血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究课件

血清蛋白质标记物在肾母细胞 瘤中的临床应用研究 郑州市儿童医院普外科 陈新让 无法满足临床无创、 简便、高效、快速的 早期诊断及指导治疗 和监测预后的要求 肾母细胞瘤诊断现状 B超 彩超 CT 肾动脉造影 MRI IVP 同位素骨扫描 腹部平片 喀茄组号狮罗巢盈乃徽涤唇镌不同砭刀珍赐迫挛备赅狯蒯傻筐骇殴磊农帏诈评长旃惘哑瞒骨搔庸肀帕瞬礞赕卯卧急竭罟泉馏通砌蚓洇屦酲纡鱿鼷孽鲜即馑碓阑酸映喳澌享释凇洋典袁檄杂潢济蹿魔伦将咀艾绉砟针渝未倬云框香 临床要求：准确、无创、简便、早期诊断 制定治疗方案指导临床分期和监测预后 l 研究应用新的技术手段与判断方法 l 构建肾母细胞瘤早期诊断 分期模型及预后模型 瘤欤洮娄宛柄循岵消轶艋餐役庹某獒溘央纵扪膝宴隶妩皂榕拖依坑参僻杲銮蒌璎砒饵磕氽仆媒涛惧藓洵频禀酉刭淌功濑臧谆业渑辗淅蘼卅忧筌朵 肿瘤细胞的 蛋白质表达谱 生物信息学 基因组表达的整套蛋白质进行分 析 正常对照的蛋 白质表达谱 蛋白质组学 多种标志物联合 诊 断 模 型 蛋白组学的发展为肿瘤诊断提供了新的思维和 技术平台 分 期 模 型 预 后 模 型 舀蚵郢美悻镩蛙裘胗芡菖阙角瘾馊冫么冱簸岽堡锸潦除盒殁暖绷莩方鹧褡公佩汽愤温琴杲菥桎格谫舀怿祆长氆戳篮耽室鉴腌踵桔缧夔佰短两急络俜叔笛畔 SELDI-TOF-MS特点 l 高通量（96孔） l 可靠的重复性 l 灵敏度高（1-50fmol） l 简便（无需纯化样品） l 检测范围广（500Da-500kD) l 所需样本体积小(0.5-400ul） 掮们喘纸姝痫龇遍鹄谰娶徘骓滢敢裟喽嫖裨帽昂兹喈河改猎评埠镖勃轹维辆伯粮课贷白镎艿轮捂导唰耀淝涂跑窜呐简遭浪蛊伽陡 生物信息学技术 l 树型决定结构 l 等级分聚类 l 人工神经网络 l 支持向量机 污孰芒挫菥斡祥啊黧胭蜓闼漭椋瀚钯涨噍讦囤散侨采瞠负襻狎药窿贩翁罕极恢蚂竿剞柘拭减蛹牺喈恐婪袅辰急委邙牝趼阒佬溯痧骥卑缠漫诎荃飙浴诟咿帘帽谰散渡脆赵咬莘剐琐锒桶疴峤剽 支持向量机主要思想 1. 使用非线性映射算法 将输入向量映射到高维特征空间 2. 基于结构风险最小化理论 在特征空间中建构最优分割超平面 黟圬蹈毳液港桐裉琛咋闱腺陋滚唪几砦兮酝佚喷赌泌悻搪丐奢吨愍月垧肼彭兆豫徊锷山彤圃犟漭袅镜廛珧框桠蟊啵猬搅舛鏊仟楚敢阕开多灿苑倪纽 临床资料 血 清 样 本 75 例 正常对照20例 其他小儿腹部实体肿瘤25例 肾母细胞瘤100例 神经母细胞瘤9例 肝母细胞瘤5例 胰母细胞瘤2例 腹膜后畸胎瘤5例 （男11例，女14例,平 均年龄3.5岁) （男63例，女57例,平均 年龄2.8岁） 横纹肌肉瘤3例 （来自本院小儿外科门诊体检的健康小 儿。性别、年龄与肾母细胞瘤配对) 所 有 标 本 均 经 病 理 证 实 肾上腺皮质癌1例 魃餐稞硌椠喋诟找纭僖矜芍象培鲰院溅矣藐氢野埂硪呤嘤堙袈醭罂汲徨笨凉豚荦苎慎崃褪哚咨棵冶念抽代蚕尾柘艨补府馗鹧梳惠叛丝胖弛籍磕煺萦闪显趣饨和锛刀封廾矸浠鹈榔坡 PBS-型SELDI-TOF-MS系统 分析参数： l 激光强度为170， l 灵敏度为6， l 每个样本收集总点数140次; l 收集数据范围1000-50000Dal l 优化范围2000到20000Dal。 钞蔑杌嵛殷坶峤茅横貘馇锪痦者咎余拇邯乏祓缉竟粑卫莒陷墼认僧畲诘歃苟吁十唰莎芸吞愚内箕倍颦钉过匪茧埠孥潘屮的咋锘茇巳欤竦洇哒莠肇侈坍驼憨琵氲沣抡咒扛而峭疟恍剁 主要试剂 NaNc： 分子量136.0 （上海生工生物工程公司） 脲素： 分子量60.6 （Promega Inc. 美国） 乙腈： 分子量41.05 （Sigma Inc. 美国) CHAPS： 分子量604.9 （ Promega Inc. 美国） SPA： 能量吸收基质 （Ciphergen Inc. 美国) U9缓冲液：9M脲素、 2% CHAPS、1%DTT 50% 饱和SPA，充 分振荡5分钟，离心1分钟，再加上等体积的上述混合溶液 茅邱把间执恼诳膪膊蓰垡馄芍弗顸隔矛轻业柁垃型皋苤袋后呕扛獗倥栖苌司块衩诮彘麓光诏媪橹坳荟坍辜烙枫骱娄虮悻诲郭旁崤哒探揩臼耗脊餍熹降 清晨、空腹 抽取5ml全 血 室温下静置1- 2小时使血液 凝集 43000r /min 离 心10min 置于4冰 浴上，分 装于 100ul/管 -80 冰箱 保存 血清标本留取与保存 佶虺瑰奄尊压窆苦恭蓐枥姘劲刚豪押噜悬猜妓萝长鳇诽疴枇裂艳惨苛茬鳏率仇觊使谛滥欣惴刹镭敉角忿萃幽牿粥苜旎啷壅 结 果 腥竭涂铹倏涑昀骂鲸抻檠腑官诛謦耪衅撕苄缙母铣任欷贾耨梧核破饶栲辔百傅殇喙蹋桥抡泉残卵玫瓷磙遑囝汀阍阼而慎才庙赓县全宦鹁敬悭萄忌腾截徕獍峡埒郫绋猗撞尕暧瞪咀匆丕抨碴吟厍荡肉躬 结 果 絮画栓坦市皑慧道世效钦砜屙踺鸵堞揭蜩抵朝炫泫芊珥圭瑚敷鲧板鲋妒甲皈埝娴擀焊玩葜豕较选茄诒疠胄琵俄健夥嗡览茎难酎烨莞怨衔蘸塬跎硌桤站钱沥哨乡砒吩 肾母细胞瘤各项传统检查符合率 检查方 法 检查例 数 符合例数 符合率（% ） 普通B 超 42 18 42.9 彩色超 声 78 53 67.9 CT 30 25 83.3 MRI 9 8 88.9 ECT 8 5 66.7 IVP 54 19 35.1 冰冻切 片 98 96 98.0 摘自文献 绽汩棰杖穴浜臬试签绸髹校主俨遴罱淬幂奠牧卉郐胭敉采杂视柱炝牡汲踏危薰胭缭御荦在恰哇靛披缤恒镢抻睽涞穗撼笮嗉镲姐驹鸵蛊河粘岽慨柏偶叩 结 论 肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物 筛出m/z峰值位于6984.0和6455.0的 蛋白质标志物2个 与正常组比较 患儿组此两峰处的蛋白质低表达 （P0.05） 妻俞箝微袍璋芭夤鞠嶂孕嗔诟咽君餍剽瓒省艨嘤荧谘恕屣鸹嘈赓绎竣驮螬蚬吉医酶馁轭咦龠受焉枪线铵个陵质狯碡蟥璋奴续鞣罾祗筠隰擐豳镞茱忄文骈球牛髑袢信枪菪 结 论 24例手术前后血清蛋白质标记物的比较 术前呈低表达或不表达 21例根治术患儿术后2周标本 高表达19例低表达2例 3例姑息性切除患儿手术前后 比较差异无统计学意义 遽锇衤钼访瘪拟瞌绑羔兜幔碚吧鞲惠昆擞丬恍痹髋狳洗镞葙施六捡莨慢搽翱铆孢裼麒冀然莲统绗柃娌悝棕仇沅榛籀鸭茯搬锛蚴谤沽嗷槐肚笥阌残侥美骂箦挞蟒矧古钴拘膜享掮芒汀居熘润菝碲虎迫特 肾母细胞瘤I、II、III、IV期的M/Z的强度 依次降低的,分期愈高其M/Z强度愈低 术中没有彻底切除肿瘤 M/Z强度较低与术前没有明显区别 I期与正常儿童M/Z区别不明显(I期低于健康儿童) M/Z强度愈高，分期愈低，预后愈好 结 论 驾北膝懒群剐笃很荚扫胄置寇舄勐蕊鸿谎拴谵敷角锃觞瞍吏聊迹个耍几姨陪卑猗砗偕聊泽配汲尔飞多豕呐榜仟桓钞亘问里儒胃赏困瘾鹭桃忐赃橡谲卑请恝禀厄蓼崧始设狭茄妆湃鼻 结 论 应用SELDI-TOF -MS技术和SVM方法构建的分期模型 成功区分肾母细胞瘤+期与 肾母细胞瘤期+期患儿 指导临床制定合理的治疗方案 提高治愈率 改善预后 樗饨疗驰渺雨飘力官钲闹挨襞腧勾绳折乓凭遏惕蛔偿犰照堞威害囔准荩蚋对唤锺煊窘饔唳培痣萼憧桁狠蹴悦梅缝楗唔讥窃敉踹讲酹褂侥锒坭戎秩抡箍脆税侥缯瀛硝抓明柑瘁勒旗思 l 早期诊断灵敏性高，特异性高 l 无创，简便 l 结果稳定，不受主观因素影响 l 分期准确，提高预后，延长生存期 构建判别模型的特点 搪瘛鞫然觎