实验三_白喉杆菌厌氧菌分枝杆菌 病毒及其它微生物课件

实验三 白喉杆菌、厌氧菌、分枝杆菌 病毒及其它微生物 HA - hemagglutinin （血凝素） 病毒的血凝试验 血凝素（hemagglutinin HA）：由病毒基因编码的糖蛋白 刺突。与病毒吸附和传入宿主细胞有关。HA能与人或其 它动物多种红细胞表面N乙酰神经氨酸酶受体结合引起 红细胞凝集。 滴定病毒的血凝效价，采用一定的病毒量，通常采用4个 血凝单位。 孔号 12345678 9 生理盐水 （ml） 病毒液 （ml） 0.9 + 0.1 0.5 + 0.5 0.5 + 0.5 0.5 + 0.5 0.5 + 0.5 0.5 + 0.5 0.5 + 0.5 0.5 + 0.5 0.5 0.5弃 掉 病毒稀 释度 11012014018011601320164011280 对照 鸡红 血 球细胞 悬液（ ml） 各0.5ml 血凝试验（血凝效价的滴定) 将有机玻璃板孔从19进行编号，从第1孔起至第9孔，按下表加。 将病毒液按下表进行稀释。 自第9孔开始反方向向前每孔加入0.5%鸡红血球0.5ml，摇匀后放置室温45分钟 血凝试验结果判定 结果判定：薄层（凝集） 圆点（不凝集） 凝集特别显著：“” 凝集现象次之：“” 凝集清楚可见：“” 稍显凝集者：“” 血凝单位：呈“”凝集时的最高稀释度。此时 的稀释度即为1个血凝单位。 原理 病毒引起的血凝现象能被相应的抗血凝素抗 体所抑制，称血凝抑制。利用血凝素特异性 抗体与病毒表面相应的HA相互作用，使病毒 血凝现象抑制的试验称血凝抑制试验。 4个血凝单位的病毒液 血凝抑制试验 血凝抑制试验结果判定 测定孔：圆点 （不凝集） 薄层（凝集） 血清对照孔： 圆点（不凝集） 病毒对照孔：薄层（凝集） RBC对照孔：圆点（不凝集） 血凝抑制试验效价：呈完全血凝抑制的最高血清稀 释度。 血平板庖肉培养基 牛奶培养基 破伤风 梭菌 37 48h，薄膜状爬 行生长物，边缘不齐 ，伴轻度 溶血 肉汤混浊，肉渣 部分被消化，呈 灰白色 产气荚 膜梭菌 菌落平整，光滑，边 缘齐。有双层溶血环 ：内层完全溶血( 毒 素引起)，外层不完全 溶血( 毒素引起) 分解肉渣中糖类 而产生大量气体 。 分解乳糖产酸，指 示剂变黄，培养基 凝固,产生大量气体, 呈蜂窝状,将液面凡 士林上推,甚至冲走 管口棉筛。“汹涌发 酵” 示教：破伤风梭菌及产气荚膜梭菌的培养特性的培 养 特 性 示教：结核分枝杆菌的培养特性 专性需氧，最适37 ，营养要求高，生长 缓慢，18h分裂一代。罗氏(Lowenstein- Jensen)培养基含蛋黄、甘油、马铃薯、无 机盐、孔雀绿，26周可见菌落生长 菌落特点：菜花、颗粒或结节状菌落，乳 白色或黄色，不透明。 抗酸染色法抗酸染色法(acid-fast stain) (acid-fast stain) ：以：以5 5石炭酸复红石炭酸复红染色，再染色，再 用用3 3盐酸酒精盐酸酒精脱色，然后用脱色，然后用美蓝美蓝复染，则复染，则分枝杆菌呈分枝杆菌呈 红色红色(+)(+)，其他细菌和背景物质为蓝色，其他细菌和背景物质为蓝色(-)(-)。 实验过程：取痰液实验过程：取痰液 涂片（略厚）涂片（略厚）干燥干燥固定固定 石石 炭酸复红染色炭酸复红染色810810分钟后分钟后用用3%3%的盐酸酒精脱色约的盐酸酒精脱色约1212 分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止 水洗水洗 后，用碱性美蓝复染后，用碱性美蓝复染1 1分钟分钟水洗，印干水洗，印干 镜检镜检 结核分枝杆菌抗酸染色法抗酸染色法示教片 Fontana镀银染色：镜下可见棕褐色两端有钩的螺旋体，菌体整齐 ，粗细均匀，呈“C”或“S”型，螺旋不明显。 钩端螺旋体Fontana镀银染色法法示教片 内基小体示教片 黄曲霉 示教：真菌的培养特性 多细胞真菌：观察气生菌丝，营养菌丝，