模板合成 RNA 的过程 。 不对称转录:(asymmetric transcription) 在 DNA 分子 双链上某一区段,一股链用作模板指引转录,另一股链 不转录;模板链并非永远在同一条单链上。 模板链:DNA 双链中按碱基配对规律能指引转录生成 RNA 的一股单链,称为模板链(template strand),也称作有 意义链或 Watson 链。 编码链:相对的另一股单链是编码链(coding strand), 也称为反义链或 Crick 链。 启动子:RNA 聚合酶结合模板 DNA 的部位称为启动子 (promoter) 转录泡:(transcription bubble)在转录延长过程中, 由局部打开的 DNA 双链、RNA 聚合酶核心酶及新生成的 RNA 三者结合在一起的复合体,为空泡状结构,又称转 录复合物。 转录因子:能直接、间接辨认和结合转录上游区段 DNA 的蛋白质,现已发现数百种,统称为反式作用因子 (trans-acting factors)。反式作用因子中,直接或间 接结合 RNA 聚合酶的,则称为转录因子 (transcriptional factors, TF)。 转录后加工(RNA 的成熟):在细胞内,由 RNA 聚合酶 合成的原初转录物 (pre-RNA)经过链的裂解、5端与3端的切除和特殊结 构的形成、核苷的修饰和糖苷键的改变、以及拼接和编 辑等过程,转变为成熟的 RNA 分子的过程称为 RNA 的成 熟或转录后加工(post-transcriptional processing) 。 RNA 编辑:改变 RNA 编码序列的方式称为 RNA 编辑。 密码子:(codon)代表一个氨基酸或蛋白合成、终止信 号的核苷酸三联体。 开放阅读框:从 mRNA 5端起始密码子 AUG 到3端终止 密码子之间的核苷酸序列,各个三联体密码连续排列编 码一个蛋白质多肽链,称为开放阅读框架(open reading frame, ORF)。 顺反子:遗传学将编码一个多肽的遗传单位称为顺反子 (cistron)。 多顺反子:原核细胞中数个结构基因常串联为一个转录 单位,转录生成的 mRNA 可编码几种功能相关的蛋白质, 为多顺反子(polycistron) 。 单顺反子:真核 mRNA 只编码一种蛋白质,为单顺反子 (single cistron) 。 翻译的跳跃现象:翻译中读码框发生位移或核糖体跳过 一大段 mRNA 后 继续翻译称为翻译的跳跃现象。 信号序列:(signal sequence)所有靶向输送的蛋白质结 构中存在分选信号,主要为 N 末端特异氨基酸序列,可 引导蛋白质转移到细胞的适当靶部位,这一序列称为信 号序列 。 信号肽:(signal peptide)各种新生分泌蛋白的 N 端有 保守的氨基酸序列称信号肽。 线粒体定向肽:由核基因组编码的线粒体外膜蛋白的 N 端具有的一段肽链。由富含带正电的氨基酸和丝氨酸、 苏氨酸等。 基因表达:(gene expression)基因经过转录、翻译,产 生具有特异生物学功能的蛋白质分子的过程。 操纵子:(operon)是原核生物在分子水平上基因表达调 控的单位,由结构基因、启动子、操纵基因和调节基因 组成;通过调节基因编码的调节蛋白与诱导物、辅阻遏 物协同作用,开启或关闭操纵基因,对操纵子结构基因 的表达进行正、负控制。 转录衰减:(attenuation)是指转录可正常起动,但在 转录进入第一个结构基因前即突然停止的过程。由于这 一终止作用并不能使正在进行的结构基因转录中途停止, 而仅是部分中途停止转录,所以称为转录衰减。 2、填空题: 1.分子生物学的发展分为三个阶段:人类对 DNA 和遗传信息传递的认识阶段,重组 DNA 技术的 建立和发展阶段,重组 DNA 技术的应用和分子生物学的迅猛发展阶段。 2.对 DNA 双螺旋结构的提出贡献最大的三位科学家是 J.Watson, F.Crick, O.Avery。 DNA 序列测定法有两种,分别为 G:lbert 化学法, sanger 酶法。 4.PCR 仪的发明者为 Kary B.Mullis。 5.核酸分子由碱基,戊糖,磷酸三部分组成。 6.在 DNA 双螺旋结构中,氢键维持双链横向稳定性,碱基堆积力维持双链纵向稳定性。 7.OD260=1.0相当于50ug/ml 双链 DNA,40ug/ml 单链 DNA,20ug/ml 寡核苷酸。 8.DNA 的密度为1.7g/cm3,相当于8M CSCL 溶液的密度。 9.质粒 PSC101中的 P 代表构建该质粒的研究者或单位。 10.DNA 重组的种类同源重组,接合作用,转化作用,转导作用,位点特异的重组,转座。 11.基因工程中常用载体可分为三类质粒 DNA,噬菌体 DNA,病毒 DNA。 12.同一基因获取的方法有四种化学合成法,cDNA 文库,基因组 DNA 文库,聚合酶链式反应(PCR) 。 13.重组 DNA 导入受体菌时,对受体菌的要求为安全宿主菌,限制酶和重组酶缺陷,处于感受态;导入方 式有转化,转染,感染三种。 14.重组 DNA 技术操作过程可形象归纳为分,切,接,转,筛。 15.1958年 Meselson 等氮的同位素试验证明了 DNA 复制为半保留复制的机制。 16.复制的方向有单向复制,相向复制,双向复制。 17.参与 DNA 复制的物质有底物,聚合酶,模板,引物,其他的酶和蛋白质分子。 18.细菌的 RNA 聚合酶全酶的五个功能位点为 , ,。 19.真核生物的转录过程可分为识别,起始,延伸,终止四个阶段。 20.逆转录酶是一类非常复杂的酶,在其简单的一条多肽链上具有多种酶活性 DNA 聚合酶活性,RNA 酶活 性,DNA 内切酶活性,DNA 旋转酶活性,螺旋酶活性,tRNA 结合酶活性。 21.遗传密码的特点有连续性,简并性,摆动性,通用性。 22.基因表达是受调控的,可在多个层次上进行,包括基因水平,转录水平,转录后水平,翻译水平,翻 译后水平的调控。 三、翻译: 脱氧核糖核酸(DNA) , 超螺旋(supercoil), 正超螺旋(positive supercoil) ,DNA-dependent DNA polymerase(依赖 DNA 的 DNA 聚合酶) , 解螺旋酶(helicase) ,引物酶(primase) , SSB(单链 DNA 结合蛋白), DNA ligase(DNA 连接酶), telomerase(端粒) , cDNA(互补 DNA), teminator(终止子), UBF(upstream binding factor)上游启动子结合 因子, TBP(TATA box-binding protein)TATA 框结合蛋白, downstream elements(下游启动子元件), TF(transeriptional factors)转录因子, CTD(carboxyl terminal domain)羧基端结构域, EB(溴化乙锭), IF(起始因子), EF(延长因子), RF(释放因子), molecular chaperon(分子伴侣) 四、简答题: 1.证明 DNA 是主要的遗传物质的两个重要实验是什么? 1944,O. Avery 肺炎双球菌转化实验 1952,A.D Hershey 和 M. Chase 噬菌体感染实验 2.简述 mRNA 的结构特点和功能? 结构特点:1、大多数真核 mRNA 的5末端均在转录后加上一个7-甲基鸟苷,同时第一个核苷酸的 C2也是 甲基化,形成帽子结构:m7GpppNm-。2、大多数真核 mRNA 的3末端有一个多聚腺苷酸(polyA)结构,称 为多聚 A 尾。 功能:把 DNA 所携带的遗传信息,按碱基互补配对原则,抄录并传送至核糖体,用以决定其合成蛋白质 的氨基酸排列顺序。 3.简述 tRNA 一级结构的特点? 含 1020% 稀有碱基,如 DHU;3末端为 CCA-OH;5末端大多数为 G;具有 TyC 4.简述 tRNA 的结构? tRNA 的二级结构三叶草形(氨基酸臂;DHU 环;反密码环;额外环;TC 环) tRNA 的三级结构倒 L 形 5.简述原核生物和真核生物的 rRNA 的种类? 真核生物的种类有:5S rRNA,28S rRNA,5.8S rRNA,18S rRNA;原核生物的种类有:5S rRNA,23S rRNA,16S rRNA、 6.什么叫 DNA 的变性?变性 DNA 转化时会发生哪些变化? DNA 的变性(denaturation):在某些理化因素作用下,DNA 双链解开成两条单链的过程。 变性后其它理化性质变化:OD260增高;粘度下降;比旋度下降;浮力密度升高;酸碱滴定曲线改变;生物活 性丧失。 7.什么叫 C 值矛盾?C 值矛盾主要表现在哪几方面? C 值矛盾指基因组大小与机体的遗传复杂性缺乏相关性,即真核生物中 DNA 含量反常的现象。 表现在:1、C 值不随生物的进化程度和复杂性而增加, (如肺鱼的 C 值为112.2,而人的为3.2;与牛相近) ;2、亲源关系密切的生物 C 值相差甚大, (如豌豆为14,蚕豆为2) ;3、高等真核生物具有比用于遗传高 得多的 C 值, (如人染色体组 DNA 含量在理论上包含300万个基因,但有实际用途的基因只有5-10万个左 右) 。 8.简述鼠伤寒沙门氏菌鞭毛相转变的原理? 鞭毛相转变(phase variation):鼠伤寒沙门氏菌由鞭毛蛋白决定的 H 抗原有两种,分别为 H1鞭毛蛋白 和 H2鞭毛蛋白。从单菌落的沙门氏菌中经常能出现少数呈另一抗原的细菌细胞,这种现象称为鞭毛相转 变。hix 为反向重复序列,它们之间的 H 片段可在 Hin 控制下进行特异位点重组(倒位)。H 片段上有两个 启动子 P,其一驱动 hin 基因表达,另一正向时驱动 H2和 rH1基因表达,反向(倒位)时 H2和 rH1不表达。 rH1为 H1的阻遏蛋白基因。 9.简述 Ig 基因重排中 RSS 序列的位置及组成? 重链(IgH)基因的 V-D-J 重排和轻链(IgL)基因的 V-J 重排均发生在特异位点上。 在 V 片段的下游,J 片段的上游以及 D 片段的两侧均存在保守的重组信号序列(recombination signal sequence, RSS)。组成:1.共同的 T 核苷酸回文序列(CACAGTG) 。2.共同富含 A 的9核苷酸(ACAAAAACC) 。 3.中间为固定长度或12bp 或23bp 的间隔序列 10.以 Hind为例说明限制性核酸内切酶命名的原则? Hin dHaemophilus influenzae d 株流感嗜血杆菌 d 株的第三种酶 第一个字母取自产生该酶的细菌属名,用大写;第二、第三个字母是该细菌的种名,用小写;第四个字 母代表株;用罗马数字表示发现的先后次序。 11.简述载体的选择标准? 能自主复制;具有两个以上的遗传标记物,便于重组体的筛选和鉴定;有克隆位点(外源 DNA 插入点) , 常具有多个单一酶切位点,称为多克隆位点;分子量小,以容纳较大的外源 DNA。 12.简述重组 DNA 技术的基本原理? 目的基因的获取-克隆载体的选择和构建-外源基因与载体的连接-DNA 导入受体菌-重组体的筛选-克 隆基因的表达 13.简述 PCR 体系的基本组成成分和基本反应步骤? 组成成分:模板 DNA;特异性引物;耐热 DNA 聚合酶;dNTPs;Mg2+。 反应步骤:变性(95)-退火(Tm-5)-延伸(72)-变性(95)-循环 14.简述 DNA 的半不连续复制的机理? 顺着解链方向生成的子链,复制是连续进行的,这股链称为领头链。另一股链因为复制的方向与解链方 向相反,不能顺着解链方向连续延长,这股不连续复制的链称为随从链。复制中的不连续片段称为岡崎 片段(okazaki fragment)。领头链连续复制而随从链不连续复制,就是复制的半不连续性。 15.简述 DNA 复制保真性的三种机制? 1、遵守严格的碱基配对规律;2、聚合酶在复制延长时对碱基的选择功能;3、复制出错时 DNA-pol 的及 时校读功能。 16.简述 DNA 拓扑异构酶和作用机制的不同? 拓扑异构酶:切断 DNA 双链中一股链,使 DNA 解链旋转不致打结;适当时候封闭切口,DNA 变为松弛状 态;反应不需 ATP。DNA 拓扑异构酶:切断 DNA 分子两股链,断端通过切口旋转使超螺旋松弛;利用 ATP 供能,连接断端, DNA 分子进入负超螺旋状态。 17.什么叫端粒?其结构特点和功能是什么? 端粒指真核生物染色体线性 DNA 分子末端的结构。结构特点:1、由末端单链 DNA 序列和蛋白质构成; 2、末端 DNA 序列是多次重复的富含 G、C 碱基的短序列。功能:1、维持染色体的稳定性;2、维持 DNA 复制的完整性 18.什么叫端粒酶?其组成如何? 端粒酶(telomerase):以酶分子中的 RNA 片段为模板,在染色体 DNA3-端合成一段 DNA。 组成:端粒酶 RNA (human telomerase RNA, hTR); 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1); 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 19简述转录与复制的异同点? 20.简述细菌的 RNA 聚合酶全酶的组成? 2:465 kD; 和 亚基 :催化中心,构成核酸通道; 亚基:核心酶组装所需;也 与调节因子作用; 亚基:启动子识别,具有启动子特异性。 21.简述原核生物启动子的序列特点? s 因子能直接与启动子序列结合,-35和-10区距离的改变将影响 s 因子的作用,从而改变其始效率;不同 的启动子具有不同的其始效率。 22.简述细菌 RNA 聚合酶中 因子的特点? 重复使用(Re-usable);使 Holo-enzyme 识别 Sextama Box, 与模板链结合;修饰 RNApol 构型,降低全 酶与 DNA 的非专一性结合力(107/mol) ,增强全酶与 R, B site 的专一性结合力 (1014/mol),导致 RNA 链的延伸缓慢。 23.简述转录过程? 识别阶段:RNA 聚合酶在 s 亚基引导下结合到启动子上,DNA 双连局部解开;起始阶段:在模板链上通过 碱基配对合成最初 RNA 链;延伸阶段:核心酶向前移动,RNA 链不断生长;终止阶段:RNA 聚合酶达到基 因转录终点,RNA 和 RNA 聚合酶从 DNA 上脱落。 24.RNA 编辑的生物学意义? RNA 编辑能消除移码突变等过程带来的危害;能增加基因产物的多样性;和生物细胞发育与分化有关,是 基因调控的一种重要方式;可能使基因产物获得新的结构和功能,有利于生物进化;很可能与学习和记 忆有关。 五、论述: 1.论述 E.coli 的 DNA 的生物合成过程? 1、复制的起始。 a.起始复合物的形成:大约20-40和 DnaA 蛋白各带一个 ATP 聚集结合在4个9bp 位点上,DNA 缠绕其上, 形成起始复合物(HU 蛋白质帮助) 。 b.开链复合物的形成:富含 AT 的3个13bp 序列被解链。 c.前引发复合物的形成:DnaB 在 DnaC 帮助下结合于解链区,借助水解 ATP 的能量,双链沿5-3方向移 动,形成前引发复合物。 2、复制的延长。在 DNA-pol 催化下,dNTP 以 dNMP 的方式逐个加入引物或延长中的子链上,其化学本质 是磷酸二酯键的不断生成。领头链的合成:引物合成酶合成一段 DNA 引物。前导链和后随链合成的协调 一致,DNA 的两条互补链方向相反,为使后随链能与前导链被同一 DNApolIII 的不对称二聚体所聚合,后 随链绕成了一个突环形构象。 3、复制的终止。原核生物基因是环状 DNA,双向复制的复制片段在复制的终止点(ter)处汇合。 2.论述细菌 RNA 聚合酶及其转录? 细菌的 RNA 聚合酶(DDRP)全酶:组成 2:465 kD;2部分称为核心酶。 亚基: 核心酶组装的组建因子,促使 RNApol 与 DNA 模板链上游转录因子结合,位于前端的 因子使双链解链 为单链 ,位于尾端的 因子使单链新聚合为双链。 亚基:结合底物 NTP,催化 NMP 之间的磷酸二脂 键的形成,与 Rho()因子竞争 RNA 3-end,催化中心模板 DNA 结合,构成 RNA 聚合酶全酶后 因子 含有两个位点,I 位点:专一性结合 ATP 或 GTP,E 位点对 NTP 非专一性结合,编辑。因子:强碱性 亚基,促使 RNA polymerase 与非模板链(sense strand)结合,受 K 酶抑制,识别启动子。s 因子:重 复使用,使 RNA 聚合酶全酶识别启动与模板链结合,促进转录的起始,修饰 RNA 聚合酶构型降低了全酶 和 DNA 的非专一性结合力,增强 RNA 与识别位点的专一性结合力,导致 RNA 链的延伸缓慢。 亚基未知。 和 亚基是催化中心,构成核酸通道。 转录识别阶段:RNA 聚合酶在 s 亚基引导下结合到启动子上,DNA 双连局部解开;起始阶段:在模板链上 通过碱基配对合成最初 RNA 链;延伸阶段:核心酶向前移动,RNA 链不断生长;终止阶段:RNA 聚合酶达 到基因转录终点,RNA 和 RNA 聚合酶从 DNA 上脱落。 3.论述蛋白质翻译的过程? 1、翻译的起始。指 mRNA 和起始氨酰-tRNA 分别与核蛋白体结合而形成翻译起始复合物。 (一)原核生物 翻译起始复合物形成。核蛋白体大小亚基分离;mRNA 在小亚基定位结合;起始氨基酰-tRNA 的结合;核 蛋白体大亚基结合。 (二)真核生物翻译起始复合物形成。核蛋白体大小亚基分离;起始氨基酰-tRNA 结 合;mRNA 在核蛋白体小亚基就位;核蛋白体大亚基结合。 2、翻译的延伸。指根据 mRNA 密码序列的指导,次序添加氨基酸从 N 端向 C 端延伸肽链,直到合成终止 的过程。当与起始密码子紧邻的密码子被其氨酰-tRNA 上的反密码子识别并结合后,延伸反应开始。肽链 延长在核蛋白体上连续性循环式进行,又称为核蛋白体循环,每次循环增加一个氨基酸, 胞括以下三步:a.进位,又称注册,指根据 mRNA 下一组遗

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