抗微生物药物和敏感性试验ppt课件

抗微生物药物敏感实验 1 第一节 临床常用抗菌药物 一、 抗细菌药物 二、 抗厌氧菌药物 2 抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性的抗生素 和化学合成药物。前者是真菌、放线菌、细 菌等的代谢产物，后者是经化学改造的半合 成抗生素和化学合成药物。 3 （一） - 内酰胺类 1. 青霉素类 2. 头孢菌素类 3. 单环类 4.头霉素类 5. 碳青霉烯类 6.- 内酰胺类 /- 内酰胺酶抑制剂 4 （二） 糖肽类 （三） 氯霉素 （四） 氨基糖苷类 （五） 大环内酯类 （六） 四环素类 （七） 氟喹诺酮类 （八） 磺胺类 5 （九）利福霉素类 （十） 林可酰胺类 （十一）恶唑烷酮类 （十二）链阳菌素类 （十三 ） 抗分枝杆菌药物 6 二、抗厌氧菌药物 硝基咪唑类 甲硝唑 （ Metronidazole） 替硝唑 （ Tinidazole） 奥硝唑 （ ornidazole） 7 第二节 体外抗菌药物敏感试验 8 一、抗菌药物敏感性试验 （ antimicrobial susceptibility test,AST） （一）定义： AST 是一个检测细菌耐药性的 体外抑菌试验（ ART） 9 AST （二） 目的 检出细菌对抗生素的耐药性， 预测临床治疗结果 预测 不是指体外测得的数据， 强调对数据的解释 临床 不是指体外 AST的结果， 强调病人用药后的疗效 治疗结果 用成功或失败衡量， 强调实验室与临床的统一 10 实验室 临床 评价 S 成功 正确的预测 R 失败 正确的预测 S（ FS？） 失败 错误的预测 AST 11 AST 体外 R 体内 R，对 R的结果可以相信 体外 S 体内 S，对 S的结果应持怀疑态度 12 （三）重要性 如果没有细菌耐药性检测 治疗过度：用药不当，过度使用高档抗生素 治疗错误：用药错误，危重患者丧失抢救时机 增加不必要的副作用 增加不必要的费用 增加细菌的耐药性 降低医疗服务的质量 13 （四） 方法 （ 1）手工试验 1.纸片扩散法（ S， I， R） 2.稀释法（ MIC） 3.E test（ MIC） （ 2） 自动仪器 Vitek， Microscan， Phoenix （ 3） 分子试验 PCR直接检测 mecA基因 （ 4）酶试验 Nitrocefin、 ESBL检测 14 （五） 结果的解释和报告 R、 I、 S、 MIC 时间依赖性 ： -内酰胺类，缩短投药间隔 浓度依赖性 ：氨基糖苷类，日剂量 1次应用 15 三要素 药物、机体、病原菌 相关性 体外和体内，抑菌和杀菌，单独和联合 预测性 耐药表型 (个体 ) 耐药机制 耐药表型 (同类 ) (预测药物 ) (同类药物 ) 重点监测的耐药菌株： MRS, PRP, VRE, ESBL 发出有选择、有解释的报告，与医师直接对话 16 小结 药敏试验 ASTART， 用体外试验预测体内结果 未经解释、就事论事的报告 经过解释、全面的报告 表型的检测 耐药机制 的检测、 耐药流行病学分析 临床用药 Medical choice Bacteriological choice 17 二、 AST的意义 * 可预测抗菌药物治疗的效果，即 AST实验 “敏感 ”时， 治疗可能有效；实验结果为耐药时，使用该药物治疗 肯定失败； 指导临床医生选择使用抗生素， AST的结果往往在给 予病人经验性治疗 24 48h之后，若 AST结果为 “敏感 ”，该治疗有效，若结果为 “耐药 ”，即应更换药物； 提供所选用药物的依据； 监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病 流行病学，控制和预防耐药菌感染的 发生和流行。 18 第三节 抗菌药物的敏感性试验 19 一、抗菌药物的选择 在标准中分成 A、 B、 C 、 U四组 , A组所列的抗生素为常规首选药敏试验药物 , B组为临床使用主要抗生素 ,尤其在医院感染时 使用的抗生素，可在下列情况下使用： 对 A组同类抗生素耐药； 标本来源不同时，如三代头孢菌素使用于脑脊液中的 肠杆菌，磺胺甲恶唑使用于尿道分离的细菌； 20 多种微生物感染； 多部位感染； 感染流行的控制； 对 A组抗生素过敏、耐受或无反应。 C组药物用于对 A组药物耐药的流行菌株或对 A组药 物过敏的病人和某些不常见的细菌（如肠外分离 的沙门菌属或耐万古霉素肠球菌）。 U组仅用于尿道中分离的细菌，不作为尿道外分离 菌的常规药敏试验。 21 (一）非苛养菌药敏试验抗生素的选用 A组一级试验并常规报告的抗微生物药 ,如葡萄球 菌属用苯唑西林和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药 ,如肠球菌 属用万古霉素 。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药，如葡萄球 菌属用氯霉素 。 U组仅用于泌尿道的补充实验的抗微生物药，如葡 萄球菌属用洛美沙星和诺氟沙星。 22 (二）苛养菌药敏试验抗生素的选用 A组一级试验并常规报告的抗微生物药 ,如肺 炎链球菌用红霉素和青霉素。 B组一级试验有选择报告的抗微生物药 ,如肺 炎链球菌用头孢噻肟或头孢曲松。 C组补充试验有选择报告的抗微生物药，如肺 炎链球菌用头孢呋辛 。 23 二、纸片扩散法 * （ Kirby-Bauer法） * 24 （一）实验原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的 琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分 溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度 ，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑 制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。 抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程 度，并与该药对测试菌的 MIC呈负相关。 25 26 27 (二 )培养基和抗菌药物纸片 【 抗菌药物纸片 】 直径为 6.35mm，吸水量为 20l 的专用药 敏纸片 . 含药纸片密封贮存 2 8 且不超过 1周。 【 培养基 】 水解酪蛋白（ MH） 培养基， pH为 7.27.4 ，琼脂厚度为 4mm,4 保存。 28 （ 三）实验方法 29 1.将在约 56 恒温的无菌 M-H琼脂倾 注直径为 90mm的平板，其厚度 4mm 。 30 2.无菌挑取孵育 16 24h的血 平板上 45个菌落。 31 3.置于无菌生理盐水中，校正其 浊度于 0.5 McFarland氏比浊管浓 度，细菌数量约为 1.5108 cfu/ml 32 4.用无菌棉签浸入 细菌悬液中，将拭 子在试管上壁轻轻 挤压以挤去过多的 菌液。 33 4.棉签在三个方向均匀抹 琼脂表面（每次转 60 ） 使菌液均匀分布，最后沿 平板内缘涂抹一周。 34 5.根据选择的菌株挑选 相应的抗菌纸片。 肠杆菌科： 氨苄西林、阿米卡星、哌拉西林 / 他唑巴 坦、头孢噻肟、环丙沙星、亚胺培 南、氨曲南、庆大霉素； 铜绿假单胞菌： 头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林、 阿米卡星、 环丙沙星 、头孢吡肟、亚胺 培南； 葡萄球菌属： 头孢西丁、青霉素、红霉素、万古霉 素、环丙沙星、庆大霉素、利福平 ； 35 肠球菌属： 青霉素 、万古霉素 、甲氧苄啶 /磺胺异 噁唑 、庆大霉素、环丙沙星、红霉素、氨 苄西林 不动杆菌属： 头孢他啶 、亚胺培南、阿米卡星、哌拉 西林 /他唑巴坦、头孢吡肟 、头孢曲松 、 环丙沙星、米诺环素； 洋葱伯克霍德菌： 头孢他啶 、米诺环素、甲氧苄啶 / 磺胺异噁唑 、美罗培南 ； 36 嗜麦芽窄食单胞菌： 甲氧苄啶 /磺胺异噁唑、左氧氟沙 星、米诺环素 ； 嗜血杆菌属： 氨苄西林、甲氧苄啶 /磺胺异噁唑、头孢 他啶、美罗培南、阿奇霉素、环丙沙星、头孢克洛； 淋病奈瑟菌： 头孢曲松、环丙沙星、青霉素、大观霉素、 四环素 ； 肺炎链球菌： 红霉素 、苯唑西林 、甲氧苄啶 /磺胺异噁唑、 克林霉素、左氧氟沙星、四环素、万古霉素 ； 除肺炎链球菌外的其他链球菌： 红霉素、青霉素、克林霉素 、 万古霉素、头孢曲松、左氧氟沙星。 37 6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌 纸片粘贴于 M-H琼脂的表面，一 旦纸片贴上，不能移动；各抗菌 纸片中 心距离应大于 24mm，纸 片距平板内缘应大于 15mm。 38 7.经过 3516 24h孵育