抗体芯片在白血病研究上的应用

RayBiotech 抗体芯片在白血病研究上的应用 杂志名称: Leukemia(Nature 子刊) 文献题目：A telomere-associated secretory phenotype cooperates with BCR-ABL to drive malignant proliferation of leukemic cells 本实验所用产品：RayBiotech小鼠抗体膜芯片 AAM-CYT-1000 (96个炎症、生长、趋化相关细胞因子 ) 实验样品：细胞培养上清（不含血清）和细胞裂解液 研究背景: 端粒生物学对疾病发展和机体的衰老起关键作用。在人类癌症中，端粒酶促进癌细胞生 长，而端粒的缩短被认为是“双刃剑” ，端粒的加速缩短使得细胞衰老、DNA破损，从而抑 制肿瘤的发展。相反，端粒加速缩短经常发现在癌症晚期阶段，例如白血病，因此出现这种 假设，衰老使得端粒缩短，引起染色体不稳定导致病情恶化。 白血病进展的分子机制并不是很清晰，一个可能的原因是白血病干细胞的遗传不稳定性， 另外，白血病人的端粒重复区域有缺失，且端粒缩短的程度与白血病的发展阶段、对其治疗 的反应有关。且在白血病的晚期阶段，端粒酶活性水平升高，细胞周期调节基因发生突变， 有可能阻止后续的诱导衰老和白血病衰退。然而，端粒和CML病理生理功能进展背后的机制 仍有待阐明。 研究思路 1 细胞培养和BCR-ABL转染模型建立 细胞模型分组： CML-WT-未敲除端粒酶的小鼠白血病干细胞（具有端粒酶） CML-G2-敲除端粒酶的小鼠白血病干细胞（端粒未缩短） CML-iG4-敲除端粒酶的小鼠白血病干细胞（端粒显著缩短） CML-iG4sen- CML-iG4衰老细胞 2 测定细胞活性实验 生长增殖、周期、凋亡、衰老和染色体的检测 免疫分型、药物刺激实验 测定端粒长度 从图可以看出，白血病样细胞的生长依赖于端粒的长度，即使没有端粒酶的存 在，端粒没有缩短的情况下白血病样细胞还是会快速增长。端粒缩短后体外培 养很早期（6天）就会有细胞生长阻滞的现象。 CML-iG4，G1期增加， S期减少，表明细胞衰老，增值能力下降，推测 由于端粒缩短，导致细胞衰老，细胞衰老抑制了细胞增殖。 3 RayBiotech抗体芯片检测和microRNA芯片 蛋白芯片检测使用的样品为各组细胞培养上清（不含血清 ）和细胞裂解液 技术热线：400 008 5918； 电子邮件：support_ 网 址： RayBiotech, Inc.,Guangzhou The protein array pioneer company 基因芯片筛查后， CML-G2、CML-G4都与CML-WT的基因表达差异很大。 为了检测基因表达的改变，是否与炎症相关细胞因子的分泌增多相关，使用了蛋白芯片 检测细胞上清，结果表明炎症因子、趋化因子，白介素类、生长因子等，CML-G2 表达比 CML-WT增高，例如 IL1a, CCL5/RANTES, IGF-I /TNFRSF11b/osteoprotegerin, 与mRNA 结果 一致。将细胞上清的蛋白表达数据做散点图分析结果表明，CML-G4 细胞因子的表达整体较 CML-G2的细胞因子表达下降。 CML-iG4sen的细胞因子表达最为显著高，证明了 CML-iG4sen 衰老分泌表型建立成功。细胞裂解液的结果与上清一致。 4 数据统计： unpaired t-test 基因芯片结果 AAM-CYT-100 抗体芯片结果 2 AAM-CYT-100 抗体芯片结果 1 Statistics Toolbox of MatLab 2012b 结果： 研究表明，慢性粒细胞白血病样细胞的端粒中等缩短导致与增殖控制有关的促炎细胞 因子和生长因子的分泌增加，从而促进了细胞的增殖。在缺失端粒酶的情况下，端粒缩短至 关键长度后，可以诱导白血病样细胞衰老，从而减轻肿瘤进展。RayBiotech抗体芯片在探讨 这种机制的过程中扮演了非常重要的筛查角色，且芯片能从整体的、宏观的角度上发现细胞 因子改变与细胞表型改变的密切相关。 AAM-CYT-1000 (96个炎症、生长、趋化相关细胞因子 ) Axl bFGF BLC (CXCL13) CD30 Ligand(TNFSF8) CD30 (TNFRSF8) CD40 (TNFRSF5) CRG-2 CTACK (CCL27) CXCL16 CD26 (DPPIV) Dtk Eotaxin-1(CCL11) Eotaxin-2(MPIF-2/CCL24) E-Selectin Fas Ligand(TNFSF6) Fc gamma RIIB Flt-3 Ligand Fractalkine(CX3CL1) GCSF GITR(TNFRSF18) GM-CSF HGFR ICAM-1(CD54) IFN-gamma IGFBP-2 IGFBP-3 IGFBP-5 IGFBP-6 IGF-1 IGF-2 IL-1 beta(IL-1 F2) IL-10 IL-12 p40/p70 IL-12 p70 IL-13 IL-15 IL-17A IL-17 RB IL-1 alpha(IL-1 F1) IL-2 IL-3 IL-3 R beta IL-4 IL-5 IL-6 IL-7 IL-9 I-TAC(CXCL11) KC(CXCL1) Leptin Leptin R LIX L-Selectin(CD62L) Lungkine(CXCL15) Lymphotactin(XCL1) MCP-1(CCL2) MCP-5 M-CSF MDC(CCL22) MIG(CXCL9) MIP-1 alpha(CCL3) MIP-1 gamma MIP-2 MIP-3 beta(CCL19) MIP-3 alpha(CCL20) MMP-2 MMP-3 Osteopontin(SPP1) Osteoprotegerin Platelet Factor 4(CXCL4) Pro-MMP-9 P-Selectin RANTES(CCL5) Resistin SCF SDF-1 alpha (Shh-N) TNF RI(TNFRSF1A) TNF RII(TNFRSF1B) TARC(CCL17) I-309(TCA-3/CCL1) TECK(C