2013年球菌5月课件

教学要求： 掌握：葡萄球菌的形态、染色、培养、分类、抗原结构、 金黄色葡萄球菌的致病物质、所致疾病、微生物学检查； 链球菌的形态、染色、致病物质及所致疾病；肺炎球菌的 形态、染色、培养、致病性；脑膜炎球菌的形态、染色、 致病性。淋球菌的形态、染色、致病性。 熟悉：葡萄球菌的抵抗力、凝固酶阴性葡萄球菌的致病性 ；链球菌的培养及分类、微生物学检查；甲型链球菌与肺 炎球菌的鉴别；脑膜炎球菌的培养、抵抗力、特异性预防 ；淋球菌的培养、抵抗力、脑膜炎球菌与淋球菌的鉴别。 了解：葡萄球菌的带菌及耐药问题；肺炎球菌的抗原结构 与分型；脑膜炎球菌与淋球菌的微生物学检查；化脓性球 菌感染的防治原则。 重点 1.葡萄球菌、链球菌、脑膜炎球菌的致病性。 2. SPA 3.致病性葡萄球菌的特点。 4.链球菌的分类。 5.脑膜炎球菌的微生物学检查法。 难点 1.SPA的主要性质及应用。 2.球菌的区别。 球菌（coccus） 又称化脓性球菌 根据革兰染色性分为 G+ 球菌 葡萄球菌、链球菌（A群链球菌、肺 炎链球菌）、肠球菌 G- 球菌 脑膜炎球菌、淋球菌 概述 1三种G+菌形态与染色 （一）生物学性状 典型呈葡萄串状 链球菌 肺炎（链） 双球菌 肺炎链球菌荚膜，4200 倍 链球菌，金属镀膜 ，12000倍 。 两种G+菌标本中的形态与染色 （一）生物学性状 葡萄球菌培养特性 v易培养：普通琼脂平板三种菌落 v血琼脂平板：金黄色葡萄球菌为完全透明溶血环 。 v 液体培养基：呈混浊生长 金葡：透明 溶血环 2链球菌培养特性 营养要求较高，在血琼 脂平板上生长良好。 v 不同种类的链球菌有不同的溶血现象, 且菌落多细小。 v 在液体培养基中易形成长链，呈絮状 沉淀。 乙链：乙型溶血（透明 溶血）（溶血） 溶 血 链球菌 葡萄球菌（staphylococcus） 最常见的化脓性细菌 2生化反应 v 触酶阳性。 u 致病菌能分解甘露醇,产酸不产气。（+ ） （一）生物学性状 4抗原结构 葡萄球菌A蛋白（staphylococal protein A, SPA ） 细胞壁表面的一种表面抗原。 意义：与人及哺乳动物的IgGFc非特异结合 协同凝集试验 抗吞噬 SPASPA IgGIgG Fc receptorFc receptor PHAGOCYTEPHAGOCYTE BACTERIUMBACTERIUM （一）生物学性状 5 分类（三种葡萄球菌的主要性状） 性状 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 腐生葡萄球菌 色素 金黄色 白色 白色或柠檬色 凝固酶 + - - 甘露醇 + - - 溶血素 + - - 耐热核酸酶 + - - SPA + - - 致病性 强 弱或无 无 根据有无凝固酶分类 凝固酶阳性菌（coagulase positive staphylococcus ,CPS） 凝固酶阴性菌（coagulase negitive staphylococcus ,CNS） （一）生物学性状 6抵抗力 无芽孢菌中抵抗力最强。 耐热 耐盐性强 对青霉素耐药率高 对龙胆紫敏感 （二）致病性 （1）血浆凝固酶（coagulase） 结合凝固酶 游离凝固酶 是金黄色葡萄球菌最重要的一种致病物质。 1致病物质：毒力因子为毒素和酶 Free coagulase: principle Rabbit/Humen sera factor + Coagulase fibrinogen fibrin （二）致病性 （2）葡萄球菌溶素（staphylolysin） 溶血素 （3）杀白细胞素（leukocidn) （4）肠毒素（enterotoxin)：食物中毒 某学校10名学生在学校附近小卖部购买香肠面包为早 餐，使用2小时后，先后出现低热、恶心、呕吐、腹 痛、腹泻、头晕、头疼等症状，呕吐较重。经抗感染 及补液和对症治疗后，病情迅速好转，所有患者于2 天痊愈，无死亡病例。采集剩余面包，应用ELISA技 术检测出经黄色葡萄球菌肠毒素。 思考题：1、引起本病的病因是什么？有什么依据？ 2、通过此事件我们应吸取什么教训？ （5）表皮剥脱毒素（exfoliative toxin, exfoliatin） ：烫伤样皮肤综合症 （6）毒性休克综合征毒素1（toxic shock syndrome toxin TSST1）： 毒性休克综合征 （7）其他酶类 （二）致病性 2.所致疾病 （1）侵袭性疾病 主要引起化脓性炎症。 皮肤软组织感染 多由金萄菌引起 内脏感染 主要由金黄色葡萄球菌引起。 全身感染 败血症、脓毒血症等。 主要由金黄色葡萄球菌引起。 （二）致病性 （2） 毒素性疾病 食物中毒 假膜性肠炎 即葡萄球菌性肠炎。 烫伤样综合症 由表皮剥脱毒素引起。 毒性休克综合征 主要由TSST1引起。 （三）免疫性 凝固酶阴性葡萄球菌（ CNS ） 泌尿系感染 细菌性心内膜炎 败血症 防治原则 防 注意 消毒隔离 注意 个人卫生 防止 医源性感染 防止 耐药性产生 治 抗菌素 药敏试验 自身菌苗疗法 链球菌属（streptococcus） 甲型溶血性链球菌和肺炎双球菌生化反应 甲型溶血性链球菌 肺炎链球菌（双球菌） 菊糖发酵实验 - +/- 胆汁溶菌实验 - + Bile-soluble Test(+) Bile-soluble Test(-) 荚膜 细胞壁 蛋白质 多糖 肽聚糖 细胞膜 细胞质 链球菌抗原结构 ： （一） 生物学性状 5分类 （1）根据溶血现象分类 l甲型溶血性链球菌 l乙型溶血性链球菌 l丙型链球菌 分20个群， A群 致病菌 (溶血性链球菌或 化脓性链球菌） 根据蛋白抗原 进一步分类 M抗原与致病性有关 荚膜 细胞壁 蛋白质 多糖 肽聚糖 细胞膜 细胞质 （1）根据抗原分类 ： 根据抗原结构分类 A群主要为乙型溶血。 故致病性链球菌为A群乙型溶血性链球 菌，或溶血性链球菌，又称化浓性链球菌。 6抵抗力 较低，青霉素是首选药物。 （二） 致病性 1致病物质 : 1) 外毒素 （1）溶血毒素（streptolysin） SLO（streptolysin O）: 链球菌溶血素O SLS（streptolysin S）: 链球菌溶血素S SLO: 破坏白细胞 对心肌有急性毒性作用 抗原性强： SLO抗体（抗“O”抗体） （链球菌感染的患者多可查到 SLO抗体 ） （二） 致病性 （2）致热外毒素（pyrogenic exotoxin） 特点：致热作用 细胞毒作用 增加动物对内毒素的敏感性 产生皮肤红疹 引起猩红热,曾称红疹毒素或猩红热毒素。 猩红热皮疹 （二） 致病性 2）侵袭性酶 （3）透明质酸酶 又名扩散因子。 （4）链激酶（streptokinase,SK） （5）链道酶（streptodornase,SD） 3）细胞壁成分： M蛋白： v 具有抗吞噬作用。 v 与心肌肌浆蛋白有共同抗原表位，故 与风湿性心肌炎有关。 LTA: 磷壁酸（teichoic acid） 革兰兰阳性菌的特殊组组分。 壁磷壁酸 磷壁酸 膜(脂)磷壁酸 磷壁酸是G+菌重要的菌体抗原,并 与细菌的粘附有关。 壁磷壁酸 膜磷壁 酸 （二） 致病性 2所致疾病 化脓性炎症 中毒性疾病 变态反应性疾病 （三） 免疫性 ASO Test (Ab Neutralization test)ASO Test (Ab Neutralization test) 1 2 3 4(Ag-c) 5(NS-c) N.S (ml) 0.9 0.5 0.5 0.5 0.75 Pt.serum 0.1 0.5 0.5 - - (1:20) 0.5(discard) Dilution 1:200 1:400 1:800 - - SLO 0.25 0.25 0.25 0.25 - 37 Incubation 15min 1%R. Rbc 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 37 Incubation 45min Result - - + + - 2.ASO Test (Ab Neutralization test)2.ASO Test (Ab Neutralization test) Principle Patient serum (AGN: Acute Glomerulonephritis) Acute Rheumatic fever (ARF) 37 15 + SLO 37 45 + Rbc(1% Rabbit blood cells) Procedure Result and significance （五）防治原则 肺炎链球菌（S. pneumoniae） 俗称肺炎球菌（Pneumococus） v可形成“脐窝状”菌落。 v自溶酶可被胆汁或胆盐活化。 （二）培养 （四）抗原构造 主 要 为 荚 膜 多 糖 抗 原。 （五）抵抗力 二 致病性 v主要的致病物质 荚膜 v所致疾病 主要引起细菌大叶性肺炎 、脑膜炎 三 免疫性 防治原则： 多价肺炎球菌荚膜多糖菌苗预防 治疗 抗生素 形态 排列 染色性 涂片染色镜检 挑取可疑菌落做相应实验 涂片染色 镜检 脓汁、痰、咽 拭子等标本 观察菌落特 点（色素、 溶血性等）血平板 分离培养 透明溶血：金葡或乙链 草绿色溶血：肺炎双球菌或甲链 不溶血：脑膜炎或淋病双球菌 【检验程序】 小猫试验 金葡菌（致病菌）微生物检查法 标本 脓汁，血液，剩余食物，呕吐物等 分离培养 （血平板） 血浆凝固酶 发酵甘露醇 耐热核酸酶 直接涂片镜检 革兰阳性葡萄球菌 生长现象 金黄色色素 溶血 环 生化反应 和致病物 质检测 毒素检查 药敏试验 A群链球菌微生物学检查法 标本 直接涂片镜检 革兰阳性链球菌 分离培养 脓汁，血液，咽喉拭子 与金葡菌的鉴别 与肺炎链球菌的鉴 别 血清学试验 抗链球菌溶血素O试验， 辅助诊断风湿病。 菊糖分解试验 胆汁溶菌试验 Optochin敏感试验 肺炎微生物检查法 直接涂片镜检： G+有荚膜的双球菌 分离培养 ： 与甲链鉴别 其他链球菌所致疾病 甲型溶血性链球菌 龋齿 亚急性细菌性心内膜炎 B群链球菌：新生儿肺炎、脑膜炎、败血症 D群链球菌：皮肤、肠道、上呼吸道、泌尿生殖道 的正常菌群 奈 瑟 菌 属 （一）脑膜炎奈瑟菌 俗称脑膜炎双球菌（meningococcus） ， 为流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）的病原体。 （二）淋病奈瑟菌 俗称淋球菌（gonococcus） 1生物学性状 （1）形态与染色 脑膜炎奈瑟菌 淋病炎奈瑟菌（革兰染色） （2）培养特性 营养要求较高-巧克力培养基 专性需氧，初次培养需要5%-10%CO2） 血平板上不溶血 （3）生化反应 脑膜炎奈瑟菌 淋病奈瑟菌 麦芽糖分解实验 + - 脑膜炎奈瑟菌 抵抗力- “三怕” 怕冷： 极低 怕热： 怕干燥： 脑膜炎奈瑟菌 致病性 2致病性和免疫性 （1）致病物质 荚膜 菌毛 内毒素：最重要的致病物质 （2）所致疾病 流行性脑脊髓膜炎 （3）免疫性 以体液免疫为主。 传染源：病人和带菌者 传播途径：飞沫。 脑膜炎奈瑟菌 鼻咽腔繁殖 繁殖入血 菌/败血症 中枢神经系统 主要侵犯脑脊髓膜 暴发型脑膜炎 微循环衰竭、内毒素休克、DIC 儿童和成人的脑膜炎症状儿童和成人的脑膜炎症状 症状不是同时发生 发热头痛 关节痛 呕吐颈项强直 痉挛嗜睡畏光 患儿，男，5岁。发热伴头痛，呕吐2天。服用退热药 及抗生素后，症状无改善，头痛加剧，自诉颈部痛， 烦躁。入院时喷射状呕吐，体温39，神志尚清。右 眼结膜及全身皮肤有针头至绿豆大小不等的红色出血 点，咽部充血，颈强直。脑脊液检查：外观混浊，白 细胞数量明显增加，以中性粒细胞为主。将脑脊液离 心沉淀后取沉渣涂片，革兰染色镜检，发现中心粒细 胞内外均有革兰阴性双球菌。 思考题： 1、引起本病最可能的病原菌是什么？还需做哪些微生 物学检查以确定诊断？进行微生物学检查时应注意什 么问题？ 2、该菌是如何传播的？所致疾病怎样进行特异性预防 ？ 4特异性防治 荚膜多糖菌苗。 磺胺类药物治疗疗效较好。 淋病奈瑟菌 致病性 致病物质致病物质 菌毛菌毛 脂多糖脂多糖 l与人细胞表面糖鞘脂分子结 构相似，这使淋球菌可逃避 机体免疫系统的识别 IgA1IgA1蛋白酶蛋白酶 l使细菌粘附粘膜上皮细胞表 面 淋球菌粘附淋球菌粘附 传播途径 性接触 所致疾病 男性主要为尿道炎 淋病 女性主要引起尿道炎、宫颈炎 婴儿淋病性眼结膜炎 免疫性 免疫不持久 患者，女，24岁。以外阴瘙痒，尿频、尿急、尿 痛，阴道分泌物多为主诉就诊。查体：阴道前庭 及宫颈粘膜充血、水肿，宫颈口糜烂，阴道内见 黄白色脓性分泌物，尿道口有脓性分泌物流出。 宫颈分泌物涂片见大量惰性核白细胞，细胞内见 革兰阴性双球菌，恭敬分泌PCR显示淋病奈瑟菌 阳性。 思考题： 1、该患者应诊断什么病？诊断的依据是什么？ 2、该病应如何预防？ Infant gonorrhea Infant gonorrhea (gonococcal ophthalmia) Purulent conjunctivitis (ophthalmia neonatorum) 微生物学检查法 标本用无菌棉拭沾取 直接涂片镜检 在中性粒细胞内发现有革兰阴性双球菌时，有诊断价值 分离培养与鉴定 标本采集后应注意保暖保湿，立即送检接种 子宫颈口表面分泌物 泌尿生殖道脓性分泌物 巧克力色平板，5-10% 二氧化碳 防治原则 防 开展防治性病的知识教育 防止不正当的两性关系 治抗生素 新生儿1%硝酸银滴眼。 肠球菌属 一、生物学特征 圆形或椭圆形，G+。呈双或短链排列 血平板培养 分类：粪肠球菌 屎肠球菌 二、致病性 1.致病物质：LTA和黏附素 2.所致疾病：院内感染 主要病原性球菌的生物学性状 名 称 形态与染色 培养特性 抵 抗 力 金黄色 G+成堆排列 营养要求不高 金 抵抗力强于其他 葡萄球菌 黄色菌落，透明溶 无芽胞菌 血环 乙型溶血 G+ 链状排列 营养要求高，茵落 不强 性链球菌 细小，透明溶血环 肺炎链 G +矛头状， 营养要求高 菌落细 弱 球菌 成双排列 小，草绿色溶血环 脑膜炎 G 肾形 成双排 营养要求高，巧克 弱 对干燥、 奈氏茵 列，常位于中 力色培养基，露滴 寒冷、热、紫外 性粒细胞内 状茵落 线等敏感 主要病原性球菌的致病性 名 称 致病物质 所致疾病 金黄色 血浆凝固酶、 局部或全身化脓性 葡萄球菌 溶血素、肠毒素、 感染 杀白细胞素、 毒素性疾病：食物 表皮剥脱毒素、 中毒、毒性休克综 毒性休克综合征 合征、烫伤样皮肤 毒素一1 综合征、假膜性 肠炎 名 称 致病物质 所致疾病 乙型溶血 M蛋白、溶 局部或全身化脓 性链球菌 血素、致热外 感染 毒素、明质酸酶、毒素性疾病：猩红热 链激酶、链道酶 超敏反应性疾病：风 湿热、急性肾小球 肾炎 名 称 致病物质 所致疾病 肺炎链球茵 荚膜等 大叶性肺炎等 脑膜炎奈瑟菌 内毒素、 流行性脑脊髓膜 荚膜、菌毛 炎（流脑） 淋病奈瑟菌 内毒素、外 淋病、新生儿淋球 菌 荚膜、菌毛 性结膜炎 院。患儿子入院前一月。g后沟处长一小疖子，曾用手 挤压数次。约三周前，小疖子肿大发红。后者曾涂土 霉素、感胺药膏均不见效。二周前，颈部、手臂、腿 部有小脓揭出现。近一周开始发冷发热，消瘦，病情 加重急症入院。体查；重病容，消瘦，营养较差，神 志不清颈后部、左臂内侧、腋下及左下腿均有23 厘米大的数个脓肿，红肿；触之有痛感少数脓肿已 破溃，少数有波动感。体温40t。化验检查；白细胞总 数1划0O（中性粗钢胞刘扬，淋巴细胞u畅，大单核细 胞5畅），穿刺取脓汁涂片，染色镜检有大量脓细胞， 并有革兰氏阳性，呈不规则排列的球菌。 病案思考题： I你认为该患者患何病？是怎样引起的，病原是什 么？ 2对该患者如何取材作病原菌的分离与鉴定，如何 选用敏感抗生素进行治疗？ 病案2儿，男，见岁。因发热、限睑浮肿、血尿入院。患 儿于幼年常有咽喉痛、”发热等症。曾因心脏有杂音卧床近 一月。入院前三周，患儿又有咽喉痛、发热等症。经注射 青霉素数日后症状消失。但于入院前二日突然高热，限睑 浮肿；并伴有血尿，故急诊入院。体查：体温39t，血压稍 高，心脏有杂音。化验检查：尿中有红细胞（“y），颗粒 省型35抗溶血毒素Q抗体试验为85单位。细菌学检查； 血、尿培养均阴性。患者用青霉素治疗后，浮肿消退，但 愿中仍有红细胞 病案思考题： 初步诊断是何病？发病机理如何。 一、名词解释 1、葡萄球菌蛋白A 2血浆凝固酶 3、抗链球菌溶血素O试验 4、致热外毒素 二、问答题 1葡萄球菌、链球菌引起的局部化脓性感染 各有何特点？为什么？ 2简述脑膜炎球菌的致病性。 3如何鉴定金黄色葡萄球菌? 4淋球菌的感染方式及所致疾病有何特点？ 5简述抗“O”试验的原理及意义。 6金黄色葡萄球菌的致病因素及所致疾病有 哪些? 7A群链球菌的致病物质及所致疾病有哪些？ 8、分述B群链球菌和D群链球菌的致病特点。 脑膜炎球菌致病过程脑膜炎球菌致病过程 病原菌病原菌 鼻咽部鼻咽部 菌菌/败血症败血症 发热反应发热反应 流行性脑脊髓膜炎流行性脑脊髓膜炎 空气空气 侵入血流侵入血流 释放内毒素释放内毒素 突破血脑屏障突破血脑屏障 淋病奈瑟菌（N. gonorrhoeae） 革兰阴性双球菌 似一对咖啡豆 有菌毛，有荚膜 专性需氧， 巧克力（色）血琼脂平板 培养特性 形态与染色 生化反应 抵抗力 与脑膜炎奈瑟菌类似 对热、冷、干燥和消毒剂极度敏感 菌毛 外膜蛋白 IgA1蛋白酶 淋病 人类是淋病奈瑟菌的唯一宿主。 主要通过性接触引起泌尿道和生殖系统炎症 新生儿 淋菌性结膜炎 新生儿由产道感染 致病物质所致疾病 人类对淋病奈瑟菌的感染无天然抵抗力 免疫力不持久 免疫性 重点 1.球菌根据革兰染色性不同的分类。 2.金黄色葡萄球菌、链球菌、脑膜炎球菌、肺炎 球菌的致病性。 3. SPA 4.致病性葡萄球菌的特点。 5.链球菌的分类。 6.如何鉴别甲型溶血性链球菌和肺炎球菌。 7.脑膜炎球菌的培养特性和微生物学检查法。 Staphylococcus Staphylococcus aureus in septicemiaaureus in septicemia Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus in pusin pus SPASPA协同凝集试验协同凝集试验 l【SPA+特异性抗体】SPA诊断血清 lSPA诊断血清临床标本中未知抗原的快速诊 断（脑膜炎球菌荚膜多糖抗原；淋病球菌痢疾 杆菌O抗原；伤寒杆菌O抗原等可溶性抗原） 出现颗粒状凝集为阳性 l化脓性疾病 局部皮肤及皮下组织感染 l丹毒、蜂窝组织炎、淋巴 管炎等 其它系统感染 l化脓性扁桃体炎 l猩红热 l变态反应性疾病 风湿热 急性肾小球肾炎 2.所致疾病 Bacitracin Susceptibility Test Pyogenic streptococcus(S) Strep. Pneumoniae in sputumStrep. Pneumoniae in sputum 抗原构造抗原构造 capsule polysaccharide (teichoic acid) SPA SPASPA协同凝集试验协同凝集试验 用已知的标准血清 吸附到SPA菌的表面， 使之成为吸附抗体载体 ，再以此去诊断相应的 未知抗原而产生肉眼可 见的凝聚颗粒。 诊断的抗原可以是 颗粒性的，也可以是可 溶性的。 SPASPA（staphylococcal protein Astaphylococcal protein A） SPASPA IgGIgG Fc receptorFc rec