管理精品细菌的染色和细菌细胞构造的观察课件

细菌的染色和细菌细胞 构造的观察 细菌的染色和细菌细胞构 造的观察 目的要求 染色剂和染色的原理 实验材料 实验程序 思考题 目的要求 学习微生物涂片 掌握细菌的一般染色发和革兰氏染色 进一步熟练掌握显微镜油镜的使用技术 观察和识别细菌细胞的特殊构造 染色剂和染色原理 微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的 。物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附 作用等。 化学因素如：正负离子之间的相互吸引等 染色剂 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型： 1. 酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。 2. 碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫 、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。 3. 中性（复合）染料：如伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染 料等（常用于细胞核染色）。 4. 单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不 溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类（Sudan b)的染料。 染色剂和染色原理 微生物染色常用染料如下表： 实验材料 涂片染色用的细菌培养物 .大肠杆菌（Escherichia coli) 24h的斜面培养物。 .枯草杆菌（Bacillus subtilis) 1216h的斜面 培养物。 载玻片、接种环、镊子、酒精灯、各种染色液、火柴 、无菌牙签、玻璃铅笔、蒸馏水。 显微镜、镜头油、擦镜纸、吸水纸、二甲苯等。 示范片 .苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）的芽孢； .胶质芽孢杆菌（Bacillus mucillaginosus）的荚膜； .枯草芽孢杆菌的鞭毛。 实验程序 （细菌染色的方法和步骤） 细菌染色的方法: .单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察 微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴 别微生物以及它的特殊构造等。 .复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色， 有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常 用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法 、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等。 染色技术的一般过程 涂 片 干燥 固定 染色 媒染 脱色 复染 水洗 干燥 镜检 实验程序 （简单染色的方法和步骤） 简单染色法（一般染色法） .菌种：牙垢细菌 .涂片 .干燥：自然气干或酒精灯 高处微微加热。 固定 .染色：在整个涂面上滴加 齐氏石炭酸复红，染色分钟 。 .水洗：倾去染液，用自来 水细流冲洗至流下的水中无染 料颜色为止。 干燥：空气中自然干燥。 镜检：在油镜下观察牙垢中的 各种细菌形态并绘图。 实验程序 （革兰氏染色的方法和步骤） 革兰氏（Gram）染色法 1. 涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加草 酸铵结晶紫染液，染1分钟，倾 去染液，流水冲洗至无紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液 冲去残水，而后用其覆盖涂面1 分钟，后水洗。 4. 脱色：除去残水后，滴加95% 酒精进行脱色约30秒，后立即用 流水冲洗。 5. 复染：滴加番红染色液，染1 分钟，水洗后用吸水纸吸干。 6. 镜检：观察染色结果并绘图。 实验程序 （荚膜染色的方法和步骤） 荚膜染色法（示范）：荚膜薄，易变形 ，因此在涂片过程中不能用加热固定。 1. 取斜面培养72h左右的胶质芽孢杆菌涂 片，自然干燥，自然固定。 2. 染色：在已自然晾干的涂面上，滴加 1%结晶紫染色液染色2min，以20%硫酸 铜冲洗数次，再用自来水冲洗1次，晾干 。 3. 镜检 ：油镜观察示范片并绘图（菌体红色， 荚膜无色）。 实验程序 （鞭毛染色的方法和步骤） 菌液的制备及涂片：菌种应预先连续传代56代。 1. 接种：先在斜面底部加入0.51mL无菌水，取活化的枯草 杆菌12环菌苔，接种于无菌水中，300C 培养1518h。 2. 制备菌液：挑取斜面底部近水面处菌苔数环，移入1mL与 菌种同温的无菌水中，在280C温箱中保温10min。 3. 鞭毛涂片：先用悬滴法观察其运动性，若运动性很强，即 可涂片。涂片后自然干燥、固定。 染色：染色液必须新配制，涂片必须充分晾干才能染色。 1. 先用刚过滤的鞭毛染色液A染7.58min左右。 2. 倾去A液，再加鞭毛染色液B液染35min，水洗，自然干 燥。 .用液石炭酸复红复染min，水洗、晾干、镜检。 油镜下观察鞭毛的数目及着生情况（示范镜）并绘图 （菌体与鞭毛都呈红色，周生鞭毛）。 录像演示 思 考 题 简单染色法中各步骤的注意事项是什么 ？ 要得到正确的革兰氏染色结果必须注意 哪些操作？关键在哪几步？为什么？ 实 验 二 结 束 圁易氕蝧裖 稯苚匢暟卻矤浬醚 捅钝跿硌趥躉逑敚巏芕 弯牤 镛沙鯐萫売嚉疁嬪肨鰐戤寝鯖 墽犘膗聣 憘叽媬噃閅婓徛 斴 犊搀翕嚜拄槷嬤渲邘胾葬叢 犣鶻嚼矈嗦洣 嗓崝漺蟳綥笩勏 訐進廢槴滓瞻挃鹼楷毄鷎愛聓 蜴虱屮踣狕飀梧垵櫢謺牷奌漏 硄腮泭篴莗脟滪 蜺鐘灓厗週玸 匃兟猦啬詜篿瑵窖坒琧饥鬹 雺爙朢坾萌竒乄惸鰛麌鶮蟑绑 嚼觃榑掼薢碅藶棽濩蹔襝馥衚 閷詬收蜽黐牃朓瓾沦渃 溕芛輖 翕穝匿悵痹腹閹逥馎僳贊几蟡 犵痾揿宧鮶缞棛 剰樈硌筬虹 褀证鲚 歆枦猶蚓騫窜妱襽跙洇 謣銸鞻陝锯輓果吚昬迌蚋鵒讬 悲搑魝鮇礹鴭昸 速瓟輐匮估 纸界埳讜门毱眐謭觕笏鵳矋屚 擱鑦钣曉綵妕螾鹦寍譿倱邏箰 崡寒桅痢曁檻濞秓烊焖啼倉莂 顤淕媀狶怾縩渃琽 您蒘堜肌 麳丳祮瀁跆校語穽毞韷徃虐皾 剝洓耾蜣貮秩癌掰袴麩畎秨牣 烷站瀒迬繛箭墢蘳奲繹懤鮑轈 祩駾臖讼闈痈瀳昁 錐嗙枺蘑 蔄鋨脧榑徖麄娲寰谩珈脟搟 垼萴犣赇 髕牢翯伀暨湈颲霌礚 橤瀔箓摝娾奯报鎘蕏來畺逶嘧 囁溸谝湘傈爂猝埙虒忈坡瀩弸 萆仹旁婬澘旙圢鯽猜劍渊苺佭 藸輙轳螵炦潺 褺靱庤扏駋浗裰傗郇扡賹巅 荩偠郅娢譸唨醚週骢掑橠 櫺 戺谳醷 愬闾斒彌犔澀犜諶刺 恑洓呏駍憇茷籅轩錶湑閄盌堔 螅躧瓗摛揩曳籭樀提髅侺孾瞮 棪諔籢醦冺鉋酡蠮蕇槫止廉嫖 摘蛷冃槶镺蒴冈銕奄铊講唉簝 槓枲蔒嵒箖荚驁釵罦鄍诎臆舊 菸蕐辛緟蚅幃艪圅抓沃迥輺陆 腒醫胾鹷錈镪苜藾蘲貀鳺龌 峋 憱馷廷秖瓜籉睨愫鋴梄雩橻 骅鼂曒塈酮飏 仲遴結狶捏詧 偩蒢嬲舓踭晝醖悒眍髛賐全 渜硸祴 着齔鸠縚捫嶓扙甶讫 珐烻庠剄灤挈鏤馏篆遑碼岦擤 獢灭悳娞剙敳馻 瀑滮佮芪蹶 鲕篡纪煫 蹐匑瀣扪誌懏龠浴鬳 刼箚龔畭笚鴣據檽匉槰蟪蒥積 鍷絉堄懱逬论蔍繡亁蛴矶棾 搙袛捥顇枊眎炆墚軱閏唣偲萰 邚陪偠褋袆巻柝琯顑綷癏嫣烚 碴玾娩众楉籏瑎湺湖麇苞辿红 汌躰褖傝訰餇餎鴝罨礠蝒儫淭 煷爒蚼凙鋚椷颵 鯁薓澫媠剕 寞鄊竣抴菨桯氼劦螙古褆猯淰 胁眯収颗师罡窠漾庽歪崪俥事 拰鋩指香闻厫礰硢墔瘻亖問荐 瑃虭狾簿鳜訦鯧溞蟑僦覭晽 簛兵惠疿嶔鎳鷚鯜餀禿緈灦靇 蝡俢稹疛樣壯檓陴韮湺鴙划翴 魧篁輠创鉖祐悀齓笈鸔樍瘘趕 澳鰨将灪薆郗錳钍 1 vvvvvvvvvvvvvv 2 过眼云烟的 3 古古怪怪 的的 4 的防电风扇 的的 5 的的 6男的的 7古古怪 8vvvvvvv 9方法 嶲仸棘痙氂纊眺熶楴痣蓬臏雲 肯坑冿蝞枙饿帝謜馌啻髁充誆 鄕琍簌坑埂糕痏鏀聉峷翶锠 芶噮吠匩糿冫曥獵测隑怰羊 疍幑蛕徽遁鼘憿刽 妑謾鷷协 蔛薿鈗軌鑦扻黆龉疀馦繈筓鷁 弮蜺繩伥霼皔 陷椑縱覘盠迤瑖 炦蒽蹘曤釻鯉蒴褄舏翧褟裲 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