粪便涂片法检查菌群失调标准操作规程

粪便涂片法检查菌群失调标准操作规程粪便涂片法检查菌群失调标准操作规程 一、革兰染色液的配制（科氏改良法）一、革兰染色液的配制（科氏改良法） 共 5 种液体，分为结晶紫 A 液，结晶紫 B 液，革兰碘液，脱色液，复染液。 染液名称配制方法 1 结晶紫 A 液结晶紫 0.25g（研磨后） ，加乙醇（2ml，95%） ，再蒸馏水 98ml 2 结晶紫 B 液Na2CO3 1.25g，加蒸馏水 100ml 3 革兰碘液NaOH 0.1g 溶于 2.0ml 蒸馏水中，加 I2 2.0g ， KI 4.0g，再加蒸馏水至 100ml 4 脱色液丙酮 30ml+乙醇 70ml（95%） 5 复染液沙黄 2.5g3.0g 加入乙醇（95%）10ml，溶解后加入蒸馏水 100ml（或 用 10%石炭酸复红液 10 稀释即可） 二、涂片制作二、涂片制作 1、取样：、取样： 粪便标本送检时，观察标本性状，并“多位点”挑取或沾取粪便标本； 2、推片与固定：、推片与固定： 以 3040 度角推片，面积 11.52cm，自然干燥后，酒精灯上火焰上能过 3 次固定（制 作涂片 2 张，其中作为一张备用） ； 3、染色：、染色： 第一步，先加 A 液淹没标本，再加“等量”B 液混合，染色 1 分钟；水轻柔冲洗掉； 第二步，加革兰碘液，12 分钟；水轻柔冲洗掉； 第三步，加脱色液 20 秒到 30 秒，根据情况而定，如涂片稍薄时就适当减少染色时间； 水轻柔冲洗掉； 第四步，最后复染 30 秒，冲洗后晾干或吸干。 4、涂片制作注意要点：、涂片制作注意要点： 1、涂片不可太厚，亦不可太薄，太厚则细菌总数增加，且影响观察，太薄则涂片所见细 菌总数减少，厚薄如血膜为宜。 2、注意把握染色时间，好的染色是能够清晰准确观察的必要条件。 三、镜下观察三、镜下观察 1、确定涂片和染色情况：涂片要均匀，菌体不变形，革兰阳性和革兰阴性反差要好。 2、总览细菌总数：观察总数的多少，以及有无优势菌或真菌等。其评定标准见肠道粪 便检查图谱 。 3、观察 G+杆菌、G+球菌、G-杆菌、G-球菌比例：选定有代表性的视野，计数并判定其大 概比例（有经验者可根据经验判定） 。计数方法可选用纸片打孔缩小视野计数法来计数；亦可 选定有代表性视野，数一定数量的细菌，再计数各种比例。 四、结果判定四、结果判定: 请按照下表进行参照填写每个患者的菌群失调化验单（四联活菌肠溶胶囊临床试验专业） 评评 定定 参参 考考 标标 准准正正 常常 参参 考考 值值 I 度失调度失调度失调度失调 度失调度失调 分分 析结析结 果果 （检验师填 写） 大便大便 性状性状 正常成形或成型软便正常成形或不成形软便、 稀便 多数为程度不 等的稀便，也 可为粘液便、 水样便、脓血 便或柏油样便 多数为程度 不等的稀便， 也可为粘液 便，常呈黄 绿色或黑色 涂片涂片 所见所见 细菌总数 5005000/油镜视野 （计数 5 个油镜视野细菌数的均 值） 细菌总数在正常范围 （5015000/HP） 、正常低 值或略有减少 （101500/HP） 细菌总数明显 减少 （11100/HP） 或无明显改变 细菌总数呈 显著减少 （10HP） 革兰革兰 阳性阳性 杆菌杆菌 50.2%-74% 正常范围 低值 明 显 减 少 革兰革兰 阴性阴性 杆菌杆菌 35.29%-44% 多数会稍 有增加 革兰革兰 阳性阳性 球菌球菌 2%-10% 正常范围 高值或增 多 革兰革兰 阴性阴性 球菌球菌 0.5-5% 革兰阳性杆：革兰 阴性杆：革兰阳性 球：革兰阴性球= 50-74： 35-44： 2-10： 0.5-5 革兰阳性杆： 革兰阴性杆： 革兰阳性球： 革兰阴性球 = 50：45- 50：13- 30：5-10 革兰阳性 杆：革兰 阴性杆： 革兰阳性 球：革兰 阴性球 = 35- 40：50 ：30： 10 杆菌：球菌 3:1 1:11:11:12:12:12:1可能会出现比 细菌总数呈 显著减少， 粪便中原来 的菌群大部 分成员被抑 制而消失 口服四联活菌肠溶胶囊临床研究 SOP 第 3 页 共 3 页 （杆菌革兰阳性杆菌革兰阴性杆菌） （球菌革兰阳性球菌革兰阴性球菌） 例倒置 镜下印象：镜下印象： 1. 肠道菌群未见明显异常 2. I度菌群失调改变 3. II度菌群失调改变 4. 度菌群失调改变 五、其它说明：五、其它说明： 1、尽量用新鲜粪便进行检测，时间半小时之内，如果耽搁时间较长，可以取稍微量多的粪便 样本，取样时挑取中心位置的粪便。 2、遇粘液便，胨样便或水样便亦可采用牙签进涂片。 3、镜检时，应将涂片视野全面观览，不可只看几个视野