医药红曲菌代谢物对大鼠模型高血脂症的影响课件

10微生物 王晓然 l背景介绍 l降血脂机制 l实验目的 l实验方法 l实验步骤 l数据处理 l结果预计 l讨论 l劳动人民利用红曲菌历史悠久，早在1000年前， 中国人就利用红曲酿酒做食品。本草纲目对 红曲的药用价值也作了记载：其气味“甘、温、无 毒”，功用主治“女人血气痛及产后恶血不尽”。 l上世纪70年代，日本人远藤章首次在红曲中发现 了降脂物质monakolin K及其同系物，1976年第 一个他汀类药物美伐他汀(mevastatin)问世。 l阿托伐他汀是目前医药市场的中占有份额最大的 降脂类药物，它是化学物质全合成药物。 l红曲提取物降脂药以血脂康为代表具有极大的价格优势 l血脂康300mg12粒/盒最高价不超过20元 l立普妥虽然列入医保药品行列但最多报销20%，现在规格是10mg7粒， 全价75元/盒，最近在美国还因为遭到药片有异味的投诉而召回了19万余 盒 l上海已步入老龄化社会，年轻人养老压力大，孝敬父母，控制血脂，首选 红曲降压药 l高血脂很容易引起脂肪肝，从肝细胞的病理学组织 检查可以观察到高血脂对肝细胞的影响。 l高血脂还会会诱发许多心血管疾病，尤其是老年人 心脑血管已经老化，能引起脑卒中、冠心病、心肌 梗死、猝死的危险因素，是许多现代人健康的杀手 （本人甘油三酯高）。此外，高血脂对肝脏有损害 ，引起高血压，冠心病。是形成动脉硬化的主要原 因。 l降血脂的方法众多，食疗，运动等因人而异，而药 物治疗是有明确的药理学数据的 l红曲菌的代谢产物monakolin K可以抑制甲基戊二酸辅酶A(HMG一 COA)还原酶的活性。 lMnoaoclniK还能增加胆固醇的分解代谢.人体中有80%的LDL(低密度 脂蛋白)是通过细胞表面的LDL受体清除的，细胞表面的LDL受体的 合成速度与细胞内胆固醇的量成反比关系。由于MnoacolniK能够抑 制胆固醇的合成，从而降低了肝细胞中胆固醇的浓度，而肝细胞中 胆固醇浓度的降低又刺激肝细胞中LDL，受体的增多，使生物体从 体内循环中清除掉LDL和LDL前体，降低血浆中LDL水平，同时它还 可以抑制LDL(中等密度脂蛋白)和LDL中脱辅基蛋白aPo13一100的 合成，从而降低GT(甘油三醋)、脂蛋白等物质的合成和分泌 l衡量血脂高低的标准主要指标 血清甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇(HDL- C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C） l人体内总胆固醇仅有1/3来源于食物，大约有2/3是由肝脏 和小肠合成的. 在胆固醇的合成中，约有25种酶参加反应( 刘万臣，1995)， l在胞液中，3分子乙酰CoA能合成HMGCoA这种物质。形成 HMGCoA后，合成胆固醇中最为关键的一步是HMGCoA在 HMGCoA还原酶作用下还原成甲羟戊酸(MVA)，然后再经一 系列步骤合成胆固醇和其它产物。 l由于MnoacolniK含有一个与HMGCoA极为类似的基团，因 此它在体内与HMG.R的一C00H末端相互作用，使HMG.R产 生一个MnoacolniK的结合位点，然后再与HMG.R的活性位 点结合，在空间上阻碍底物的结合，从而竞争性地抑制 HMG一CoA还原酶(而此酶催化胆固醇合成中的限速步骤)， 进而抑制了胆固醇的合成，但它并不阻碍NADPH的结合.(黄 宏南，2006) l通过建立大鼠高血脂及脂肪肝的模型，分别给 予红曲提取物monakolin K低中高剂量组，再 给予以阿托伐他汀为参照的治疗组，与不给药 的空白组作参照比较降脂药物的效果。 l取尾血测定血清总胆固醇水平(TC)、血清甘油 三脂(TG)、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) l1.材料 l实验动物：清洁级SD雄性大鼠60只，自由饮水，实验时随机分组，分笼 饲养。 l高脂饲料：猪油(12自制)、胆固醇(2)、丙硫氧嘧啶(0.2)、3号胆盐 (O5)、普通混合饲料粉（853)组成。将以上各物先人工充分混匀 ，再经搅拌，压成圆条状颗粒，置冰箱冷藏备用 l普通饲料：喂食空白组 l红曲提取物溶液，用HPLC测定莫纳克林K的含量，根据含量，配制高中低 浓度溶液。根据文献记录，配制（红曲提取物/蒸馏水）30g/L （低） 、 60g/L （中） 、120g/L （高）溶液。 l治疗组溶液：取立普妥片剂（辽宁大连辉瑞制药有限公司，批号XXXX）制 成0.01g/kg溶液，用于用于给大鼠灌胃 l2.建立大鼠高血脂模型 l购进的SD大鼠在动物房适应一周后禁食12小 时，称体重，取尾血测定血清总胆固醇水平 (TC;)根据大鼠的血清TC水平和体重随机分组， 分别是空白组，安慰剂组、低剂量组、中剂量 组、高剂量组、治疗对照组每组10只。该模 型能很好地使大鼠出现高血脂症状，并诱发脂 肪肝。（李幼宝，中药药理与临床，2008； 24(6)） l实验大鼠适应饲养环境后，全部喂食高脂饲料，实验期为28 天，分别在第14和第28天时称体重。同时对各组的大鼠灌以 低、中、高剂量红曲提取物溶液，每只大鼠按10ml/kg体重给 予受试物灌胃，因为每只大鼠平均体重为160g-200g，分别相 当于0.3g/kg、0.6g/kg、1.2g/kg的剂量溶液，用于给大鼠灌 胃、阿托伐他汀溶液，安慰剂组灌以蒸馏水。空白组喂食正 常饲料，不给药。 l实验期28天，分别在第14和第28天时称体重，取尾血测血清 甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）。 l28天后取各组中的老鼠的肝组织切片，观察高脂饲料以及给 药治疗后对肝细胞的影响 组别 14天测试结果28天测试结果 TGTCHDL-CLDL-CTGTCHDL-CLDL-C 空白组 低剂量 中剂量 高剂量 治疗组 安慰剂组 l根据文献，从各组的血脂指标看，红曲提取物 的降脂效果不如化学合成药物，在实验中只有 TG水平有较大差别，而低剂量组与安慰剂组 差别很小，但是中剂量组和高剂量组应该能与 安慰剂组有明显差异。治疗组与空白组的差异 应该最小，而与安慰剂组差异最大。最终差别 可以从大鼠肝组织的切片分析中发现差别 l该实验有一些不可靠之处，红曲提取物的制作工艺 对最终的疗效影响大。实验中高中低剂量组只能通 过红曲提取物的质量，而不是其中有效降脂物质的 量来区分剂量，而且对红曲